Kv1.3抑制劑瑪格斑蝎毒素對腎損傷模型小鼠M1型巨噬細胞極化及腎臟炎癥和損傷的影響

［摘要］ 目的： 觀察電壓門控鉀離子通道亞型（voltage-gated potassium channel isoform，Kv）1.3抑制劑瑪格斑蝎毒素（margatoxin，MgTx）對單側(cè)輸尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）小鼠巨噬細胞（macrophage，M ）極化及腎臟炎癥和損傷的影響。方法： 將48只雄性C57BL/6J小鼠隨機均分為4組：假手術(shù)（Sham）組、Sham+MgTx組、UUO組、UUO+MgTx組，每組12只；Sham組行單純開腹及關(guān)腹手術(shù)，術(shù)后每日腹腔注射生理鹽水，Sham+MgTx組行開腹及關(guān)腹手術(shù)，術(shù)后每日腹腔注射MgTx，UUO組行UUO手術(shù)，術(shù)后每日腹腔注射生理鹽水，UUO+MgTx組行UUO手術(shù)，術(shù)后每日腹腔注射MgTx。分別于術(shù)后第3天、第7天每組麻醉6只小鼠，眼球采血留取外周血，然后立即處死小鼠并收集腎組織；采用HE染色評估腎臟損傷程度；蛋白免疫印跡法檢測腎組織中Kv1.3及轉(zhuǎn)化生子因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達；流式細胞術(shù)分析外周血單核細胞的改變及腎組織中M 極化情況；qRT-PCR檢測腎組織M1型及M2型M 標志物相關(guān)mRNA相對表達量。結(jié)果： 與Sham組相比，UUO組可見明顯的腎損傷及炎癥反應，Kv1.3、TGF-β1、α-SMA相對表達水平明顯升高（ P ＜0.001）；與UUO組相比，UUO+MgTx組腎損傷明顯減輕，Kv1.3、TGF-β1、α-SMA相對表達水平明顯降低（ P ＜0.001）。此外，與Sham組相比，UUO組外周血單核細胞及腎組織中M1型M 比例明顯升高（ P ＜0.01），M1型M 標志物相關(guān)mRNA相對表達量明顯升高（ P ＜0.01），M2型M 標志物相關(guān)mRNA相對表達量明顯降低（ P ＜0.01）；與UUO組相比，UUO+MgTx組外周血單核細胞比例及腎組織中M1型M 比例明顯降低（ P ＜0.01），M1型M 標志物mRNA相對表達量顯著降低（ P ＜0.01），M2型M 標志物mRNA水平顯著升高（ P ＜0.01）。結(jié)論： Kv1.3抑制劑MgTx可抑制UUO小鼠M 向M1極化，減輕腎臟炎癥和損傷。

［關(guān)鍵詞］ 電壓門控鉀離子通道亞型1.3；瑪格斑蝎毒素；巨噬細胞；極化；腎臟損傷；單側(cè)輸尿管梗阻

［中圖分類號］ R692.2" ［文獻標志碼］ A" ［文章編號］ 1671-7783（2025）01-0013-08

DOI： 10.13312/j.issn.1671-7783.y230250

［引用格式］孔佳偉， 李莎莎， 劉其鋒. Kv1.3抑制劑瑪格斑蝎毒素對腎損傷模型小鼠M1型巨噬細胞極化及腎臟炎癥和損傷的影響［J］. 江蘇大學學報（醫(yī)學版）， 2025， 35（1）： 13-20.

［基金項目］江蘇省衛(wèi)生健康委2023年度醫(yī)學科研立項項目（Z2023039）

［作者簡介］孔佳偉（1997—），男，碩士研究生；劉其鋒（通訊作者），副主任醫(yī)師，碩士生導師，E-mail： lqfeng02@163.com

Effects of Kv1.3 inhibitor margatoxin on polarization of M1 macrophages and renal inflammation and injury in mice with renal injury

KONG Jiawei1， LI Shasha2， LIU Qifeng1

（1. Department of Nephrology， 2. Clinical Research amp; Lab Center， Affiliated Kunshan Hospital of Jiangsu University， Suzhou Jiangsu 215300， China）

