二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬激活的轉(zhuǎn)錄組分析及實驗驗證

摘 要：為尋找二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬激活的調(diào)控蛋白，用20 nm的二氧化硅納米顆粒處理大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞株，對細(xì)胞樣品進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析及試驗.根據(jù)CCK-8方法測定的細(xì)胞死亡率及自噬Marker蛋白的表達(dá)量確定誘導(dǎo)時長，由此制備細(xì)胞樣品并進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序及分析預(yù)測，通過RNA干擾實驗篩選具有自噬調(diào)控功能的蛋白質(zhì).研究結(jié)果表明，20 nm二氧化硅納米顆粒處理細(xì)胞的較優(yōu)誘導(dǎo)時間為24 h，自噬Marker蛋白LC3B-II的表達(dá)隨著納米顆粒處理時間的增加而增高；在轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果中共篩選到295個差異表達(dá)基因，差異基因的KEGG富集分析結(jié)果顯示大部分基因參與多個自噬調(diào)控信號通路；通過RNA干擾實驗和免疫印跡實驗驗證，結(jié)果表明干擾Arrdc4基因的表達(dá)可以降低細(xì)胞內(nèi)LC3B-II的表達(dá)水平.綜合考慮所有實驗結(jié)果，Arrdc4可能通過KEGG顯著富集的信號通路影響二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬，其調(diào)控機(jī)制仍有待深入挖掘.

關(guān)鍵詞：二氧化硅納米顆粒；自噬；轉(zhuǎn)錄組；Arrdc4基因

中圖分類號：Q291 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1000-2367（2025）03-0143-06

細(xì)胞自噬是一種生物體維持自身穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)方式，在物質(zhì)能量缺乏、環(huán)境脅迫出現(xiàn)及外界物質(zhì)入侵時啟動，保證細(xì)胞內(nèi)部穩(wěn)態(tài)，保證細(xì)胞的正常生存.除此之外，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)損壞及異常的細(xì)胞器，出現(xiàn)冗余及錯誤折疊的蛋白質(zhì)時，細(xì)胞的自噬也開始發(fā)揮作用，保證細(xì)胞內(nèi)部生命活動的順利進(jìn)行^［1］.

隨著納米技術(shù)的快速發(fā)展，納米材料由于其優(yōu)越的理化特性被廣泛應(yīng)用于食品、紡織、化妝品以及工業(yè)制造等領(lǐng)域^［2］.不僅如此，納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用更為深入，開發(fā)出了服務(wù)于人類健康的納米醫(yī)療、納米消毒以及納米顯影診斷等一系列醫(yī)學(xué)技術(shù)，對當(dāng)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展有巨大影響^［3-4］.二氧化硅納米顆粒是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛的一種納米材料，各種二氧化硅納米顆粒藥物復(fù)合物被合成并應(yīng)用于控釋藥物和靶向顯像劑兩個領(lǐng)域^［5］.靜脈注射的納米顆粒可與血管內(nèi)壁細(xì)胞發(fā)生相互作用，可能影響血管穩(wěn)態(tài)和功能的維持^［6-7］.隨著自噬領(lǐng)域研究的逐漸深入，納米顆粒引發(fā)的細(xì)胞自噬效應(yīng)逐漸凸顯，已有研究發(fā)現(xiàn)50 μg/mL 20 nm的二氧化硅納米顆粒相比大尺寸的納米顆粒可以顯著誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的發(fā)生，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞的壞死^［4］.因此，納米材料對人類健康的潛在風(fēng)險尚未得到充分評估，相關(guān)毒理機(jī)制亟需闡明.

本研究以20 nm二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞為研究對象，根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測序及分析，預(yù)測其中可能具有自噬誘導(dǎo)調(diào)控功能的蛋白質(zhì)，并通過實驗進(jìn)行驗證，為二氧化硅納米材料的安全醫(yī)學(xué)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器

M199基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基、青霉素-鏈霉素雙抗購于美國Hyclone公司.胎牛血清、細(xì)胞培養(yǎng)用磷酸鹽緩沖液購于杭州四季青生物工程材料有限公司.細(xì)胞裂解液、蛋白定量試劑盒、RNA轉(zhuǎn)染試劑盒、蛋白酶抑制劑購于上海生工有限責(zé)任公司.Anti-LC3B-II抗體、Anti-ACTB抗體購于武漢三鷹生物科技有限公司.20 nm 二氧化硅納米顆粒（SISN20-25M）購于美國nanoComposix公司.細(xì)胞培養(yǎng)箱（日本SANYO公司），蛋白電泳轉(zhuǎn)印套裝（美國BIO-RAD公司），雙色紅外成像系統(tǒng)（美國奧德賽生物科技公司）.

