胡蘆巴果膠抗氧化活性研究

摘要 ［目的］研究胡蘆巴果膠的體外抗氧化活性。［方法］以抗壞血酸（VC）為陽性對(duì)照，用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除試驗(yàn)來評(píng)價(jià)胡蘆巴藥材水提醇沉得到的胡蘆巴果膠的抗氧化活性。［結(jié)果］胡蘆巴果膠、抗壞血酸清除DPPH自由基的IC50分別為0.340、0.016 mg/mL。［結(jié)論］胡蘆巴果膠具有抗氧化活性，在相同濃度下胡蘆巴果膠的抗氧化活性略小于抗壞血酸的抗氧化活性。

關(guān)鍵詞 胡蘆巴果膠；抗氧化活性；DPPH自由基

中圖分類號(hào) R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2025）06-0165-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.06.038

Study on Antioxidant Activity of Fenugreek Pectin

WEI Yan-ni， FANG Yu， WU Peng et al

（Hanzhong Vocational and Technical College，Hanzhong，Shaanxi 723000）

Abstract ［Objective］To study the in vitro antioxidant activity of fenugreek pectin. ［Method］Ascorbic acid （VC） was used as a positive control， and 1，1 -diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine （DPPH） free radical scavenging experiment was used to evaluate the antioxidant activity of fenugreek pectin obtained by the water extraction and alcohol precipitation of fenugreek. ［Result］The IC50 of fenugreek pectin and ascorbic acid scavenging DPPH free radical were 0.340 and 0.016 mg/mL， respectively. ［Conclusion］Fenugreek pectin has antioxidant activity. The antioxidant activity of fenugreek pectin is slightly less than that of ascorbic acid at the same concentration.

Key words Fenugreek pectin;Antioxidant activity;DPPH free radicals

胡蘆巴（Trigonella foenum-graecum L.）為豆科植物胡蘆巴的干燥成熟種子。胡蘆巴又名苦豆、香豆子、蘆巴、胡巴、季豆、蘆巴子、小木夏等［1-3］，主要分布在地中海東岸、中東、伊朗高原、喜馬拉雅等地。胡蘆巴性溫，味苦，歸腎經(jīng)，具有溫腎助陽、散寒、止痛的功效，臨床上常用于治療腎陽不足、下焦虛冷、陽痿滑泄、精冷囊濕、小腹冷痛、寒疝腹痛、寒濕腳氣、足膝冷痛等癥［4-6］。藥理研究表明胡蘆巴具有降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、抗腫瘤、抗氧化、減肥通便等藥理作用［7-9］，在降血糖、降血脂方面的研究已較為深入并證明其確有療效，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床對(duì)應(yīng)的疾病中，而對(duì)于胡蘆巴的其他藥理活性研究還不夠深入。近年來，胡蘆巴的抗氧化活性引起了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，孫國棟等［10］對(duì)胡蘆巴的提取物進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，并對(duì)不同地區(qū)胡蘆巴的醇提物及胡蘆巴大孔樹脂提取物進(jìn)行抗氧化活性研究，結(jié)果表明，胡蘆巴各提取物具有清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的作用；邵明昱［11］對(duì)胡蘆巴種子總黃酮提取、分離、抑菌及抗氧化活性進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胡蘆巴總黃酮的抗氧化活性很強(qiáng)，在相同濃度下比抗壞血酸的活性更強(qiáng)。

近年來，天然抗氧化劑發(fā)展迅速，綠色、天然、純植物提取物逐漸得到人們的青睞，在植物中選擇和提取天然抗氧化劑已成為國內(nèi)外科研人員研究開發(fā)的熱點(diǎn)［12］。胡蘆巴作為我國傳統(tǒng)中藥，同時(shí)又作為藥食同源之品［13］，并且資源豐富、價(jià)格適中，其在安全性、經(jīng)濟(jì)性和普及性上具有很大的優(yōu)勢。該試驗(yàn)旨在研究胡蘆巴果膠的抗氧化活性，以抗壞血酸（VC）為陽性對(duì)照，采用DPPH自由基清除試驗(yàn)評(píng)價(jià)胡蘆巴果膠的抗氧化活性，為胡蘆巴在食品、藥品、保健品、化妝品等方面應(yīng)用提供依據(jù)，也為胡蘆巴的進(jìn)一步研究和開發(fā)提供科學(xué)參考。