［Abstract］ Objective： To observe the effect of voltage-gated potassium channel isoform （Kv） 1.3 inhibitor， margatoxin （MgTx）， on macrophage （M ） polarization and renal inflammation and injury in mice with unilateral ureteral obstruction （UUO）. Methods： Forty-eight male C57BL/6J mice were randomly and equally divided into four groups： Sham group， Sham+MgTx group， UUO group， UUO+MgTx group， with 12 mice in each group. The Sham group underwent simple open and closed abdominal surgery， with daily intraperitoneal injection of noraml saline after operation; Sham+MgTx group underwent open and closed abdominal surgery， with daily intraperitoneal injection of MgTx after surgery; UUO group underwent UUO operation， with daily intraperitoneal injection of normal saline after operation; UUO+MgTx group underwent UUO operation， with daily intraperitoneal injection of MgTx after operation. On the 3rd and 7th day after operation， six mice in each group were anesthetized， and whole blood was collected from the eyeballs， then the mice were immediately euthanized and kidney tissue was harvested. Renal injury was assessed by HE staining; protein levels of Kv1.3， TGF-β1 and α-SMA were detected by Western blotting; changes of peripheral blood monocytes and renal M "polarization were analyzed by flow cytometry; mRNA levels of M1 and M2 biomarkers were detected by qRT-PCR. Results： Compared with Sham group， UUO group showed obvious renal injury and inflammation， and the relative expression levels of Kv1.3， TGF-β1， α-SMA were significantly increased （ P lt;0.001）. Compared with UUO group， renal injury was reduced， and relative expression levels of Kv1.3， TGF-β1 and α-SMA were greatly decreased in UUO + MgTx group （ P lt;0.001）. In addition， compared with Sham group， the proportion of M1 type M "in peripheral blood monocytes and kidney tissues， and the relative expression level of M1 type M "marker related mRNA weresignificantly increased （ P lt;0.01）， while the relative expression level of M2 type M "marker related mRNA were obviously decreased in UUO group （ P lt;0.01）. Compared with UUO group， the proportion of peripheral blood mononuclear cells and M1 type M "in renal tissues were significantly decreased in UUO+MgTx group， the relative mRNA expression levels of M1 type M "marker were significantly decreased （ P lt;0.01）， while the mRNA levels of M2 type M "markers were greatly increased （ P lt;0.01）. Conclusion： Kv1.3 inhibitor MgTx could inhibit M "polarization towards M1 and attenuate renal inflammation and injury in UUO mice.

［Key words］ voltage-gated potassium channel isoform 1.3 （Kv1.3）; margatoxin; macrophage; polarization; kidney injury; unilateral ureteral obstruction （UUO）

慢性腎臟病（chronic kidney disease，CKD）是由多種原因?qū)е碌哪I功能進行性下降的慢性炎癥性疾病，持續(xù)性的炎癥反應誘導組織損傷和修復異常，最終導致腎纖維化^［1］ 。巨噬細胞（macrophage，M ）作為機體最重要的炎癥細胞，在腎臟炎癥和損傷過程中起重要作用^［2］ 。在不同的環(huán)境刺激下，M 可分化為形態(tài)、功能、表型截然不同的亞型，主要包括促炎型M1型M 及抗炎型M2型M ，該過程稱為M 極化；M 極化異常是CKD等多數(shù)炎癥性疾病進行性發(fā)展的重要因素^［3-5］ 。研究報道，電壓門控鉀離子通道亞型（voltage-gated potassium channel isoform，Kv）1.3作為M 高表達的離子通道，參與調(diào)控M 極化過程^［6-7］ 。目前已有多項研究證實Kv1.3參與對M 極化的調(diào)控，抑制Kv1.3產(chǎn)生的抗炎效應已在急性肝損傷^［8］ 、動脈粥樣硬化^［9］ 、哮喘^［10］ 和2型糖尿病^［11］ 等多種疾病模型中得到證實。然而，Kv1.3在腎臟疾病中的作用尚不清楚。瑪格斑蝎毒素（margatoxin，MgTx）是一種從瑪格麗特蝎蝎毒中分離得到的高親和力Kv1.3通道抑制劑^［12］ ，目前已廣泛應用于離子通道的研究。本研究通過單側(cè)輸尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）^［13］ 手術(shù)建立小鼠腎損傷模型，探究腎損傷中Kv1.3表達水平及M 極化情況，并通過MgTx干預，探究Kv1.3抑制劑對M 極化及腎臟炎癥和損傷的影響。

