清熱安胎膏改善大鼠妊娠期齦炎及對SOD、CAT活性的影響

Effect of Qingre Antai Paste on the Improvement of Gingivitis and the Activity ofSOD and CATin Rats During Pregnancy

LUJingyu，CHEN Shijuan，WANG Churui，KANG Jing （Departmentof Stomatology，the First Afliated Hospital of Hunan Universityof Chinese Medicine， Changsha ，Hunan，China）

Abstract：ObjectiveTobseretheectofQingreAntipasteontheactiyofsuperoxidedismutase（SOD）andatalase（CATiatswith gingivitisuringpregancyMethdsAalof49-wekldSFSDfealeratsand1maleratswerepurchasedfromBeijingChalesRiver CompanyFemaleratsererandomlydividedintofourexperimentalgroups：blankcontrolgroup，modelgouppositivedrugcontrolgroupand traditionalCeoiatschialiiscede conceivedinagendaofoeptoeyeregouedeingialateftschotermodelingndot wasrecordedBlankcontrolgroup：witoutanytreatmentonventionalonceptio；odeloup：pregancyafterexperimentalgingivitisas constructed；sosddt traditionalCopaiocdgisefdinil AftergroupingtreamentteingialisueasutndtctitlevelsofSODndCATintingivaltiueoftxperitalatsre determinedbyeze-linkedimunosorbentassy（ELSA）esultsAftermodelingtemsoftelowerincisorsoftheatssowdvious congestionesndelinegfnivalsiraeiacoufatuiregcodeloudiial Chinese medicine group ？ positivedrug control groupgt;blank control group.Comparedwith theblankcontrol group，theactivityof SODand CAT in the model group，the positive drug control group and the traditional Chinese medicine group decreased （ Plt;0 . 0 5 ） .The activities of SOD and CAT in the traditional Chinese medicine group were higher than those in the model group Plt;0 . 0 5 ） .Conclusion Qingre Antai paste can efectively improve the activityofdicpiuof expected to becomea new method for the treatment of gingivitis during pregnancy.

Keywords：Pregnancy gingivitis； Qingre Antai paste； Oxidative stress

妊娠期齦炎是一種由細菌感染引起的炎癥性疾病，主要臨床表現是牙齦腫脹出血、齦溝液增多及齦袋形成。在以往的研究中患病率高達 細菌誘導牙周組織產生大量活性氧，造成氧化劑和抗氧化劑之間的失衡，引起氧化應激病理損害機理，損害牙周組織，甚至可能引起早產、低出生體重兒、先兆子癇等全身性疾病。其中，早產是新生兒死亡的主要原因。因此，研究妊娠期齦炎與氧化應激之間的關系，對于防治妊娠期齦炎以及預防不良妊娠具有十分重要的意義。超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）過氧化氫酶（catalase，CAT）等抗氧化酶可降低氧化應激反應，減少組織損傷，同時也是檢測氧化應激程度的一項重要指標。相關研究顯示，清熱安胎膏中生地黃、黃芩知母、菟絲子麥冬茯苓等中藥均具有抗氧化作用的活性成分，可以有效改善氧化應激帶來的組織損傷。在前期的研究中，已發現清熱安胎膏對實驗性齦炎大鼠齦溝液內C反應蛋白（CRP）前列腺素 、白介素17（IL-17）的表達有影響，其可以有效降低齦溝液內 的表達水平，同時減少低出生體重兒的發生[11，12]。本研究通過構建妊娠期齦炎大鼠模型，進一步檢測清熱安胎膏對妊娠期齦炎大鼠臨床牙齦狀態、 . C A T ， S O D 活性的影響，現報道如下。

1材料與方法

1.1實驗動物SPF級SD大鼠，雌性24只，雄性18只，日齡63＼～69d，購自廣州維通利華實驗動物技術有限公司[許可證號為SCXK（粵）2022-0063，動物質量合格證號44829700031064]，于中醫藥大學第一附屬醫院動物實驗室適應喂養1周后進行實驗[動物許可證號：SCXK（湘）2020-0010]。動物倫理審批號：ZYFY20220513-02。

