初步構建與評估遞送柚皮素的RGD外泌體

［摘要］" 目的： 本研究旨在制備生物合成納米載體遞送柚皮素（naringenin，Ng），并研究其對乳腺癌的體外抑瘤效果。方法： 使用精氨酸甘氨酸天冬氨酸前列腺素F2受體陰性調節因子綠色熒光蛋白（Arg-Gly-Asp-prostaglandin F2 receptor negative regulator-green fluorescent protein，RGD-P-G）質粒進行轉染，構建分泌RGD-P-G外泌體（RGD-P-G-Exosomes，RGD-P-G-Exo）的293F細胞。通過超速離心收集293F細胞上清液中的RGD-P-G-Exo，加入Ng，并通過水浴超聲促使RGD-P-G-Exo包封Ng，形成RGD-P-G-Exo@Ng。使用熒光顯微鏡對轉染RGD-P-G的293F細胞進行鑒定。通過透射電子顯微鏡、納米顆粒跟蹤分析技術、蛋白質免疫印跡等方法對RGD-P-G-Exo@Ng的形貌、粒徑、標志物和綠色熒光蛋白（GFP）表達情況進行表征。采用紫外分光光度法評估包封率和載藥量。通過細胞攝取實驗評估納米藥物被吞噬攝取的效果。通過CCK-8法檢測Exo@Ng和RGD-P-G-Exo@Ng對乳腺癌MDA-MB-231細胞的殺傷能力。結果： 電鏡結果顯示RGD-P-G-Exo@Ng呈茶托狀結構，納米顆粒追蹤分析技術顯示RGD-P-G-Exo@Ng粒徑主要分布在147.0 nm。蛋白免疫印跡結果表明RGD-P-G-Exo@Ng表達CD9、CD63等外泌體標志物和GFP，證明RGD-P-G-Exo的構建成功。RGD-P-G-Exo@Ng納米藥物的包封率為（28.1±0.6）%，載藥量為（6.0±0.1）%。在高濃度下，Exo及RGD-P-G-Exo對MDA-MB-231細胞的存活率無顯著影響，具有良好的生物相容性。在細胞攝取實驗中，與Exo@Ng相比，RGD-P-G-Exo@Ng具有更強的細胞攝取效果（Plt;0.05）。藥效實驗中，Exo@Ng和RGD-P-G-Exo@Ng均表現出濃度依賴性的MDA-MB-231細胞毒性，其中RGD-P-G-Exo@Ng比相同濃度的Exo@Ng具有更強的細胞殺傷能力（Plt;0.05）。結論： 本研究初步合成了一種用于靶向遞送Ng的納米藥物，為開發生物納米靶向腫瘤藥物遞送系統提供了新的策略。

［關鍵詞］" 乳腺癌；精氨酸甘氨酸天冬氨酸；前列腺素F2受體陰性調節因子；外泌體；柚皮素

［中圖分類號］" R944.9" ［文獻標志碼］" A" ［文章編號］" 1671-7783（2024）05-0407-07

DOI： 10.13312/j.issn.1671-7783.y230246

［引用格式］馮玘， 劉洪峰. 初步構建與評估遞送柚皮素的RGD外泌體［J］. 江蘇大學學報（醫學版）， 2024， 34（5）： 407-413.

［基金項目］安徽省教育廳重點項目（2022AH053142）；校級科研項目（WZK201906）

［作者簡介］馮玘（1989—），男，博士，講師，主要從事藥理學和生物藥劑學研究；劉洪峰（通訊作者），主任藥師，E-mail： 418825724@qq.com

Preliminary construction and evaluation of RGD exosomes for delivering naringin

FENG Qi1， LIU Hongfeng2

（1. Department of Pharmacy， North Anhui Health Vocational College， Suzhou Anhui 234000; 2. Department of Pharmacy， Suzhou Municipal Hospital Affiliated to Anhui Medical University， Suzhou Anhui 234000， China）