1 材料和方法

1.1 實驗動物、主要試劑與儀器

48只C57BL/6J小鼠，雄性，4～6周，體重18～20 g，購自杭州子源實驗動物科技有限公司，許可證號：SCXK（浙）2019-0004。

MgTx（美國Med Chem Express公司）；小鼠抗小鼠Kv1.3抗體（美國Santa Cruz公司）；兔抗小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、β-微管蛋白（β-Tubulin）、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）抗體（杭州華安生物科技公司）；引物GAPDH、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、誘導型一氧化氮合酶（iNOS）、白介素-1β（IL-1β）、精氨酸酶-1（arginase-1，Arg-1）、CD206、白介素-10（IL-10）由南京諾唯贊生物科技公司合成；FcRblock、PE抗小鼠CD86抗體、PerCP/Cyanine5.5抗小鼠CD11b抗體、APC抗小鼠CD206抗體、固定緩沖液、細胞內(nèi)染色滲透洗滌緩沖液、細胞內(nèi)染色緩沖液（美國Biolegend公司）；RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和熒光定量PCR試劑盒（南京諾唯贊生物科技公司）；多組織解離試劑盒及組織處理器（德國Miltenyi Biotec公司）；小鼠臟器組織單個核細胞分離試劑盒（北 京索萊寶科技有限公司）；E-BLOT接觸式化學發(fā)光成像儀（上海易孛特生命科學有限公司）；480型熒光定量PCR儀（瑞士Roche公司）；CantoⅡ型流式細胞儀（美國BD公司）。

1.2 小鼠分組及腎損傷模型構(gòu)建

將48只C57BL/6J小鼠隨機均分為4組，每組12只，分別為假手術(shù)（Sham）組、Sham+MgTx組、UUO組和UUO+MgTx組。Sham組及Sham+MgTx組小鼠僅行開腹和關(guān)腹手術(shù)；UUO組及UUO+MgTx組小鼠行UUO手術(shù)處理。

采用UUO法建立小鼠腎損傷模型。具體步驟：小鼠常規(guī)備皮、消毒；予以0.3%戊巴比妥鈉溶液腹腔注射麻醉（200 μL/g），于左側(cè)恥骨上逐層分離皮膚及皮下組織顯露左側(cè)腎臟及左側(cè)輸尿管，4-0號絲線在輸尿管上下兩端分別結(jié)扎，于兩處結(jié)扎點間切斷輸尿管，逐層關(guān)閉腹腔。以術(shù)后次日為第1天，Sham+MgTx組、UUO+MgTx組予以MgTx每天5 μL/g腹 腔注射（300 nmol/L），Sham組、UUO組每天腹腔注射等量生理鹽水；分別于術(shù)后第3、7天從各組隨機抓取6只小鼠，予以0.3%戊巴比妥鈉溶液（200 μL/g）腹腔注射麻醉，眼球采血（EDTA-K2 抗凝），然后立即采用頸椎脫位法處死，取腎組織，一部分用于流式細胞術(shù)檢測及腎臟病理標本的制作，一部分置于液氮中凍存，用于后續(xù)實驗。

術(shù)后通過檢測各組小鼠腎臟病理及腎損傷蛋白，以Sham組為對照，評估腎損傷模型構(gòu)建是否成功。

本實驗按照《動物實驗護理和使用指南》進行，并經(jīng)江蘇大學動物研究倫理委員會批準。

1.3 小鼠腎臟病理標本制作

取各組小鼠腎臟組織，于4%甲醛溶液中固定2～ 3 d；PBS清洗3次，每次20 min；蒸餾水清洗3次，每次20 min；依次經(jīng)過50%、75%、80%、90%、95%、100%乙醇脫水，各級乙醇中脫水1～2 h；二甲苯透明2次，每次1 h；純石蠟溶液中浸蠟2 h；石蠟包埋、切片備用，切片厚5 μm。