1 材料

1.1 試驗(yàn)儀器與設(shè)備 日本島津UV-2550型紫外可見分光光度儀（上海善可精密儀器有限公司）；電子萬用爐（上海科恒實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）；超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）；AR1140分析天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；QE-300克型萬能粉碎機(jī)（浙江屹立工貿(mào)有限公司）；循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。

1.2 試驗(yàn)材料 胡蘆巴藥材購買于西安萬壽路藥材市場，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院胡本祥教授鑒定為豆科植物胡蘆巴（Trigonella foenum-graecum L.）的干燥成熟種子；抗壞血酸（VC），批號(hào)W13DO1XL，科昊生物工程有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH），批號(hào)D9133，sigma公司；無水乙醇，天津天力化學(xué)試劑有限公司；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

2.1.1 供試品的制備。取胡蘆巴藥材于萬能粉碎機(jī)中打粉，稱量胡蘆巴粉末約100 g置于3 000 mL的圓底燒瓶中，加1 000 mL 純凈水提取1 h，過濾，濾渣同法再提取一次，過濾，2次濾液合并得總濾液900 mL，將合并的提取液濃縮至400 mL，加95%乙醇3 400 mL使藥液的含醇量達(dá)85%，靜置過夜，抽濾，濾液回收乙醇；濾渣用無水乙醇浸泡，進(jìn)行脫水處理，濾渣陰干，稱量，得胡蘆巴果膠粗品9.31 g，4 ℃冷藏備用。

精密稱量胡蘆巴果膠粗品49.94 mg于25 mL容量瓶中，用純凈水溶解，并置于超聲波清洗器超聲1 h，定容至刻度，4 ℃冷藏備用。

精密稱量DPPH 19.5 mg用無水乙醇溶解，定容25 mL的容量瓶中，即得DPPH標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，4 ℃冷藏備用。

2.1.2 對(duì)照品的制備。精密稱量抗壞血酸15.2 mg于250 mL棕色容量瓶中，用純凈水溶解，定容至刻度，4 ℃冷藏備用。

2.2 DPPH自由基活性測定試驗(yàn) 以抗壞血酸（VC）作為陽性對(duì)照，用以下公式［14-16］計(jì)算胡蘆巴果膠粗品對(duì)DPPH自由基的清除率：

清除率=1-［（Ai-Aj）/A0］×100%

式中：Ai為加供試品與DPPH溶液反應(yīng)在517 nm的吸光度；Aj為僅加供試品溶液在517 nm的吸光度；A0為僅加DPPH溶液在517 nm的吸光度。

2.3 DPPH標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密移取DPPH標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.8、1.0、1.2、1.5、2.0 mL于5 mL容量瓶中，使用純凈水將其定容至刻度線，靜置30 min，分別測定5個(gè)溶液在517 nm 的吸光度，記錄所得吸光度。

以DPPH質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制DPPH標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=2.276 8x+0.005 0（R2=0.999 5），線性范圍為0.124 8～0.312 0 mg/mL。

2.4 陽性對(duì)照品清除DPPH自由基試驗(yàn) 用移液槍分別精密移取抗壞血酸0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于10 mL的一次性試管中，分別加2 mL的DPPH標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，再依次將各試管用純凈水補(bǔ)足至5 mL，于黑暗處反應(yīng)30 min，分別測其吸光度，并計(jì)算抗壞血酸對(duì)DPPH自由基的清除率，結(jié)果如圖2所示。

根據(jù)圖2中曲線方程求出清除率為50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的抗壞血酸濃度即IC50，通過計(jì)算可知抗壞血酸IC50為0.016 mg/mL；從圖2還可看出抗壞血酸對(duì)DPPH自由基的清除率與其濃度有關(guān)，抗壞血酸的濃度越大，其對(duì)DPPH自由基的清除率越大。