［Abstract］" Objective： To prepare biosynthetic nanocarriers to deliver naringenin （Ng） and to investigate its in vitro tumor-suppressive effect on breast cancer. Methods： 293F cells secreting Arg-Gly-Asp-prostaglandin F2 receptor negative regulator-green fluorescent protein exosomes （RGD-P-G-Exo） were constructed by transfection using Arg-Gly-Asp-prostaglandin F2 receptor negative regulator-green fluorescent protein （RGD-P-G） plasmid. The nanomedicine （RGD-P-G-Exo@Ng） was prepared by collecting RGD-P-G-Exo in the supernatant by ultracentrifugation， adding Ng， and inducing the RGD-P-G-Exo to encapsulate the Ng by sonication in a water bath. 293F cells transfected with RGD-P-G were characterized using fluorescence microscopy. The morphology， particle size， markers and green fluorescent protein （GFP） expression of RGD-P-GFP-Exo@Ng were characterized by transmission electron microscopy， nanoparticle tracking analysis technique and protein immunoblotting. The encapsulation rate and drug loading capacity were assessed by UV spectrophotometry. Phagocytic uptake of the nanodrugs was assessed by cellular uptake assay. The killing ability of Exo@Ng and RGD-P-G-Exo@Ng on MDA-MB-231 cells was detected by CCK-8 assay. Results： Electron microscopy revealed a cup-like structure of RGD-P-G-Exo， with a particle size of 147.0 nm according to nanoparticle tracking analysis. Immunoblotting confirmed the surface expression of exosome markers （CD9， CD63） and GFP on RGD-P-G-Exo， validating the successful construction of RGD-P-G-Exo. The encapsulation efficiency of RGD-P-G-Exo@Ng was （28.1±0.6）%， and the drug loading content was （6.0±0.1）%. At high concentrations， Exo and RGD-P-G-Exo had no significant effect on the viability of MDA-MB-231 cells with good biocompatibility. In the cellular uptake assay， the RGD-P-G-Exo@Ng group had a stronger cellular uptake effect compared with the Exo@Ng group （Plt;0.05）. In the pharmacodynamic assay， both Exo@Ng and RGD-P-G-Exo@Ng groups exhibited concentration-dependent cytotoxicity in MDA-MB-231 cells， in which the RGD-P-G-Exo@Ng group possessed a stronger cell-killing ability compared with the same concentration of Exo@Ng group （Plt;0.05）. Conclusion： In this research， a nanoparticle for targeted delivery of Ng was initially synthesized， providing a new tool for the development of bio-nanotargeted tumor drug delivery systems.

［Key words］" breast cancer; Arg-Gly-Asp; prostaglandin F2 receptor negative regulator; exosome; naringenin

乳腺癌是威脅女性健康的主要疾病，據2022年國際癌癥研究機構（IARC）調查的數據顯示，乳腺癌的發病率超過25%，其中發展中國家發病率超過50%［1］。柚皮素（naringenin，Ng）是一種廣泛存在于蕓香科植物中的二氫黃酮類化合物，具有抗氧化、抗腫瘤與抗炎等活性［2］。最近的研究已經證明Ng能夠抑制乳腺癌細胞增殖、調控細胞周期、使細胞周期阻滯于G1期，并誘導細胞的凋亡［3］。但Ng溶解度較低，使藥物難溶出、從而降低生物利用度［4］。近年來為了提高Ng溶解度、改善吸收，研究者已開發出脂質體、納米乳與納米凝膠等劑型提高藥物溶解度以提高療效［5-6］。但人工合成的納米載體存在靶向性不足與免疫原性高易被免疫系統清除等缺陷而限制了其應用［7］。外泌體（exosomes，Exo）是一類由細胞分泌的納米級胞外囊泡，與其他藥物載體相比，具有生物相容性高、生物可降解性和免疫原性低等優勢［8-9］。將蛋白質或多肽類融合到具有高Exo分選能力的支架蛋白中是目前一種新型和強大的貨物裝載遞送策略。例如，前列腺素F2受體陰性調節因子（prostaglandin F2 receptor negative regulator-green fluorescent protein，P）是一種在外泌體膜上大量表達的膜蛋白［10］，Lewis等［11］通過P膜蛋白融合IL-12，以P為支架搭載遞送IL-12，發揮抑制腫瘤的作用。RGD肽含有的精氨酸甘氨酸天冬氨酸（Arg-Gly-Asp）三肽結構能夠與整合素αvβ3特異性結合，是重要的細胞識別位點，而乳腺癌細胞表面存在高表達的αvβ3整合素［12-13］。外源性RGD肽不僅能夠抑制腫瘤細胞黏附和侵襲，促進腫瘤細胞凋亡，還能與抗腫瘤藥物或其載體連接、提高藥物靶向性，被廣泛用于腫瘤靶向遞送［14-15］。因此，表面修飾RGD肽是靶向抑制腫瘤細胞的重要策略。但傳統的化學修飾效率有限［16］。本研究通過構建P編碼序列與RGD肽融合構建RGD-P-G跨膜蛋白融合質粒，導入293F細胞中，然后分泌具有靶向性的外泌體（RGD-P-G-Exo），通過RGD-P-G-Exo與Ng水浴超聲獲得生物合成的納米靶向藥物RGD-P-G-Exo@Ng，為Ng更好地應用于臨床治療乳腺癌提供理論依據。