1.4 小鼠腎組織HE染色

石蠟切片依次經(jīng)二甲苯Ⅰ10 min、二甲苯Ⅱ10 min 、二甲苯Ⅲ5 min；100%乙醇10 min，95%、90%、80%、75%梯度乙醇各5 min；蒸餾水洗滌10 min ；蘇木精染色20 min；自來水洗去浮色；0.5%鹽酸乙醇分色數(shù)秒；自來水沖洗10 min；伊紅染色2 min ；95%乙醇分色2 min；依次經(jīng)95%乙醇5 min、100%乙醇Ⅰ10 min、100%乙醇Ⅱ10 min脫水；純二甲苯透明2次，每次10 min；晾干，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。

1.5 小鼠外周血及腎組織單個核細胞懸液制備

1.5.1 外周血單細胞懸液制備 小鼠眼球采血后置于EDTA-K2抗凝管，旋渦混勻1～3 s；取80 μL外周血，加入1 mL紅細胞裂解液，旋渦混勻1～3 s，室溫避光孵育10 min；2 000 r/min室溫離心5 min；棄上清液，加入1 mL PBS，旋渦混勻1～3 s；重復上述離心；棄上清液，加入3 mL外周血及組織稀釋液重懸，即得到外周血單細胞懸液。

1.5.2 腎組織單細胞懸液制備 參照多組織解離試劑盒操作說明書，取1/4小鼠腎臟組織，剪成1 mm ³ 左右，置于特制離心管中；加入相應量DMEM及消化酶，將離心管連接至組織處理器，運行預設程序解離腎組織得到組織懸液；用細胞濾網(wǎng)過濾至50 mL離 心管中，并用15 mL PBS沖洗濾網(wǎng)上殘留的細胞至離心管中；室溫300× g 離心10 min；棄上清液，加入3 mL組織稀釋液重懸，即獲得單細胞懸液。

1.5.3 小鼠外周血及腎組織單個核細胞懸液制備 "參照說明書制備。取15 mL離心管，加入3 mL分離液，取“1.5.1”制備的外周血單細胞懸液，平鋪于分離液上，注意保持兩液面界面清晰，使兩者形成明顯的分層界面，室溫500× g 離心30 min；小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層至另一離心管中，加入10 mL細胞洗滌液，250× g 離心10 min；棄上清液，加入5 mL PBS重懸，250× g 離心10 min；重復洗滌2～3次；棄上清液，加入50 μL PBS重懸，即為小鼠外周血單個核細胞懸液，用于流式細胞術(shù)檢測。以同樣的方法制備小鼠腎組織單個核細胞懸液。

1.6 流式細胞術(shù)分析M 表型

取“1.5.3”單個核細胞懸液50 mL，加入1 μL FcRblock，4 ℃封閉10 min，分別加入0.5 μg抗CD11b、CD86抗體行細胞表面染色，4 ℃孵育30 min ；加入50 μL PBS洗滌細胞，1 500 r/min離心3 min；棄上清液，重復洗滌2～3次；加入500 μL細胞固定液，室溫避光固定30 min；室溫1 000 r/min離心5 min；棄上清液；加入2 mL 1×細胞內(nèi)染色滲透洗滌緩沖液重懸細胞，150× g 離心5 min；棄上清液，重復上述步驟2～3次；加入100 μL 1×細胞內(nèi)染色滲透洗滌緩沖液重懸細胞，加入0.5 μg CD206抗體，室溫避光孵育30 min；加入2 mL 1×細胞內(nèi)染色滲透洗滌緩沖液，1 500 r/min離心3 min；棄上清液，重復洗滌細胞2～3次；加入500 μL細胞內(nèi)染色緩沖液重懸細胞，上機檢測，并用FlowJo軟件對數(shù)據(jù)進行分析。

