基于網絡毒理學及實驗驗證探討檳榔對口腔黏膜下纖維化的影響

〔摘要〕 目的 基于網絡毒理學方法和體內實驗驗證探討檳榔對口腔黏膜下纖維化的影響及作用機制。方法 通過TCSMP和Swiss數據庫篩選檳榔潛在活性成分對應靶點，利用GeneCards、Disgenet數據庫得到口腔黏膜下纖維化（oral submucosal fibrosis， OSF）疾病相關靶點。將交集靶點上傳至STRING數據平臺構建蛋白質-蛋白質相互作用（protein-protein interaction， PPI）網絡，再采用Metascape數據平臺進行基因本體（gene ontology， GO）功能和京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes， KEGG）通路富集分析。采用檳榔水提取液低、中、高濃度干預大鼠口腔黏膜，大鼠開口度、病理形態學、免疫組織化學等檢測對網絡毒理學結果進行驗證。結果 網絡毒理學結果表明檳榔52個成分中含有587個相關靶點，OSF相關靶點761個，二者交集靶點72個。PPI網絡分析結果顯示，白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor， TNF）、基質金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9， MMP-9）、細胞凋亡調節因子Bcl-2（apoptosis regulator Bcl-2， BCL2）、表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor， EGFR）、細胞腫瘤抗原p53（cellular tumor antigen p53， TP53）可能是檳榔影響OSF的關鍵靶點。KEGG通路富集分析獲得PI3K-Akt信號通路、AGE-RAGE信號通路、松弛素信號通路、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥等信號通路。動物實驗結果顯示，中、高劑量組開口度值較對照組、低劑量組差異有統計學意義（Plt;0.05），HE染色、Masson染色表明中、高劑量組出現不同程度的纖維化病變，免疫組織化學結果提示檳榔水提取液上調IL-6、TNF-α等炎性因子，且呈一定的劑量相關性。結論 檳榔可能通過上調IL-6、TNF-α等關鍵炎性因子以介導炎癥反應誘導口腔黏膜下纖維化的發生。

〔關鍵詞〕 檳榔;口腔黏膜下纖維化;網絡毒理學;實驗驗證;炎癥反應;病理形態學

〔中圖分類號〕R285.5" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2024.08.014

Effects of betel nut on oral submucosal fibrosis based on network toxicology and experimental verification

ZENG Fanzuo1， OUYANG Yin1， CHEN Bowei1， LIU Zhenkui2， YI Jian1， LIU Yingfei1， TIAN Fengming1， NING Wanling1， YANG Luning1， LIU Baiyan3*

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Liaoning University of Chinese Medicine， Shenyang， Liaoning 110847， China; 3. Hunan Academy of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410013， China

〔Abstract〕 Objective To investigate the effects of betel nut on oral submucosal fibrosis （OSF） and its mechanism of action based on network toxicology and in vivo experimental verification. Methods Targets corresponding to the potential active ingredients of betel nut were screened through TCSMP and Swiss databases， and OSF-related targets were obtained using GeneCards and Disgenet databases. The intersection targets were uploaded to the String data platform to construct a protein-protein interaction （PPI） network， and then the Metascape data platform was used to perform gene ontology （GO） function and Kyoto encyclopedia of genes and genomes （KEGG） pathway enrichment analyses. The oral mucosa of rats was treated with the aqueous extract of betel nut at low， medium， and high concentrations respectively， and the results of network toxicology were verified by the measurement of mouth opening degree， pathomorphological examination， and immunohistochemical analysis in the rats.. Results The network toxicology analysis showed that there were 587 related targets in the 52 ingredients of betel nut and 761 OSF-related targets， of which there were 72 intersection targets. PPI network analysis indicated that interleukin-6 （IL-6）， tumor necrosis factor （TNF）， matrix metalloproteinase-9 （MMP-9）， apoptosis regulator Bcl-2 （BCL2）， epidermal growth factor receptor （EGFR）， and cellular tumor antigen p53 （TP53） may be the key targets of betel nut affecting OSF. PI3K-Akt， AGE-RAGE， and relaxin signaling pathways， EGFR tyrosine kinase inhibitor resistance and other signaling pathways were obtained by KEGG pathway enrichment analysis. The animal experiments showed that the mouth opening degrees of the medium- and high-dose groups were significantly different from those of the control group and low-dose group （Plt;0.05）. HE staining and Masson staining showed that the medium- and high-dose groups had different degrees of fibrotic lesions. Immunohistochemical analysis suggested that the aqueous extract of betel nut upregulated the levels of inflammatory factors such as IL-6 and TNF-α， and this upregulation exhibited a certain dose-dependent relationship. Conclusion Betel nut may induce OSF by upregulating key inflammatory factors such as IL-6 and TNF-α， thereby mediating the inflammatory response.

