羊肺線蟲病的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)及防治措施

摘 要：羊肺線蟲病是羊業(yè)養(yǎng)殖過程中常見的寄生蟲病，會(huì)導(dǎo)致病羊咳嗽、流鼻涕、呼吸困難以及消瘦、貧血、身體水腫等全身癥狀，對(duì)于山羊與綿羊均易感，羔羊感染后癥狀嚴(yán)重，死亡率也更高，給養(yǎng)殖戶造成嚴(yán)重?fù)p失。本文結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)以及查閱文獻(xiàn)分析了羊肺線蟲實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)及防治措施，為羊業(yè)科學(xué)養(yǎng)殖提供參考。

關(guān)鍵詞：羊；肺線蟲；實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)；防治措施

1 羊肺線蟲病的病原分類及形態(tài)特征

1.1 病原分類

羊肺線蟲主要包括大型肺線蟲以及小型肺線蟲。

大型肺線蟲主要為網(wǎng)尾科網(wǎng)尾屬的絲狀網(wǎng)尾線蟲，絲狀網(wǎng)尾線蟲蟲體呈細(xì)線狀，乳白色，雄蟲體長約30～80 mm，交合傘的中側(cè)肋和后側(cè)肋合并，僅末端分開，交合刺短粗，黃褐色，呈靴狀。雌蟲長約50～112 mm，陰門部位位于蟲體中部附近，蟲卵呈橢圓形，卵殼薄，內(nèi)含幼蟲。

小型肺線蟲主要屬于原圓科的原圓屬、繆勒屬、歧尾屬、囊尾屬和銳尾屬。蟲體非常細(xì)長，有的肉眼可見，長度一般在10～40 mm。比如霍氏原圓線蟲雄蟲 24～34 mm，交合傘分為兩葉；毛樣繆勒線蟲雄蟲長11～26 mm，交合傘高度退化，尾部呈螺旋狀彎曲。

2 肺線蟲的生活史

2.1 絲狀網(wǎng)尾線蟲

雌蟲在羊的支氣管或者氣管內(nèi)產(chǎn)卵，卵隨著支氣管分泌物進(jìn)入氣管，然后被咳出至口腔，再被吞咽進(jìn)入消化道，蟲卵迅速孵化出幼蟲，最后隨著糞便排出體外。在適宜的溫度和濕度條件下，幼蟲在外界環(huán)境中可存活一段時(shí)間并完成兩次蛻皮，且具有感染性。絲狀網(wǎng)尾線蟲幼蟲的感染主要依賴于羊的采食和飲水，幼蟲進(jìn)入羊體后，在小腸內(nèi)脫殼，鉆入腸壁并沿著淋巴循環(huán)進(jìn)入淋巴結(jié)。幼蟲在淋巴結(jié)內(nèi)再次發(fā)育至下一階段，之后經(jīng)過血液循環(huán)和淋巴循環(huán)到達(dá)心臟與肺臟，并在肺毛細(xì)血管內(nèi)滯留。最后進(jìn)入支氣管以及肺支氣管內(nèi)寄生與發(fā)育，30 d后發(fā)育為成蟲進(jìn)入下一個(gè)循環(huán)。

小型線蟲雌蟲產(chǎn)卵后，蟲卵會(huì)在雌蟲的臍部孵化為幼蟲，幼蟲隨著黏液經(jīng)由呼吸道進(jìn)入消化道，之后伴隨羊只糞便排出體外。幼蟲被中間宿主如貝類、螺類以及蝸牛等陸生軟體動(dòng)物采食后，在其體內(nèi)發(fā)育一段時(shí)間進(jìn)入感染階段，發(fā)育完成的幼蟲會(huì)排出體外或滯留在中間宿主體內(nèi)，羊只采食幼蟲后，同絲狀網(wǎng)尾線蟲相同的移行路線在羊只體內(nèi)發(fā)育，最后進(jìn)入呼吸道，經(jīng)過60～75 d的發(fā)育為成蟲并進(jìn)入下一階段。

3 臨床癥狀及剖檢變化

感染絲狀網(wǎng)尾線蟲后，以羔羊的癥狀最為嚴(yán)重，表現(xiàn)為咳嗽頻繁，呼吸明顯不暢，尤其是在被驅(qū)趕活動(dòng)之后，或是夜間休憩時(shí)段，該癥狀格外顯著。患病的羊只流鼻涕，鼻孔周邊黏液干涸，進(jìn)而形成痂皮。頻繁打噴嚏，羊只的身體狀況逐漸衰弱，日益消瘦，還伴有貧血癥狀，頭部、胸部以及四肢出現(xiàn)水腫現(xiàn)象，呼吸愈發(fā)困難，不過體溫并未出現(xiàn)升高情況。對(duì)病死羔羊進(jìn)行解剖時(shí)可觀察到，其肺部呈現(xiàn)膨脹狀態(tài)，伴有肺氣腫癥狀，肺的表面散布著微微隆起的硬結(jié)，顏色呈灰白色。將肺部切開后，能夠發(fā)現(xiàn)成團(tuán)聚集的蟲體，與此同時(shí)，支氣管內(nèi)也充斥著大量摻雜血絲的黏液以及蟲體。