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和納米顆粒的自噬誘導(dǎo)

用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)5×10⁴個細(xì)胞后，鋪板于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板一孔中，加入適量細(xì)胞培養(yǎng)基于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37 ℃，CO₂體積分?jǐn)?shù)為5%.培養(yǎng)至細(xì)胞匯合度在約70%時，用磷酸鹽緩沖液潤洗細(xì)胞，再用含有50 μg/mL 20 nm二氧化硅納米顆粒的細(xì)胞培養(yǎng)基處理細(xì)胞0、12、24、36 h.處理后的細(xì)胞樣品用于細(xì)胞存活率檢測及免疫印記實驗.

1.3 轉(zhuǎn)錄組測序及分析

用二氧化硅納米顆粒處理細(xì)胞不同時間段，每個時間點約取1×10⁷個細(xì)胞，每處理共3個生物學(xué)重復(fù).處理完畢后加入Trizol充分混勻進(jìn)行低溫保存.利用有機(jī)溶劑多次離心取上清的方法獲取RNA沉淀并用DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶解分裝.使用Nanodrop 2000 spectrophotometer檢測RNA樣品純度.Qubit 3.0檢測RNA樣品濃度.使用Labchip GX檢測樣品RNA的RQS（RNA quality score）值.

使用諾唯贊轉(zhuǎn)錄組建庫試劑盒（NR612-01）進(jìn)行文庫構(gòu)建，建庫完成將樣品送至武漢百邁克生物科技有限公司進(jìn)行測序，得到經(jīng)過質(zhì)控過濾后的高質(zhì)量測序數(shù)據(jù)（clean data）.用Tophat-bowtie2-Cufflinks轉(zhuǎn)錄組程序進(jìn)行各基因的注釋以及表達(dá)量的計算.根據(jù)FPKM（fragments per kilobase of exon model per million mapped fragments）值過濾篩選差異表達(dá)基因^［8］.KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）富集分析采用R語言進(jìn)行超幾何分布計算^［9］.相關(guān)熱圖及基因表達(dá)量均采用R語言進(jìn)行繪制.

1.4 細(xì)胞基因敲降實驗

用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)3×10⁴個細(xì)胞后，鋪板于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板一孔中，加入1 mL細(xì)胞培養(yǎng)基至于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同1.2.細(xì)胞匯合度于60 %時，用RNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行siRNA的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染時間為24 h.轉(zhuǎn)染結(jié)束后，用磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞3次，加入二氧化硅納米顆粒進(jìn)行自噬誘導(dǎo)，誘導(dǎo)結(jié)束后進(jìn)行后續(xù)免疫印跡實驗.

1.5 蛋白免疫印跡實驗與熒光定量PCR實驗

細(xì)胞處理完畢后，用磷酸鹽緩沖液洗滌，加入1 mL細(xì)胞裂解液并置于4 ℃冰箱中裂解2 h.細(xì)胞裂解液離心取上清，用蛋白定量試劑盒進(jìn)行定量.取適量蛋白溶液并加入上樣緩沖液混勻加熱變性后上樣，進(jìn)行SDS-PAGE電泳.電泳完畢后，用甲醇潤洗PVDF（聚偏二氟乙烯）膜，接著進(jìn)行轉(zhuǎn)膜.轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，用LC3B-II蛋白質(zhì)一抗4 ℃孵育過夜.TBST溶液洗滌3次后，二抗室溫孵育2 h，再以TBST洗滌3次后進(jìn)行顯影.取細(xì)胞RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA.熒光定量PCR反應(yīng)體系為 50 μL，40 個循環(huán)，各處理另設(shè)置2個重復(fù)，同時設(shè)空白對照.最后通過各樣品的Ct值對基因表達(dá)的情況進(jìn)行定量.擴(kuò)增引物由武漢奧科鼎盛有限公司設(shè)計合成.Arrdc4基因的上下游引物分別為：5'-AGCCATATTCCAAACCCAGAC-3'和5'-TCTTCAGCATCTTCCCATTCC-3'.內(nèi)參基因為β-actin.

1.6 數(shù)據(jù)分析

使用R語言的t.test函數(shù)對實驗數(shù)據(jù)的差異顯著性進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行分析.