1" 材料與方法

1.1" 主要材料與試劑

293F細胞、乳腺癌MDA-MB-231細胞株（中國科學院上海細胞庫）；Ng（上海麥克林生化科技股份有限公司）；DMEM、氨芐西林（大連美侖生物技術有限公司）；0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液、293F培養基（美國Gibco公司）；胎牛血清（浙江天航生物科技有限公司）；青霉素鏈霉素溶液慶大霉素、BCA蛋白定量試劑盒、辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG（江蘇碧云天生物技術公司）；質粒RGD-P-G（上海吉凱基因醫學科技股份有限公司）；無內毒素質粒檢測試劑盒（天根生化科技有限公司）；LB培養基干粉（默克）；轉染試劑Lipo3000，DiD紅色熒光染料，CD63、CD9、Calnexin、綠色熒光蛋白（GFP）抗體（美國Thermo Fisher公司）。

1.2" 細胞培養

將293F細胞、乳腺癌MDA-MB-231細胞凍存管從-80 ℃冰箱中取出，置于37 ℃恒溫水浴箱中迅速復溫解凍，將解凍后的凍存液吸入含培養基的離心管中，900 r/min、離心4 min，重懸沉淀后移入培養瓶，293F細胞置于37 ℃、8%CO2振蕩培養箱培養，MDA-MB-231細胞置于37 ℃、5%CO2培養箱培養。

1.3" RGD-P-G-Exo@Ng納米藥物的構建

1.3.1" 提取融合質粒RGD-P-G" 取菌液1 mL，轉入裝有200 mL的含有氨芐西林的LB液體培養基中，過夜，按照試劑盒說明書操作，提取融合質粒RGD-P-G。

1.3.2" RGD-P-G-Exo的提取" 取100 μg的RGD-P-G與轉染試劑Lipo3000 20 μL加入10 mL細胞密度為2×106/mL的293F細胞中，轉染72 h收集細胞上清液，然后在4 ℃下按照300×g（10 min），2 000×g（10 min），10 000×g（30 min）離心取上清液，最后以100 000×g（70 min）離心2次，收獲沉淀重懸得RGD-P-G-Exo。

1.3.3" 熒光顯微鏡觀察細胞轉染效率" 取“1.3.2”項下轉染的293F細胞，按照試劑盒說明書，取100 μg的RGD-P-G與20 μL轉染試劑Lipo3000加至10 mL細胞密度為2×106/mL的293F細胞中，轉染48 h，熒光顯微鏡觀察轉染效率。

1.3.4" 納米流式檢測RGD-P-G-Exo的陽性率" 取“1.3.2”項下收集的RGD-P-G-Exo 50 μL，稀釋為107～109顆粒數/mL，上機進行納米流式檢測GFP標簽蛋白的標記率。

1.3.5" 制備RGD-P-G-Exo@Ng" 利用BCA定量試劑盒測定制備的RGD-P-G-Exo的總蛋白濃度。按照一定質量比（6∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4、1∶6）將RGD-P-G-Exo（1 μg/μL）和Ng混合，水浴超聲（功率20 W，超聲1 min，循環6次，循環間隔2 min），經超聲處理的混合物于37 ℃靜置0.5 h，4 ℃靜置1 h，以恢復外泌體膜結構。然后使用分子截留量100 kD超濾管，重復3次，去除游離的Ng，得到RGD-P-G-Exo@Ng，同時重復步驟制備對照組Exo@Ng。