感染小型肺線蟲后，主要表現(xiàn)為頻繁咳嗽，且病情呈漸進(jìn)態(tài)勢發(fā)展，病羊身體愈發(fā)消瘦，出現(xiàn)貧血癥狀，被毛雜亂粗糙、毫無光澤。病情嚴(yán)重的羔羊，呼吸困難程度加劇，極端情況下甚至?xí)蚝粑茏瓒舷⑺劳觥?duì)病死羔羊進(jìn)行解剖時(shí)，可見其胸膜與肺膜上存在硬結(jié)，膈葉部位，尤其是膈葉的后部，有大小從豌豆至拇指般不等的硬結(jié)凸起。肺小葉呈現(xiàn)出氣腫現(xiàn)象，還伴有局部的實(shí)變情況。在那些硬結(jié)內(nèi)部，以及支氣管、細(xì)支氣管的黏液之中，能夠觀察到極為細(xì)小的蟲體。

4 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法

4.1 樣本獲取

需要采集的樣本包括糞便樣本以及肺臟組織樣本。糞便樣本需要優(yōu)先收集新鮮、未污染的羊糞便，建議使用無菌糞便采集容器進(jìn)行操作。鑒于羊肺線蟲病的蟲卵或幼蟲常常伴隨糞便排出體外，所以采集過程要迅速，確保樣本的時(shí)效性。若無法立即送檢，應(yīng)將樣本妥善保存于低溫、避光的環(huán)境中，以最大程度維持蟲卵及幼蟲的初始狀態(tài)，減少環(huán)境因素的不良影響。

肺組織樣本采集需要在病羊死亡后，選取肺部病變特征顯著的區(qū)域，如存在明顯氣腫、實(shí)變、結(jié)節(jié)或者顏色、質(zhì)地異常的部位。操作過程需要盡量保證嚴(yán)格的消毒和無菌器械，快速、精準(zhǔn)地切取適量組織，隨后立即放入無菌樣本保存管或者保存袋中，并迅速將其置于低溫環(huán)境下運(yùn)輸，盡量避免組織自溶現(xiàn)象的發(fā)生，保障后續(xù)檢驗(yàn)工作能夠順利開展。

4.2 貝爾曼氏法

貝爾曼氏法又稱為糞便幼蟲分離法，是利用線蟲的趨濕性和重力作用，使線蟲從糞便樣本中主動(dòng)遷移到水中，進(jìn)而收集線蟲。需要準(zhǔn)備漏斗、鐵架臺(tái)、收集管、濾網(wǎng)或紗布，將采集到的羊糞便碾碎后，小心置于貝爾曼氏裝置內(nèi)，在裝置內(nèi)部加入適量溫水，水溫通常保持在35 ℃左右，若室溫過低，可在距離漏斗12 cm處添加一盞60 w的燈泡，讓糞便充分浸泡其中，隨后靜置一段時(shí)間。由于羊肺線蟲幼蟲具有向水性，在靜置過程中，幼蟲可穿透糞渣與紗布，最終沉降到乳膠管底部的水中。待靜置時(shí)間結(jié)束，輕輕打開止水夾，收集少量底部水樣，可以通過靜置1～2 h以及離心的方式，獲取富含幼蟲的沉淀物。將沉淀物均勻鋪在載玻片上，置于顯微鏡下仔細(xì)觀察，便能發(fā)現(xiàn)羊肺線蟲以及特殊的身體結(jié)構(gòu)，如交合傘等。

4.3 組織切片染色法

組織切片具有準(zhǔn)確性和特異性。將采集到的羊肺臟組織使用10%PFA（多聚甲醛）進(jìn)行固定，一般置于4 ℃冰箱固定10 h左右，使其充分固定，之后使用不同濃度的酒精進(jìn)行脫水以及石蠟包埋。將包埋的蠟塊修整成合適大小，置于切片機(jī)上制作石蠟厚度在4～6 μm的切片。將收集到的切片進(jìn)行脫蠟及Hamp;E（蘇木精-伊紅）染色，或選用抗酸染色等特殊的寄生蟲染色方法，對(duì)切片進(jìn)行染色處理。經(jīng)過染色的切片在顯微鏡下觀察，蟲體多呈絲狀，也可觀察到蟲體周圍的組織病理變化，如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤，肺泡結(jié)構(gòu)破壞等炎癥反應(yīng)。

4.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

目前關(guān)于羊肺線蟲的ELISA檢測方法文獻(xiàn)較少，根據(jù)其他寄生蟲ELISA方法建立羊肺線蟲的ELISA檢測方法，具有一定的可行性。利用寄生蟲的粗蛋白、可溶性抗原以及代謝分泌產(chǎn)物建立間接ELISA或斑點(diǎn)ELISA，可檢測出被寄生蟲感染4～7 d的羊血清中特異性抗體，天然抗原ELISA存在蟲體抗原不易質(zhì)控，交叉反應(yīng)嚴(yán)重等缺點(diǎn)，制備充足抗原，可提高檢測準(zhǔn)確率[1]。