2 結(jié)果與分析

2.1 二氧化硅納米顆粒的細(xì)胞自噬誘導(dǎo)效應(yīng)

取部分細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)至細(xì)胞匯合度到80%左右時，用磷酸鹽緩沖液潤洗細(xì)胞3次，后加入含有50 μg/mL 20 nm二氧化硅納米顆粒的細(xì)胞培養(yǎng)基處理細(xì)胞，處理時長為0、12、24、36 h.在各時間點檢測細(xì)胞的存活率，由圖1（a）可知，在前24 h實驗處理中，二氧化硅納米顆粒的處理對細(xì)胞存活率影響較小，但是當(dāng)處理時長達(dá)到36 h后，細(xì)胞死亡率顯著上升.接著，本研究采用免疫印跡實驗檢測細(xì)胞自噬Marker LC3B-II蛋白的表達(dá)量，判斷二氧化硅納米顆粒的處理對細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)效應(yīng).由圖1（b）可知，隨著納米顆粒處理時間的變長，細(xì)胞內(nèi)LC3B-II蛋白的表達(dá)量逐漸提高，在24 h達(dá)到最大.綜上所述，二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的較優(yōu)處理時長為24 h.

2.2 轉(zhuǎn)錄組細(xì)胞樣品的提取質(zhì)控

轉(zhuǎn)錄組樣品的質(zhì)控對于后續(xù)建庫以及測序十分重要，不合格的質(zhì)控會直接導(dǎo)致測序的冗余和失敗.因此，用50 μg/mL 20 nm二氧化硅納米顆粒分別處理細(xì)胞0 h和24 h，每個樣品3次重復(fù).提取各樣品mRNA后，對其純度及質(zhì)量進(jìn)行檢測.由附錄表S1可知，各樣本的mRNA質(zhì)量濃度均在600 ng/μL以上，每個樣本的mRNA總量均大于40 μg，滿足轉(zhuǎn)錄組測序的總量要求.各樣本的質(zhì)量評估參數(shù)RQS值均在9以上且OD_260/280均位于合理范圍內(nèi)，這一結(jié)果表明各樣本的mRNA提取較完整，無雜質(zhì)污染，純度較高.以上數(shù)據(jù)表明，轉(zhuǎn)錄組樣品的mRNA質(zhì)控達(dá)標(biāo)，可以進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組建庫和上機(jī)測序.

2.3 各樣本轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的基本統(tǒng)計

各樣品轉(zhuǎn)錄組測序質(zhì)檢完畢后，共產(chǎn)生不低于60 G的clean data，各樣本的數(shù)據(jù)產(chǎn)出量大體一致（附錄表S2）.每個樣本的反映測序堿基質(zhì)量完整度的Clean Q30值都不小于80 %，說明各樣品種中堿基測序識別的可靠性較高，可以用于后續(xù)的數(shù)據(jù)分析.

2.4 差異基因的篩選

對所有樣本的clean data注釋及計算完畢后，利用Cufflinks程序的Cuffdiff腳本包進(jìn)行2個時間點處理組差異基因的數(shù)據(jù)過濾，過濾閾值定為：log2（fold change）＞1.5且p＜0.05；log2（fold change）＜-1.5且p＜0.05.差異基因的統(tǒng)計結(jié)果見附錄圖S1，圖S1中紅色點表示上調(diào)基因，藍(lán)色點表示下調(diào)基因.根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果，共篩選出295個差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因占169個，下調(diào)基因占126個.在上調(diào)基因中，log2（fold change）大于1.5的基因有36個；log2（fold change）位于1.5和2.5之間的有133個，約占上調(diào)基因總數(shù)的78.8%.在下調(diào)基因中，log2（fold change）小于-1.5的基因有13個；log2（fold change）位于-1.5和-2.5之間的有113個，約占下調(diào)基因總數(shù)的83.1 %.由統(tǒng)計結(jié)果可看出，上調(diào)基因的數(shù)量要明顯多于下調(diào)基因的數(shù)量，從上調(diào)基因中可能更容易篩選出其中具有調(diào)控功能的蛋白質(zhì).

2.5 富集分析

為了了解過濾出的差異基因的生物學(xué)功能及它們可能參與的信號通路，對這些基因進(jìn)行KEGG富集分析，如圖2所示，右側(cè)不同的顏色圖示代表不同P-value，從深藍(lán)色到淺藍(lán)色，表示P-value從大到小，富集程度越來越顯著.圓點的大小（count）代表富集到此通路的基因數(shù)目.由富集分析結(jié)果可知，過濾出的差異基因富集于多種與細(xì)胞自噬調(diào)控相關(guān)的信號通路，例如動物細(xì)胞自噬（autophagy-animal，hsa04140），雷帕霉素靶蛋白信號通路（mTOR signaling pathway，hsa04150），細(xì)胞循環(huán)（cell cycle，hsa04110）和絲裂原活化蛋白激酶信號通路（MAPK signaling pathway，hsa04010）等.這一結(jié)果表明差異基因可能在二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的相關(guān)通路中發(fā)生功能.