〔Keywords〕 betel nut; oral submucosal fibrosis; network toxicology; experimental verification; inflammatory response; pathomorphology

檳榔是棕櫚科常綠喬木植物檳榔的成熟種子，作為傳統中藥使用歷史悠久，首載于1 700年前晉代的《藥錄》，具有殺蟲消積、行水降氣、截瘧的功效，用于治療絳蟲病、蛔蟲病、姜片蟲病、蟲積腹痛、積滯瀉痢、里急后重、水腫腳氣、瘧疾等疾病[1]。現代藥理研究亦表明，檳榔具有驅蟲殺蟲[2-3]、促胃腸運動[4-5]、降脂[6]、抗抑郁[7]、抗病毒[8]等多種作用，在治療疾病方面有巨大的治療潛力。但流行病學研究顯示，咀嚼檳榔是導致口腔黏膜下纖維化（oral submucosal fibrosis，OSF）的關鍵因素之一[9-11]。

OSF是一種具有慢性進展性、癌變傾向性的口腔黏膜疾病，以口腔硬化、張口受限為臨床特征。有關OSF確切的發病機制仍不清楚，基因、自身免疫、營養和環境在內的各種因素都與OSF的發生發展密切相關[12]，目前主流觀點認為咀嚼檳榔是發病的主要病因[9-11，13]，既往研究通過單體活性成分實驗證實，檳榔中的檳榔堿、檳榔次堿、去甲檳榔堿、去甲檳榔次堿等生物堿是其主要的致病因素[14-15]，但檳榔活性成分較為復雜，OSF是否僅受以上4種成分影響，及其具體作用機制仍不明晰。因此，明確檳榔是如何誘導OSF具有重要現實意義。

網絡毒理學是源于網絡藥理學的一種方法，通過結合系統生物學對藥物進行毒理分析和預測。目前并未有研究發現網絡毒理學具有特有的毒理學靶點，因本身源于網絡藥理學發展而來，故研究思路與網絡藥理學大致相通[16]。本研究通過藥物成分、疾病、靶標、基因等數據庫，利用可視化分析軟件構建檳榔的潛在活性成分、相關靶點、疾病與通路相互作用網絡，并進一步通過動物實驗進行驗證，以闡明檳榔與OSF之間的作用關系。

1 材料

1.1" 動物

SPF級雄性SD大鼠24只，6～8周齡，體質量（200±25） g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限責任公司[實驗動物生產許可證號SCXK（湘）2018-0008]。實驗動物飼養于湖南中醫藥大學第一附屬醫院SPF級動物房。動物飼養室溫度為20～25 ℃，相對濕度為50%～60%，人工照明在明暗之間交替使用（12 h光照/12 h黑暗），自由進食飲水。動物實驗經湖南中醫藥大學第一附屬醫院實驗動物倫理委員會批準（批準號：ZYFY20230701-001）。

1.2" 藥品與試劑

檳榔購自湖南市面某著名名牌（生產許可證號：SC13143030600055、批號：20230801），并制備成不同濃度的檳榔水提取液。白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）抗體（50 μL，批號：DF6078）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）抗體（50 μL，批號：TF7014）均購自美國Affinity公司。

1.3" 儀器

病理組織漂白干燥機（中國派斯杰公司，型號：PH60）;組織脫水機（型號：STP-120）、包埋機（型號：HistoStar）、染色機（型號：Gemini AS）均購自美國賽默飛公司;智能組織切片成像系統（美國Perkin Elmer，型號Vectra3）。