1.4 "納米藥物的表征

1.4.1" 納米顆粒跟蹤分析檢測Exo、Exo@Ng與RGD-P-G-Exo@Ng粒徑和濃度" Exo、Exo@Ng與RGD-P-G-Exo@Ng三種樣品分別通過渦流混合，PBS稀釋，采用高靈敏度相機進行捕獲，每個視野調整為20～40個顆粒，使用納米顆粒跟蹤分析3.2 Dev Build 3.2.16軟件Malvern分析Exo、Exo@Ng與RGD-P-G-ExoExo@Ng的粒徑分布與濃度。

1.4.2" 透射電鏡檢測Exo、Exo@Ng與RGD-P-G-Exo@Ng的形貌" 分別取10 μL提取的Exo與制備得到的適宜濃度Exo@Ng與RGD-P-G-Exo@Ng的溶液，滴加在200目有碳支持膜的銅網上，常溫放置2 h，干燥后用透射電子顯微鏡觀察樣品的結構。

1.4.3" 蛋白免疫印跡檢測外泌體的特異性蛋白及GFP蛋白" 將Exo、RGD-P-G-Exo及轉染RGD-P-G-Exo的293細胞提取蛋白后，按一定比例與上樣緩沖液混合均勻，95 ℃加熱5 min使蛋白變性。冷卻至室溫，取適量蛋白樣品先用SDS-PAGE分離（先75 V、30 min，后100 V、60 min），然后轉移至PVDF膜上。用快速封閉液在室溫下封閉膜30 min，TBST洗滌后分別于CD63、CD9、Calnexin及GFP抗體溶液（1∶1 000）中4 ℃孵育過夜，TBST洗滌3次后，加入辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG（1∶2 000）室溫下孵育2 h，使用增強型化學發光試劑盒檢測蛋白表達。

1.5" RGD-P-G-Exo@Ng的制劑學評價

1.5.1" 檢測波長的確定" 通過紫外分光光度法測定Ng的含量，稱取一定量的Ng，用乙腈稀釋至適宜的濃度，紫外分光光度計200～600 nm進行掃描。

1.5.2" 標準曲線的制備" 精密稱取5 mg的Ng，用乙腈定容于50 mL的容量瓶中配制成100 μg/mL的溶液，分別取一定量母液，定容于10 mL容量瓶中稀釋成1、2、4、8、10、12、16 μg/mL的Ng標準工作液。用紫外分光光度計測定標準工作液在284 nm波長處的光密度（D），并繪制標準曲線。

1.5.3" 包封率與載藥量的測定" 按“1.3.5”所述方法制備出RGD-P-G-Exo@Ng，將所得RGD-P-G-Exo@Ng超速離心（4 ℃，100 000×g，70 min），收集上清液中未包封的Ng。用紫外分光光度計測定上清液在284 nm波長處的D值，根據Ng溶液的標準曲線，計算出游離藥物質量。按以下公式計算包封率（EE）和載藥量（DLC）。

EE（%）=（Wtotal-Wfree）/Wtotal×100%（1）

DLC（%）=（Wtotal-Wfree）/Ntotal×100%（2）

注：Wtotal是系統中的Ng總質量；Wfree是溶液中游離的Ng質量；Ntotal是Ng與RGD-P-G-Exo的總質量。

1.6" RGD-P-G-Exo@Ng的體外評價

1.6.1" 納米載體的生物相容性考察" 將對數生長期的MDA-MB-231細胞以每孔5×103個密度接種到96孔板中（每孔100 μL），培養24 h后棄去舊培養基，將含不同濃度Exo、RGD-P-G-Exo（0、20、40、80、120、160、200 μg/mL）的DMEM無血清培養基各取100 μL加入96孔板中。繼續培養24 h后，每孔加入10 μL CCK-8試劑，于37 ℃培養箱中孵育1 h后，酶標儀測450 nm處D值，按照公式計算細胞存活率。

細胞存活率（%）=（D實驗-D空白）/（D對照-D空白）×100%（3）

1.6.2" MDA-MB-231細胞對RGD-P-G-Exo@Ng的吞噬攝取實驗" 取適量DiD熒光染料添加到載藥修飾的Exo中，置37 ℃避光孵育1 h標記Exo@Ng、RGD-P-G-Exo@Ng，得到DiD-Exo@Ng和DiD-RGD-P-G-Exo@Ng。將MDA-MB-231細胞以5×104的密度接種于共聚焦小皿中，培養過夜，待細胞融合至70%時，吸去培養基，將DiD-Exo@Ng和DiD-RGD-P-G-Exo@Ng與MDA-MB-231細胞共孵育4 h，PBS洗3遍，4%多聚甲醛室溫固定15 min，PBS洗3遍，Hoechst33258室溫染色5 min，PBS洗3遍，立即至共聚焦顯微鏡下觀察。