1.7 蛋白免疫印跡法檢測Kv1.3、TGF-β1和α-SMA相對表達水平

取小鼠腎臟組織，剪成1 mm³ 左右置于勻漿管，加入消化酶及勻漿磁珠，勻漿至無明顯肉眼可見固體；取組織勻漿至EP管中，冰上靜置10 min；4 ℃ 12 000 r/min離心10 min；取上清液，BCA法測定蛋白濃度。每孔上樣25 μg總蛋白，行10%SDS-PAGE，80 V電泳2 h；300 mA 1.5 h轉(zhuǎn)至PVDF膜；10%脫脂牛奶4 ℃封閉過夜；加入TBST稀釋的一抗（兔 抗小鼠β-Tubulin抗體、兔抗小鼠α-SMA抗體、小鼠抗小鼠Kv1.3抗體，稀釋比1∶2 000，兔抗小鼠TGF-β1抗體，稀釋比1∶500），于4 ℃孵育過夜；TBST洗滌；加入二抗（羊抗小鼠IgG、小鼠抗兔IgG，稀釋比1∶2 000），室溫孵育1～2 h；TBST洗滌；ECL顯色。以β-Tubulin為內(nèi)參，用Image J軟件分析各蛋白相對表達水平。

1.8 qRT-PCR檢測M 生物標志物mRNA相對表達

提取小鼠腎組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為相應的cDNA，行qRT-PCR，引物序列見表1。qRT-PCR反應體系：10 μL 2× Taq "Pro Universal SYBR qPCR Master Mix、0.4 μL上游引物、0.4 μL下游引物、2 μL "cDNA、7.2 μL雙蒸水；擴增條件：95 ℃ 30 s，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，95 ℃ 15 s，40個循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，采用2^-ΔΔCt 半定量方法計算各基因mRNA相對表達水平。

1.9 統(tǒng)計學分析

采用GraphPad Prism 8.3軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，所有實驗均獨立重復至少3次。計量資料以均數(shù)±標準差（ x±s ）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用Tukey法， P lt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 MgTx對各組小鼠腎臟組織和Kv1.3表達的影響

HE染色結(jié)果顯示（圖1），Sham組腎組織未見明顯腎組織損傷，與Sham組相比，UUO組術(shù)后第3天和第7天腎組織結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯的破壞，包括腎小管擴張、上皮細胞壞死、腎間質(zhì)水腫和炎癥細胞浸潤，且第7天較第3天加重；與UUO組相比，UUO+MgTx組腎臟病理損傷得到改善；與Sham組相比，Sham+MgTx組腎臟病理上無明顯改變。

蛋白免疫印跡結(jié)果顯示（圖2），與Sham組相比，UUO組術(shù)后第3天和第7天腎組織中Kv1.3及腎損傷相關(guān)蛋白TGF-β1、α-SMA相對表達水平顯著升高（ P 均＜0.001）；與UUO組相比，UUO+MgTx組術(shù)后第3天腎組織中Kv1.3蛋白相對表達水平無明顯改變（ P gt;0.05），第7天明顯降低（ P ＜0.001），TGF-β1、α-SMA相對表達水平在第3天和第7天均顯著降低（ P 均＜0.001）；與Sham組相比，Sham+MgTx組Kv1.3和TGF-β1、α-SMA相對表達水平無顯著差異（ P 均＞0.05）。

2.2 MgTx對各組小鼠外周血單核細胞比例的影響

流式細胞術(shù)結(jié)果顯示（圖3），與Sham組相比，UUO組術(shù)后第3天和第7天外周血單核細胞（CD11b ⁺ 細胞）比例顯著增加（ P 均＜0.01）；與UUO組相比，UUO+MgTx組術(shù)后第3天和第7天外周血單核細胞比例顯著降低（ P 均＜0.01），提示MgTx干預對UUO小鼠外周血單核細胞活化表現(xiàn)出抑制作用；與Sham組相比，Sham+MgTx組術(shù)后第3天和第7天外周血單核細胞比例無顯著改變（ P 均＞0.05），說明MgTx干預對正常小鼠外周血單核細胞比例不產(chǎn)生影響。