2.6 表達(dá)量展示及功能驗證

在差異基因的富集分析中，可以看出差異基因的富集結(jié)果表現(xiàn)出了與細(xì)胞自噬的緊密聯(lián)系.選取上調(diào)基因中前18個進(jìn)行實驗篩選及驗證，這些基因在兩個時間點處理組的表達(dá)量如圖3所示，圖中底部橫坐標(biāo)代表樣本，右側(cè)縱坐標(biāo)代表各差異基因，右側(cè)圖示代表各基因的相對表達(dá)情況，黃色代表低表達(dá)，紅色代表高表達(dá).

對選取的差異基因設(shè)計siRNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染干擾基因表達(dá)，轉(zhuǎn)染時間為48 h，轉(zhuǎn)染完畢后用磷酸鹽緩沖液潤洗，加入含有50 μg/mL 20 nm二氧化硅納米顆粒的細(xì)胞培養(yǎng)基，處理細(xì)胞24 h.處理完畢后，用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，提取蛋白質(zhì)檢測自噬Marker LC3B-II的表達(dá)量.在這一篩選過程中，用siRNA敲降A(chǔ)rrdc4（arrestin domain containing 4）基因表達(dá)后，可以減少二氧化硅納米顆粒處理細(xì)胞過程中LC3B-II的表達(dá)量，從而影響細(xì)胞自噬的發(fā)生.結(jié)果如圖4（a）所示，其中NC為陰性對照.

用熒光定量PCR對二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬24 h后Arrdc4基因表達(dá)情況進(jìn)行輔助驗證.在熒光定量PCR的實驗結(jié)果中，二氧化硅納米顆粒處理24 h后Arrdc4的表達(dá)量出現(xiàn)上升（如圖4（b）），這與轉(zhuǎn)錄組表達(dá)展示圖（圖3）中Arrdc4基因的表達(dá)上調(diào)的結(jié)論相一致.

3 討論與總結(jié)

納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用逐漸深入的同時，其毒性機(jī)理的重要性逐漸突顯，并被學(xué)者重視.學(xué)術(shù)界普遍認(rèn)為納米顆粒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬紊亂效應(yīng)是納米材料的毒性特征之一，相關(guān)毒理機(jī)制的探究和挖掘有助于了解其毒理成因，也有助于對納米材料在生物醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用進(jìn)行科學(xué)地評估^［10-11］.

二氧化硅納米顆粒的毒性機(jī)制研究在多種細(xì)胞類型上都有探索.在心肌H9c2細(xì)胞中，納米二氧化硅的細(xì)胞毒性呈現(xiàn)粒徑、劑量和時間依賴性；顆粒引起氧化應(yīng)激，細(xì)胞內(nèi)活性氧和丙二醛的水平升高；最近的研究表明，細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激就是納米顆粒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的原因之一^{［3，12-13］}.二氧化硅納米顆粒還通過誘導(dǎo)ROS和脂質(zhì)過氧化和谷胱甘肽耗竭，以劑量依賴性方式誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的氧化應(yīng)激^［14］.然而，二氧化硅納米顆粒在醫(yī)學(xué)上主要用于合成藥物載體和顯影劑，在使用過程中納米顆粒不可避免地會進(jìn)入人體，對人類的健康產(chǎn)生影響^［4-5］.靜脈注射的納米顆粒可與血管內(nèi)壁細(xì)胞發(fā)生相互作用，誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，進(jìn)而可能影響血管穩(wěn)態(tài)和功能.本研究以20 nm二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞為研究對象，試圖通過轉(zhuǎn)錄組測序及分析預(yù)測，尋找到其中可能具有自噬調(diào)控功能的蛋白質(zhì)，為納米材料的安全應(yīng)用提供理論基礎(chǔ).