1.6.3" RGD-P-G-Exo@Ng對MDA-MB-231細胞的體外毒性實驗" 通過CCK-8研究Exo@Ng、RGD-P-G-Exo@Ng對MDA-MB-231細胞的毒性。將MDA-MB-231細胞接種在96孔板（5×103細胞/孔）培養24 h。棄去舊的培養基，將含有不同濃度Ng（0、20、40、80、120、160、200 μg/mL）的Exo@Ng與RGD-P-G-Exo@Ng培養基溶液每孔100 μL加到96孔板中，繼續培養24 h后每孔加入10 μL CCK-8試劑，于37 ℃培養箱中孵育1 h后在450 nm處測D值。計算細胞存活率。

1.7" 統計學分析

數據采用OriginPro 2021軟件進行統計學分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組均數比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用SNK-q檢驗。Plt;0.05表示差異有統計學意義。

2" 結果

2.1" RGD-P-G-Exo的構建及鑒定

2.1.1" 熒光顯微鏡對293F細胞轉染RGD-P-G質粒的鑒定" RGD-P-G轉染結果如圖1所示，293F細胞可見表達明亮的綠色GFP熒光，半定量分析轉染效率高達90.2%。結果表明，RGD-P-G成功轉染至293F細胞上。

2.1.2" 納米流式檢測外泌體RGD-P-G表達" 結果如圖2所示，納米流式檢測外泌體GFP熒光表達情況，結果表明293F細胞分泌的外泌體表達RGD-P-G，陽性率達到36.0%，表明RGD高效地跟隨跨膜蛋白P分選整合到外泌體上。

2.2" RGD-P-G-Exo@Ng的構建及表征

2.2.1" Exo、Exo@Ng和RGD-P-G-Exo@Ng的粒徑分布" 結果如圖3所示，Exo的粒徑為140.0 nm，Exo@Ng為144.0 nm，RGD-P-G-Exo@Ng為147.0 nm。Exo@Ng和RGD-P-G-Exo@Ng的粒徑在藥物加載后略有增加，尺寸的變化可能與RGD-P-G和Ng融入Exo的脂質雙分子層有關，這可能是由于疏水作用引起的表面吸附。

2.2.2" Exo、Exo@Ng和RGD-P-G-Exo@Ng的形貌考察" 透射電鏡結果顯示，Exo、Exo@Ng與RGD-P-G-Exo@Ng三者的形態完整，呈經典的茶托狀結構，顆粒分散良好，背景清晰（圖4）。表明整個過程溫和，未明顯破壞RGD-P-G-Exo@Ng結構。

2.2.3" 蛋白免疫印跡檢測RGD-P-G-Exo標志物" 結果如圖5所示，所提取的Exo與RGD-P-G-Exo能夠表達CD63、CD9外泌體標志蛋白，同時不表達細胞內容物Calnexin，表明提取得到符合要求的外泌體產物。其次，Exo不表達GFP蛋白，轉染RGD-P-G的293F細胞與RGD-P-G-Exo表達GFP蛋白，表明RGD-P-G的成功轉染與表達，并隨著Exo的產生，被分選裝入Exo。

a：Plt;0.01，與Exo組比較

2.3" RGD-P-G-Exo@Ng制劑學評價

2.3.1" Ng檢測波長的確定" 紫外可見分光光度計掃描200～600 nm波長范圍內紫外吸收，結果如圖6所示，確定紫外吸收峰在284 nm處。

2.3.2" Ng標準曲線的建立" 如圖7所示，Ng的標準曲線為Y=0.073 3X+0.001 8，R2=0.999 1，Ng的濃度在0～16 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.3.3" RGD-P-G-Exo@Ng載藥量和包封率的測定" 圖8為不同RGD-P-G-Exo和Ng質量比制備的RGD-P-G-Exo@Ng的包封率和載藥量，隨著Ng加入量的增加，RGD-P-G-Exo@Ng 的載藥量逐漸增加，包封率下降明顯，但由于Exo載藥有限，載藥量增加到一定程度后幾乎不變。因此設置不同投藥比，結果表明RGD-P-G-Exo總蛋白含量與Ng的質量比為1∶1時，具有較高的包封率和載藥量，分別為（28.1±0.6）%和（6.0±0.1）%，因此選擇此投藥比進行后續實驗。