2 方法

2.1" 網絡毒理學研究

2.1.1" 檳榔的活性成分篩選及潛在作用靶點收集" 通過TCSMP數據庫（https：//old.tcmsp-e.com.hnucm.opac.vip/tcmsp.php）檢索檳榔活性成分，根據外用藥物吸收特點[17]，篩選相對分子量≤500的活性成分，不采取將類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18作為納入條件，因為如檳榔堿DL值為0.03，依然具有良好的生物學活性。通過SwissTarget Prediction數據庫（http：//www.swisstargetprediction.ch/）對檳榔中所得到的52個化合物進行靶點收集，同時通過中國知網、PubMed等對上述化合物進行靶點補充。將可能性（Probability）設置為大于0，刪除重復值后得到檳榔潛在靶點信息。

2.1.2" OSF潛在靶點的獲取" 分別在GeneCards數據庫（https：//www.genecards.org/）數據、Disgenet數據庫（https：//www.disgenet.org/）以“Oral submucous fibrosis”為關鍵詞收集OSF靶點信息，取兩者靶點信息的并集為最終靶點信息。

2.1.3" 篩選共同靶點" 將活性成分與疾病獲得的相關靶點輸入Venn數據庫（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）在線平臺，得到交集靶點，繪制Venn圖。

2.1.4" 構建蛋白質-蛋白質相互作用網絡圖" 在STRING平臺（https：//cn.string-db.org.hnucm.opac.vip/）導入潛在作用靶點信息，限定物種“Homo sapiens”，選擇中等置信度0.400，隱藏游離節點，得到潛在靶點蛋白相互作用關系，導出csv格式文件，運用cytoscape 3.10.0軟件構建蛋白質-蛋白質相互作用（protein protein interacfion， PPI）網絡圖，并進行拓撲學分析。

2.1.5" GO功能和京都基因與KEGG通路富集分析" 將篩選得到的藥物與疾病的交集靶點導入Metascape數據庫（http：//metascape.org），設置物種為“Homo sapiens”，進行基因本體（gene ontology， GO）功能和京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes， KEGG）通路富集分析，通過微生信平臺（http：//www.bioinformatics. com.cn/）繪制氣泡圖。并利用cytoscape3.10.0軟件進行活性成分-靶點-通路網絡圖的構建。

2.2" 動物實驗驗證

2.2.1" 檳榔水提取液制備" 檳榔經浸泡、煎煮、過濾后，繼續加水煎煮過濾一次，兩次所得的濾液經過合并后，用旋轉蒸發儀濃縮得到提取液的原液，即高劑量檳榔水提取液（12.5 g·mL-1），用蒸餾水分別以10、100倍稀釋成中劑量檳榔水提取液（1.25 g·mL-1）、低劑量檳榔水提取液（0.125 g·mL-1），過濾除菌，分裝保存于-20 ℃冰箱備用。

2.2.2" 實驗分組與干預" 檳榔水提取液低、中、高劑量設計方案，參考各地文獻報道及白皮書報道[18]，擬定攝入7 g檳榔為低劑量（輕度成癮者），攝入70 g檳榔為中劑量（中度成癮者），攝入700 g檳榔為高劑量（重度成癮者）。按70 kg成人與200 g大鼠初始體重藥量折算表換算，低、中、高劑量分別設為0.125 g·mL-1、1.25 g·mL-1、12.5 g·mL-1。

隨機將24只SD大鼠分為對照組、低劑量組（0.125 g·mL-1）、中劑量組（1.25 g·mL-1）、高劑量組（12.5 g·mL-1）。除對照組蘸取生理鹽水外，其他各組采用醫用棉簽蘸取不同濃度的檳榔水提取液涂擦大鼠左側口腔黏膜30 s，每天處理1次，干預后禁食禁水2 h，持續16周。

2.2.3" 觀察指標" （1）大鼠一般情況觀察：實驗過程中每天觀察大鼠口腔黏膜變化、精神、毛色改變、進食進水等情況;每月測量大鼠體質量。（2）口腔情況：黏膜色澤，黏膜損傷與否（斑塊、潰瘍或腫物），纖維條索情況，口腔開口度測量（戊巴比妥麻醉大鼠后使用彈簧測力計對上下牙施加開口拉力，上下各2 N，并使用游標卡尺測量上下頜切牙切段距離為被動開口度，每只重復測量3次取平均值，精確至0.02 mm）[19]。（3）組織病理形態學檢測：戊巴比妥麻醉大鼠后，取左側頰黏膜置于4%多聚甲醛中浸泡、固定，經過脫水、透明、包埋、切片等流程后，進行HE染色、Mas?son染色及免疫組織化學染色，在光鏡下觀察大鼠口腔黏膜上皮的形態變化并使用ImageJ軟件計算平均光密度得到IL-6、TNF-α炎性因子的表達值。