2.5 胡蘆巴果膠清除DPPH自由基試驗(yàn) 用移液槍分別精密移取胡蘆巴果膠溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mL于10 mL的一次性試管中，分別依次加2 mL的DPPH標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，再依次將各試管用純凈水補(bǔ)足至5 mL，于黑暗處反應(yīng)30 min，分別測其吸光度，并計(jì)算胡蘆巴果膠對(duì)DPPH自由基的清除率，結(jié)果如圖3所示。

根據(jù)圖3中曲線方程求出清除率為50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的胡蘆巴果膠濃度即胡蘆巴果膠IC50，通過計(jì)算得知胡蘆巴果膠的IC50為0.340 mg/mL。從圖3還可以看出胡蘆巴果膠對(duì)DPPH自由基的清除率與其濃度有關(guān)，胡蘆巴果膠的濃度越大，對(duì)DPPH自由基的清除率越大。但結(jié)合抗壞血酸的IC50分析可知，胡蘆巴果膠的自由基清除能力小于抗壞血酸，即胡蘆巴果膠的抗氧化活性小于抗壞血酸。

2.6 胡蘆巴果膠、抗壞血酸與DPPH反應(yīng)時(shí)間對(duì)DPPH自由基清除率的影響 分別用移液槍精密移取胡蘆巴果膠溶液0.4 mL（質(zhì)量濃度為0.159 9 mg/mL）、抗壞血酸1.0 mL（質(zhì)量濃度為0.012 1 mg/mL）置于一次性試管中，加2 mL的DPPH標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用純凈水補(bǔ)足至5 mL，分別在0、10、20、30、40、50、60 min測其吸光度，計(jì)算清除率，結(jié)果如圖4所示。

從圖4可以看出，胡蘆巴果膠、抗壞血酸與DPPH反應(yīng)時(shí)間對(duì)DPPH自由基清除率有影響，并且在0～30 min影響較為顯著，但在30 min以后清除率基本趨于穩(wěn)定，所以，在試驗(yàn)的過程中，反應(yīng)時(shí)間可以嚴(yán)格控制在30 min左右。

3 結(jié)論與討論

該試驗(yàn)采用抗壞血酸（VC）為陽性對(duì)照，用DPPH自由基清除來評(píng)價(jià)胡蘆巴藥材果膠的抗氧化活性，結(jié)果顯示抗壞血酸、胡蘆巴果膠清除DPPH自由基的IC50分別為0.016和0.340 mg/mL。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出胡蘆巴果膠確有抗氧化活性作用。

此外，通過試驗(yàn)的反復(fù)操作發(fā)現(xiàn)，此試驗(yàn)的結(jié)果與壞境、供試品儲(chǔ)存日期、反應(yīng)時(shí)間等均有著密切的關(guān)系，實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)的光強(qiáng)度對(duì)試驗(yàn)影響較大，在整個(gè)試驗(yàn)進(jìn)行的過程中，VC和胡蘆巴提取物胡蘆巴果膠與DPPH反應(yīng)必須是在黑暗的條件下進(jìn)行才能保證試驗(yàn)的穩(wěn)定性，供試品和對(duì)照品在試驗(yàn)過程中必須現(xiàn)配現(xiàn)用，其中DPPH只能穩(wěn)定存在4 h，供試品溶液在配制后要及時(shí)放入冰箱中冷藏備用，以防止其變質(zhì)；胡蘆巴果膠在用水溶液溶解后可能因?yàn)橛须s質(zhì)存在，有部分不溶的現(xiàn)象，在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)避免搖晃，吸取上清液進(jìn)行測量；另外，反應(yīng)時(shí)間對(duì)結(jié)果也有較大的影響，在進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)時(shí)應(yīng)該準(zhǔn)確地記錄每一個(gè)時(shí)間段的吸光度，在對(duì)樣品進(jìn)行測量時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格把握樣品的反應(yīng)時(shí)間，以確保試驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，從而使試驗(yàn)具有重復(fù)性。

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作者簡介 魏艷妮（1995—），女，陜西咸陽人，講師，碩士，從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化控制技術(shù)研究。*通信作者，教授，碩士生導(dǎo)師，從事中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及中藥規(guī)范化栽培技術(shù)研究。

收稿日期 2024-07-02