2.3 MgTx對各組小鼠腎組織M 標志物mRNA水平的影響

qRT-PCR結(jié)果顯示（圖4），與Sham組相比，UUO組術(shù)后第3、7天腎組織中 TNF-α "mRNA和 iNOS "mRNA相對表達量明顯升高（ P 均＜0.01），第7天 IL-1β "mRNA相對表達量明顯升高（ P 均＜0.01）；此外，與Sham組相比，UUO組術(shù)后第3、7天腎組織中 Arg-1 "mRNA、 CD206 "mRNA、 IL-10 "mRNA相對表達量明顯升高（ P 均＜0.01）。

qRT-PCR結(jié)果顯示（圖4），與UUO組相比，UUO+MgTx組術(shù)后第3天腎組織中 TNF-α "mRNA、 iNOS "mRNA相對表達量明顯降低（ P 均＜0.01）， IL-10 "mRNA相對表達量顯著升高（ P ＜0.01）；術(shù)后第7天 TNF-α "mRNA、 iNOS "mRNA、 IL-1β "mRNA相對表達量明顯降低（ P 均＜0.01）， Arg-1 "mRNA、 CD206 "mRNA和 IL-10 "mRNA相對表達量明顯升高（ P ＜0.05或 P ＜0.01）；與Sham組相比，Sham+MgTx組腎組織M 標志物mRNA水平均無顯著差異（ P 均＞0.05）。

2.4 MgTx對各組小鼠腎組織M 比例的影響

流式細胞術(shù)結(jié)果顯示（圖5），與Sham組相比，UUO組術(shù)后第3天和第7天腎組織中M1（CD11b⁺ CD86⁺ ）及M2（CD11b⁺ CD206⁺ ）型M 比例顯著增加（ P 均＜ 0.01）；與UUO組相比，UUO+MgTx組術(shù)后第3天和第7天腎組織中M1型M 比例顯著降低（ P 均＜0.01）；與Sham組相比，Sham+MgTx組腎組織M 比例均無顯著差異（ P 均＞0.05）。

3 討論

UUO手術(shù)通過結(jié)扎單側(cè)輸尿管形成梗阻性腎病，加速模擬人類慢性阻塞性腎病，目前已廣泛應用于腎臟疾病的相關(guān)研究。本研究結(jié)果顯示，UUO組和UUO+MgTx組腎小管擴張、腎間質(zhì)水腫、白細胞浸潤以及腎小管上皮細胞凋亡和成纖維細胞活化，TGF-β1和α-SMA相對表達水平升高，這與Martínez-Klimova等^［13］ 研究結(jié)果相一致，說明UUO造模成功且致小鼠腎臟損傷。UUO造成的損傷可誘導循環(huán)單核細胞遷移至腎組織并分化為不同亞型的M ，導致各亞型M 比例增加；炎性環(huán)境下M 以向促炎M1型M 極化為主，且TNF-α、iNOS、IL-1β表達增加，這些細胞因子既是M1型M 增加的標志，也是重要的促炎癥因子，可誘導并加重腎臟炎癥反應^［14］ 。本研究結(jié)果顯示，相較于Sham組，UUO組腎組織中M1及M2型M 標志物mRNA相對表達量在術(shù)后3、7 d均明顯增加；此外，UUO術(shù)后3 d腎組織中M1型及M2型M 比例顯著升高，隨著梗阻時間延長至7 d，兩者比例進一步升高。通常組織損傷早期以M1型M 為主，通過促炎反應消除損傷因素，而晚期則以M2型M 為主，發(fā)揮抗炎和纖維化修復作用^［15］ 。由此可見，UUO術(shù)后3 d和7 d均處于腎臟炎癥早期，該階段M1型M 極化明顯增強，本研究結(jié)果與其相符。另有研究表明，UUO術(shù)后3 d即可觀察到炎癥反應，術(shù)后7 d炎癥反應進一步增強，14 d時可觀察到明顯的腎纖維化^［13］ 。Cao等^［16］ 研究表明，CKD患者中M1型M 可能是誘導早期腎功能進行性下降的主要M 類型。由此可見，在腎臟損傷早期，抑制M1型M 極化具有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)，UUO組腎組織Kv1.3蛋白相對表達水平明顯高于Sham組，提示Kv1.3通道參與UUO病理過程，與腎臟炎癥和損傷相關(guān)。Kv1.3在炎癥組織中呈高表達，已在急性肝損傷、動脈粥樣硬化、支氣管哮喘和2型糖尿病等模型中證實，抑制其表達則表現(xiàn)出明顯的抗炎作用^［8-11］ 。MgTx作為Kv1.3高親和力抑制劑，1 nmol/L即可抑制Kv1.3表達^［17］ 。M 為腎組織中表達Kv1.3的主要細胞，是MgTx靶細胞。本研究結(jié)果顯示，MgTx干預7 d時，UUO小鼠腎組織中Kv1.3蛋白相對表達、M1型M 比例及相關(guān)標志物mRNA相對表達量顯著降低，說明MgTx通過抑制腎組織M 向M1型極化，并抑制炎相關(guān)癥因子表達，從而改善UUO小鼠腎臟損傷和炎癥反應。