2.2.4" 統計學方法" 采用SPSS 25.0軟件對實驗數據進行統計分析，計量資料以“x±s”表示，符合正態分布，多組間比較采用單因素方差分析。以Plt;0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1" 檳榔活性成分的獲取

通過TCMSP數據庫檢索，得到檳榔有效成分52個，根據分子量≤500進行篩選，獲得檳榔的潛在活性成分52個（表1）。

3.2" 成分靶點、疾病靶點以及共同作用靶點的篩選 將潛在活性成分導入Swiss數據庫得到作用靶點，篩選并去除重復值后，得到檳榔活性成分靶點587個，依據GeneCards和Disgenet數據庫中對OSF進行靶點檢索，經過數據篩選、合并及去除重復值后，得到761個靶點，之后將檳榔活性成分靶點與OSF相關靶點輸入Venny2.1取交集（圖1），得到72個共同作用靶點，作為檳榔影響OSF的潛在靶點。

3.3" PPI網絡圖的構建

將檳榔52個活性成分和OSF交集靶點導入 STRING數據庫中進行PPI分析，去除未參與PPI的游離靶點，從而得到72個靶點構成的PPI網絡。將得到的數據導入Cytoscape 3.10.0軟件中進行可視化處理及拓撲分析，如圖2所示。以節點表示共同作用靶點，每條邊代表節點之間的相互作用關系，并以節點大小對應度值大小以反映節點的重要性，節點越大則表示其在該網絡中越重要。拓撲分析顯示交集靶點中IL-6、MMP-9、TP53、TNF、BCL2、EGFR等可能是關鍵的核心靶點。

3.4" GO功能和KEGG富集分析

將交集靶點導入Metascape數據庫中進行GO功能富集分析（Plt;0.01），主要包括生物過程、細胞組分和分子功能分析，如圖3所示。生物過程（biological process， BP）相關條目3 908條，主要涉及缺氧反應、細胞運動的正向調節、磷代謝過程的正向調節、蛋白質轉運的調節等方面;細胞組分（cellular component， CC）相關條目324條，主要涉及膜筏、細胞外基質、細胞器外膜、細胞質核周區等方面，分子功能（molecular function， MF）相關條目542條，主要涉及各類蛋白結合、酶類活性、受體活化等方面。進一步進行KEGG通路富集分析，并根據P值的大小和富集基因數目篩選，如圖4所示，主要涉及PI3K-Akt信號通路、AGE-RAGE信號通路、松弛素信號通路、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥等方面。

3.5" 成分-靶點-通路網絡圖的構建

如圖5所示，根據KEGG通路富集分析結果從而構建檳榔潛在活性成分-靶點-通路網絡，度值作為衡量節點重要性的關鍵指標，以節點的大小來反映度值大小，節點度值越大，表明成分與靶點或靶點與通路之間關聯程度越高，在檳榔影響OSF的過程中發揮關鍵作用。檳榔活性成分度值排名靠前的為亞油酸、10Z-十七碳烯酸、二十碳五烯酸、鄰苯二甲酸二丁酯等，通過作用在PI3K-Akt信號通路、AGE-RAGE信號通路、松弛素信號通路、EGFR酪氨酸激酶抑制等信號通路上的EGFR、血管內皮生長因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）、MMP-2等蛋白靶點相互協同作用，從而影響OSF。

3.6" 動物實驗結果

3.6.1" 一般觀察" 實驗前，各組大鼠體質量比較差異無統計學意義（Pgt;0.05）。實驗過程中所有大鼠毛色、飲食、活動精神均正常。對照組以及低、中、高劑量組大鼠干預16周后，其體質量增加的平均值分別為（218.3±23.4）、（238.1±33.0）、（240.3±33.0）、（248.8±30.8） g，各組間差異無統計學意義（Pgt;0.05）。詳見圖6。