在本研究中，首先探究了二氧化硅納米顆誘導(dǎo)大鼠內(nèi)皮細(xì)胞的較優(yōu)誘導(dǎo)時間.根據(jù)較優(yōu)誘導(dǎo)條件進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組質(zhì)控、建庫及測序，最后發(fā)現(xiàn)了169個差異上調(diào)基因.根據(jù)KEGG富集分析可以看出差異基因在多個自噬相關(guān)的信號調(diào)控通路中富集，這一結(jié)果表明通過測序分析篩選出的差異基因與自噬的發(fā)生存在一定聯(lián)系.由此深挖其中具有自噬調(diào)控功能的蛋白質(zhì)，最終發(fā)現(xiàn)Arrdc4在其中發(fā)揮調(diào)控功能.Arrdc4是一種α-阻截蛋白，其主要作用是調(diào)控細(xì)胞胞吞作用及信號傳導(dǎo).已有文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)ARRDC1和Arrdc4調(diào)節(jié)細(xì)胞囊泡的形成，但相關(guān)調(diào)控機(jī)制尚未闡明^［15］.在本研究中，通過敲降A(chǔ)rrdc4基因可以明顯減少二氧化硅納米顆粒處理細(xì)胞過程中LC3B-II的表達(dá)量，影響細(xì)胞自噬的發(fā)生.綜上，Arrdc4蛋白可能通過KEGG富集出的信號通路影響二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的發(fā)生.

本研究圍繞二氧化硅納米顆粒誘導(dǎo)大鼠內(nèi)皮細(xì)胞自噬為對象進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析及其實驗驗證，發(fā)現(xiàn)Arrdc4在納米顆粒誘導(dǎo)自噬過程中發(fā)揮功能.干擾該蛋白基因表達(dá)后，細(xì)胞內(nèi)LC3B-II的表達(dá)量較少，自噬受到抑制.另外，本研究還存在很多不足，例如在本研究里沒有對樣本進(jìn)行其他組學(xué)的測序及聯(lián)合分析，深挖調(diào)控通路.在未來，本研究將繼續(xù)深入探究下去，利用其他生物信息學(xué)手段挖掘納米顆粒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬紊亂的毒理機(jī)制，并在其他細(xì)胞里進(jìn)行實驗驗證.最后，希望本研究結(jié)果可以為納米顆粒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬毒理機(jī)制的闡明提供幫助和理論信息.

附錄見電子版（DOI：10.16366/j.cnki.1000-2367.2023.11.20.0002）.

參 考 文 獻(xiàn)

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Transcriptome analysis and experimental verification of autophagy

activation induced by silica nanoparticlesRuan Chen^1a，b， Wu Ran^1c， Wang Laiyou^1a，b， Du jia^1a，b， Cao Jingbo²

（1. a. Henan Key Laboratory of Industrial Microbial Resources and Fermentation; b. School of Biological and Chemical Engineering;

c. School of Information Engineering， Nanyang Institute of Technology， Nanyang 473004， China; 2. College of Mathematics and

Statistics， Liaoning University， Shenyang 110036， China）

Abstract： In order to find the regulatory proteins of autophagy activation induced by silica nanoparticles， the rat vascular endothelial cell line was treated with 20 nm silica nanoparticles， and the cell samples were subjected to transcriptome sequencing analysis and subsequent verification. The optimal induction time was determined according to the cell death rate by CCK-8 kits and the expression of autophagy Marker protein. Then cell samples which were treated with 20 nm silica nanoparticles were prepared for transcriptome sequencing and analysis. The differentially expressed genes were selected for RNA interference experiments to screen the proteins with autophagy regulatory function. The results showed that the optimal induction time of cells treated with 20 nm silica nanoparticles was 24 h. The expression level of autophagy Marker protein LC3B-II increased with the increase of nanoparticle treatment time. A total of 295 differentially expressed genes were identified in the transcriptome sequencing results. KEGG enrichment analysis of the differentially expressed genes showed that most of the genes were mainly involved in multiple autophagy regulatory pathways. The subsequent experiments were performed on the differentially expressed genes， which were verified by RNA interference experiment and Western blot. The experimental results showed that interfering the expression of Arrdc4 gene could reduce the expression level of LC3B-II in cells. In this study， we conducted transcriptome sequencing analysis and subsequent experiments to verify the cell autophagy induced by silica nanoparticles， and found that interference with Arrdc4 gene expression could reduce the protein expression of LC3B-II in cells. Considering all the experimental results， Arrdc4 may affect silica nanoparticles-induced autophagy through KEGG significantly enriched signaling pathways， and the regulatory mechanism remains to be further explored.

Keywords： silica nanoparticles; autophagy; transcriptome; Arrdc4 gene

［責(zé)任編校 劉洋 趙曉華］