4.5 分子生物學(xué)檢測

由于肺線蟲的種類不同，特別是小型肺線蟲的種類很多，需要設(shè)計(jì)多種引物用以進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)，常用步驟為提取蟲體基因組DNA，對(duì)蟲體特異性基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增、電泳、克隆以及測序，最后進(jìn)行序列分析，構(gòu)建對(duì)應(yīng)的進(jìn)化樹，從而確定肺線蟲的種類。在王俊偉[2]等的研究中，對(duì)1頭秦嶺牛肺線蟲樣本做了種屬鑒定，對(duì)蟲體ITS-2rRNA進(jìn)行擴(kuò)增、克隆、測序以及分析，系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，該類型肺線蟲屬于羚牛變圓線蟲，其與原圓科變圓屬線蟲的序列差異為24.1%～25.4%。

5 防治措施

5.1 治療

對(duì)于羊肺線蟲病主要是藥物驅(qū)蟲與對(duì)癥治療相結(jié)合的手段，以提高治療效果。常用藥物包括左旋咪唑、氰乙酰肼、丙硫咪唑、多拉菌素以及伊維菌素等，對(duì)于肺部感染，可以使用消炎抗菌以及提升免疫力的藥物，常用藥物包括維生素C、恩諾沙星、氟苯尼考、卡那霉素、青霉素以及磺胺嘧啶等。

方案一：先對(duì)病羊進(jìn)行體重稱量，按體重皮下注射

0.2 mg/kg多拉菌素，對(duì)于重癥病羊，靜脈注射適量的維生素C以及青霉素，對(duì)于假定的病羊，也可以相同劑量使用多拉菌素，經(jīng)過14 d的治療，表觀癥狀基本消失，采食等恢復(fù)正常。

方案二：口服10 mg/kg的丙硫咪唑或左旋咪唑，一般情況下，每種藥使用15 d，針對(duì)繼發(fā)感染，可使用160萬IU的青霉素鈉配合5%葡萄糖注射液，進(jìn)行靜脈注射，1次/d，連用3 d，針對(duì)病羊體質(zhì)變差，可使用黃芪多糖散等中成藥。

方案三：按0.03 mL/kg體重使用伊維菌素皮下注射，該驅(qū)蟲藥具有低毒、高效以及廣譜的優(yōu)點(diǎn)，或口服25 mg/kg丙硫咪唑，一周后重復(fù)用藥，針對(duì)并發(fā)癥，使用20%磺胺嘧啶鈉20 mL，配合5%葡萄糖100 mL，靜脈注射，1次/d，連用3 d。

方案四：使用氰乙酰肼按17.5 mg/kg體重口服，或按

15 mg/kg皮下注射或肌肉注射，羊只體重超過25 kg，總用量不宜超過0.4 g。氰乙酰肼對(duì)網(wǎng)尾線蟲的成蟲以及部分原圓線蟲效果較好，對(duì)于繆勒線蟲無效，該藥過量使用易引發(fā)痙攣，可使用同等劑量的鹽酸吡哆辛解毒。

5.2 防控

對(duì)于該病，多從防御性驅(qū)蟲、幼蟲滅殺以及飼養(yǎng)管理幾個(gè)方面入手。一般養(yǎng)殖場會(huì)根據(jù)季節(jié)、地理位置以及飼養(yǎng)環(huán)境等方面進(jìn)行防御性驅(qū)蟲，如春末以及秋末這兩個(gè)時(shí)間段，選用20%氰戊菊酯乳油、螨凈、0.05%辛硫磷溶液，以及0.1%殺蟲脒溶液等對(duì)羊群進(jìn)行藥浴。針對(duì)幼蟲，可收集羊群產(chǎn)生的糞便，進(jìn)行堆肥，通過熱處理的方式，將羊肺線蟲幼蟲滅殺。飼養(yǎng)管理方面，以提高羊群抵抗力以及保持羊舍干燥、透光以及通風(fēng)為主，避免羊只飲用死水，禁止在沼澤放牧，若需在同一塊草場放牧，應(yīng)優(yōu)先放牧羔羊，待羔羊離開后，再放牧成年羊，可減少成年羊糞便中的幼蟲被羔羊采食的概率。羊舍建設(shè)最好可以與地面留有2 m以上的空間，羊床具有1 cm的間隙，并且有一定的傾斜度，以此可方便收集糞便并進(jìn)行堆肥。

結(jié)語

羊肺線蟲病對(duì)羔羊的發(fā)育以及成年羊的生產(chǎn)性能有顯著影響，會(huì)嚴(yán)重降低養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)收益。了解羊肺線蟲結(jié)構(gòu)、生活史及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)，并針對(duì)性開展羊肺線蟲病的防治措施，可減少該病的發(fā)生概率，保障養(yǎng)羊業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張少華，王帥，鄒揚(yáng)，等.羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病檢測方法研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2024，55（4）：1499-1510.

[2] 王俊偉，潘廣林，郭慶彬，等.一種秦嶺羚牛肺線蟲新種——羚牛變圓線蟲的鑒定[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2022，42（4）：704-709.