3.6.2" 口腔黏膜狀況及開口度" 實驗前各組大鼠口內雙側頰黏膜均紅潤無異常，各組被動開口度值間差異無統計學意義（Pgt;0.05）。實驗16周后，高劑量組大頰部黏膜可見白色病變，捫之質地較硬;空白組、低劑量組大鼠頰部黏膜肉眼未見異常，顏色粉紅而潤澤光滑，捫之富有彈性。檳榔水提取液各組開口度值均有所減小，低、中、高劑量組的開口度分別為（27.09±0.54）、（25.80±0.25）、（26.15±1.36） mm;與對照組相比較，中、高劑量組開口度值明顯減小，差異有統計學意義（Plt;0.05）;與低劑量組相比較，中、高劑量組開口度值亦明顯減小，差異有統計學意義（Plt;0.05）;而中、高劑量組之間相比，差異無統計學意義（Pgt;0.05）。詳見圖7。

3.6.3" 病理形態學檢測" HE染色結果提示，中、高劑量組大鼠頰黏膜出現不同程度上皮層變薄，棘突變淺、甚至消失，固有層明顯增厚，膠原纖維呈無序、波形的外形排列，血管數量減少，伴有炎性細胞浸潤，并可見類玻璃樣變，且高劑量組出現細胞空泡。低劑量組黏膜下膠原纖維增多，少量粉紅色沉積物堆積，而正常組皮層結構基本正常，棘突未出現變平或消失。Masson染色結果顯示，對照組大鼠頰黏膜提示淡藍色膠原纖維分布在黏膜固有層，排列疏松;而檳榔水提取液各組頰黏膜固有層的膠原纖維沉積地厚而致密，顏色呈深藍色，且中、高劑量組更加明顯。詳見圖8—9。

3.6.4" 檳榔水提取液對大鼠口腔黏膜IL-6、TNF-α的影響" 免疫組織化學染色結果顯示，與對照組相比較，低、中、高劑量檳榔水提取液均可升高了IL-6、TNF-α的表達，且呈劑量依賴性（Plt;0.01）。表明檳榔水提取液可能通過上調IL-6、TNF-α等關鍵炎性因子來誘導OSF。詳見圖10—11。