2.4" RGD-P-G-Exo@Ng的體外抗腫瘤效果

2.4.1" 載藥外泌體的生物相容性" 結果如圖9所示，在測試的所有濃度中，細胞的存活率均在95%以上，細胞增殖情況未受明顯影響，表明Exo與RGD-P-G-Exo對MDA-MB-231細胞具有良好的相容性。

2.4.2" RGD-P-G-Exo@Ng的細胞攝取實驗" 結果如圖10所示，圖中藍色熒光為Hoechst33258標記的細胞核，紅色熒光為DiD標記的Exo@Ng、RGD-P-G-Exo@Ng，紅色熒光能反映出細胞攝取的情況。MDA-MB-231細胞對Exo@Ng的攝取較弱，而經過RGD-P-G修飾后，細胞攝取RGD-P-G-Exo@Ng作用增強（Plt;0.05）。

a：Plt;0.05，與Exo@Ng比較

2.4.3" RGD-P-G-Exo@Ng體外抗腫瘤評價" 結果如圖11所示，與Exo@Ng相比，RGD-P-G-Exo@Ng對MDA-MB-231細胞表現出更強的細胞毒性，差異有統計學意義（Plt;0.05）。表明RGD-P-G-Exo@Ng相較于Exo@Ng在體外對乳腺癌細胞的增殖具有更強的抑制效果。

a：Plt;0.05，與Exo@Ng比較

3" 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，而原發病灶的轉移是導致乳腺癌患者高死亡率的主要原因。癌細胞的遷移能力與癌癥的轉移密切相關，其中整合素αvβ3在乳腺癌細胞中表達較高，同時在調節腫瘤的生長、局部侵襲和遷移能力等方面發揮著關鍵作用［17］。RGD肽與整合素αvβ3特異性結合，對腫瘤細胞具有靶向性［18］。研究表明，采用納米藥物結合多肽介導的腫瘤靶向制劑可以提升藥物進入腫瘤細胞的劑量，從而提高腫瘤治療效果［19］。作為外泌體表面大量表達的Ⅰ型膜蛋白，支架蛋白P可作為外泌體膜上顯示RGD肽的支架［20］。外泌體具有較高的生物相容性、物質負載能力以及一定的靶向歸巢能力，因此被視為藥物分子的理想載體［21］。通過表面修飾能夠被腫瘤細胞迅速識別的RGD肽，可以提高載藥系統對腫瘤細胞的靶向性。這樣的載體與Ng的聯合應用在一定程度上解決了Ng水溶性差等問題，從而增強了Ng的治療效果。

本研究成功將RGD-P-G質粒轉染至293F細胞中，轉染率高達90.2%。納米流式檢測結果顯示成功獲得了RGD-P-G標記的外泌體，陽性率達到了36.0%。免疫印跡分析進一步證實了RGD-P-G-Exo表達了外泌體標志蛋白CD9、CD63和GFP。本研究證實提取到符合要求的RGD-P-G-Exo。表征結果顯示，超聲載藥處理后的外泌體在形態和功能上并無明顯差異，但修飾載藥后的粒徑逐漸增大。同時，RGD-P-G-Exo@Ng的藥物載藥量達到了（6.0±0.1）%。體外細胞毒性實驗結果顯示，RGD-P-G-Exo@Ng成功遞送Ng至腫瘤細胞，相較于Exo@Ng顯著抑制了乳腺癌細胞的生長。與Exo@Ng相比，RGD-P-G-Exo@Ng增強了藥物系統對腫瘤細胞的靶向性，優化了治療效果。但是，本研究局限于體外水平的驗證，缺乏對體內動物水平進一步的系統性評價。因此，并不能確定在體內的穩定性和靶向遞送效果。

綜上所述，本研究初步構建了一種生物合成納米給藥系統，通過構建RGD-P-G-Exo遞送系統，成功實現了對Ng的高效遞送，為Ng在乳腺癌治療中的應用提供了一種新的可行途徑。

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［收稿日期］" 2023-11-27" ［編輯］" 郭" 欣