然而，本研究結(jié)果顯示，MgTx干預3 d時Kv1.3蛋白相對表達水平以及 IL-1β "mRNA、 Arg-1 "mRNA、 CD206 "mRNA相對表達量變化無顯著差異，分析原因：一方面，干預時間可能影響MgTx治療效果，且不同的細胞因子對MgTx敏感度可能也不同；另一方面，MgTx可能通過其他途徑改善腎臟炎癥反應；但是，M1型M 在腎組織的浸潤明顯減少，且 TNF-α "mRNA、 iNOS "mRNA和 IL-10 "mRNA相對表達量明顯降低，表明MgTx對小鼠腎損傷具有一定治療效果。腎臟M 無法自我更新，主要依賴于外周血單核細胞補充^［18］ 。病理狀態(tài)下，腎臟損傷可誘導更多的外周血單核細胞浸潤腎組織并進一步分化為M ，該過程從損傷后即開始，持續(xù)整個UUO發(fā)展的全程^［19］ 。研究顯示，單側(cè)腎臟缺血再灌注腎損傷模型小鼠損傷后1 d，74.69%腎臟M 來源于外周血，且血源性M 較腎臟固有M 具有更強的促炎活性，可激活更多的炎癥相關(guān)信號通路。因此，血源性M 是始動和放大腎損傷的關(guān)鍵，而腎臟固有M 主要負責維持腎臟穩(wěn)態(tài)和修復作用^［20］ 。本研究結(jié)果顯示，相較于Sham組，UUO組外周血單核細胞比例在術(shù)后3 d即 顯著升高，表明單核細胞在腎組織浸潤；MgTx干預3 d和7 d均可顯著抑制UUO誘導的外周血單核細胞增加，說明MgTx可抑制外周血單核細胞的活化，由此減少M 在腎組織的浸潤，改善腎臟炎癥反應。研究表明，Kv1.3開放可促進單核細胞的趨化性，而抑制Kv1.3則抑制炎性單核細胞的增殖和募集，致單核細胞對CC趨化因子配體2的反應性降低^［21］ 。另有研究表明，抑制Kv1.3可抑制B淋巴細胞釋放趨化因子，從而減少單核細胞的遷移^［21］ 。由此表明，MgTx可能通過抑制外周血單核細胞的增殖和向腎組織的遷移，改善單核M 在UUO腎組織的浸潤，從而減輕腎臟炎癥和損傷。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，Kv1.3在UUO腎臟炎癥和損傷中表達明顯增加，同時M 向M1型極化增強，而通過MgTx抑制Kv1.3可以抑制M 向M1極化并減輕腎臟炎癥和損傷，靶向抑制Kv1.3可能通過調(diào)控M 極化發(fā)揮抗炎和腎臟保護作用。但是，M 極化的調(diào)控涉及多條信號通路，Kv1.3具體如何調(diào)控M 極化有待后續(xù)進一步探究。

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［收稿日期］ 2023-11-29" ［編輯］ 劉星星