4 討論

本研究根據網絡毒理學共篩選出52個潛在活性成分，得到成分對應靶點587個和疾病對應靶點761個，以及兩者的交集靶點72個。PPI網絡拓撲分析顯示度值前6的核心蛋白是IL-6、MMP-9、TP53、TNF、Bcl-2、EGFR，這些可能是檳榔影響OSF的關鍵靶點。IL-6是炎癥和修復的關鍵因子，在纖維化病變發揮重要作用[20]。研究發現，OSF標本培養的成纖維細胞中IL-6水平升高，同時證明了檳榔堿能夠刺激人類口腔頰黏膜中IL-6 mRNA的表達[21，24]。MMP-9可以催化彈性和膠原蛋白的降解，LI等人[22]發現檳榔堿可以下調MMP-2、MMP-9的表達，并同時上調金屬蛋白抑制酶的水平使得膠原蛋白增加。TP53調節細胞增殖和分化，在口腔潛在惡性和惡性疾病中發揮重要作用。研究證實，在OSF病理組織中TP53的水平較正常口腔黏膜顯著升高[23]。TNF和IL-6一樣，是重要的炎性因子，OSF水平患者較正常人升高[24]。在Bcl-2是細胞凋亡的重要調節因子，有研究表明，其可能通過抑制細胞凋亡在OSF癌變中發揮重要作用[25]。EGFR作為生長因子，調節細胞的生長、增殖和分化。GO功能富集分析顯示，檳榔的活性成分發揮作用主要涉及缺氧反應、細胞運動的正向調節、磷代謝過程的正向調節、蛋白質轉運的調節等過程，這些活性成分可能通過作用在膜筏、細胞外基質、細胞器外膜、細胞質核周區等組分來影響各類蛋白結合、酶類活性、受體活化等功能。KEGG通路富集分析獲得PI3K-Akt信號通路、AGE-RAGE信號通路、松弛素信號通路、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥等信號通路。PI3K-Akt信號通路調節各種細胞過程，如細胞凋亡、細胞增殖、蛋白質合成等，是最重要細胞內通路之一，如PI3K/Akt抑制劑LY2940002可以抑制OSF細胞的遷移和侵襲以及血管生成，從而達到治療效果[26];同時PI3K-Akt信號通路通過促進促纖維化生長因子、細胞因子和趨化因子的合成和分泌，從而使得成纖維細胞轉化為肌纖維細胞，在肺、肝、心臟纖維化等疾病中發揮重要作用[27-29];此外，PI3K-Akt信號通路是重要的炎癥信號通路之一，通過激活NF-kB后發生一系列級聯反應，促進成纖維細胞IL-6、TNF-β等炎性因子的增加[30]。AGE-RAGE信號通路可以激活NF-kB、MAPK等通路，從而介導炎癥反應、氧化應激、細胞凋亡等生命過程，如通過RAGE-MAPK信號通路增加大鼠牙髓細胞中S100A8、A9、IL-1β的炎性因子表達[31]。松弛素是一種肽激素，通過激活多種通路抑制炎癥、活化成纖維細胞、重塑基質發揮抗纖維化作用[32]。研究表明，松弛素通過調節成纖維細胞合成和分泌前膠原酶和膠原蛋白，促進MMP-1、MMP-8的表達在纖維化占有重要地位[33-34]。此外，KEGG通路富集分析顯示多條癌癥通路與OSF密切相關。OSF是公認的癌前病變，部分OSF會進展為口腔鱗狀細胞癌，其過程主要涉及長期慢性非消退性炎癥，誘導上皮細胞的惡性轉化，導致獲得各種惡性生物表型[35-36]。檳榔活性成分-靶點-通路網絡圖顯示，檳榔活性成分居于前位的是亞油酸、10Z-十七碳烯酸、二十碳五烯酸、鄰苯二甲酸二丁酯，其中亞油酸、10Z-十七碳烯酸、二十碳五烯酸為脂肪酸，且檳榔中以亞油酸為主要成分[37]，研究表明發炎的牙齦組織中中亞油酸等不飽和脂肪酸的含量明顯增加，與炎癥反應密切相關[38];也有研究證實鄰苯二甲酸二丁酯干預肝細胞后，氧化應激水平明顯升高，IL-6、IL-1、TNF-α等炎性因子表達增加，同時誘導肝細胞凋亡[39]。

基于網絡毒理學結果，我們發現炎癥反應與檳榔活性成分、OSF以及參與兩者的通路均有密切聯系，故選擇IL-6、TNF-α等關鍵炎性因子作為可能的作用靶點，進一步進行動物實驗探討檳榔水提取液對OSF的作用機制。通過開口度測量、HE染色及Masson染色實驗，發現中、高劑量組對口腔黏膜損傷較對照組、低劑量更為嚴重，引起開口度值明顯減小，使得大鼠張口受限，并導致黏膜上皮層變薄，固有層明顯增厚，膠原纖維呈無序波狀排列，血管數量減少，伴有炎性細胞浸潤，并從蛋白水平發現檳榔呈劑量依賴性地上調IL-6、TNF-α等炎性因子，是其可能誘導OSF機制之一。

綜上所述，本研究通過網絡毒理學方法，較為系統地分析了檳榔導致OSF的潛在活性成分、關鍵靶點和信號通路，并通過動物實驗進行驗證，揭示了檳榔上調IL-6、TNF-α等炎性因子是其誘導OSF的作用機制之一。同時我們還發現，檳榔活性成分中除了生物堿對OSF具有明顯的誘導作用之外，亞油酸為主的脂肪酸對其也有影響，然而，目前尚未有文獻報道脂肪酸對OSF的具體作用機制，課題組后續將進行下一步的實驗探索。此外，本研究并未對炎性因子進行更深層次的上下游機制研究，后期還需要進一步的實驗和臨床驗證來證實。

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〔收稿日期〕2024-04-15

〔基金項目〕橫向課題：檳榔及其成分靶向對口腔黏膜安全性評價。

〔通信作者〕*劉柏炎，男，博士，二級教授，博士研究生導師，E-mail：liubaiyan@126.com。