1.2主要試劑及儀器

1.2.1實驗用藥生石膏、生地黃、黃芩、知母、菟絲子、麥冬、茯苓（以上藥品均購自中醫藥大學第一附屬醫院），羊毛脂（貴州苗方生物科技有限公司，批號：XY240408）、凡士林（青島錦麒生物科技有限公司，批號：240106）、觀雅牌口腔抑菌液（碘甘油）（武漢彩芝堂生物醫藥有限公司，批號20240420）。1.2.2實驗用品一次性使用無菌注射器（山東威高集團醫用高分子制品股份有限公司，醫療器械注冊證：國械注準20163141593）3-0非吸收性外科縫線真絲編織線（威海威高富森醫用材料有限公司，醫療器械注冊證：魯械注準20152020252，批號：20231016）、PBS p H7 . 2 緩沖液（浙江吉諾生物醫藥技術有限公司，貨號GNM20012-5，批號：24041101）、水合氯醛溶液（ （艾碧維生物科技有限公司，貨號AWF0032b，批號：01G240611）、3號定性濾紙（英國whatman，貨號1 0 0 3 - 0 5 5 ） . 2 m l 微量離心管（廣州潔特生物過濾股份有限公司） 螺口注射器（上海仁沃醫療科技有限公司）大鼠過氧化氫酶（CAT）ELISA科研試劑盒48T（江蘇酶免實業有限公司，貨號：MM-20447R2）大鼠超氧化物歧化酶（SOD）ELISA科研試劑盒48T（江蘇酶免實業有限公司，貨號：MM-0386R2）。

1.2.3實驗儀器樂祺電子天平稱（昆山優科維特電子科技有限公司，型號：LQC-10002）水浴鍋（中國泰斯特，型號：DK-98-IIA）冷藏柜（中國海爾，型號：BC/BD-220L） 超低溫冰箱（中國海爾，型號：DW-86L338A）酶標儀（帝肯（上海）實驗器材有限公司，型號：InfiniteF50）、自動酶標洗板機（無錫華衛德朗儀器有限公司，型號：DKW-310）微量高速離心機（上海盧湘儀離心機儀器有限公司，型號：TG16-W）電動離心機（常州越新儀器制造有限公司，型號：80-2）、電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司，型號：DHG-9070）。

1.3方法

1.3.1清熱安胎膏制備 將生石膏 、生地黃 、黃芩 、茯苓 知母 菟絲子 麥冬 煎煮水浴濃縮至拉絲狀濃縮液。與凡士林，羊毛脂按質量比12：3：1混合并充分攪拌制成清熱安胎膏，放入冷藏柜中冷藏。

1.3.2妊娠期齦炎模型制備、分組與給藥參照郭德玉等的方法制備實驗性齦炎大鼠， 10 % 水合氯醛腹腔注射麻醉顯效后，用3-0縫線縫扎于大鼠雙下門齒齦緣處，并在牙齦上縫合兩針固定，定期檢查，若縫線出現松脫斷裂則重新縫扎，術后正常飼料喂養。如果出現牙齦充血、紅腫、潰爛、探之易出血等情況，則表明齦炎制備成功。模型確定成功后，拍攝記錄大鼠牙齦狀態，分別與雄性大鼠合籠過夜，待其完成受孕。空白對照組：大鼠只進行麻醉，正常喂養拍攝記錄大鼠牙齦狀態；模型組：建立實驗性齦炎，受孕后不做處理，拍攝記錄大鼠牙齦狀態；陽性藥物對照組：建立實驗性齦炎，受孕3d后于齦溝處給予碘甘油 0 . 1 m l， 1 次/d，連用7d；中藥組：建立實驗性齦炎，受孕3d后于齦溝處填塞清熱安胎膏 0 . 1 m l 1次/d，連用 。拍攝記錄各組大鼠牙齦狀態。

1.3.3標本收集各組大鼠給藥完畢后，實行 10 % 水合氯醛腹腔注射麻醉，顯效后切取雙下門齒牙齦組織，保存在 10 % 福爾馬林溶液中，備用。

1.3.4大鼠牙齦組織中SOD、CAT活性的檢測將標本切開后，稱取 組織，加入 9 m l 的 p H7 . 4 的PBS，用手工將標本勻漿充分。 條件以 2 5 0 0 r / m i n 的速率對樣本進行約 2 0 m i n 的離心處理，隨后棄去上清液，采用 值約為7.4的PBS緩沖液輕柔地清洗沉淀的細胞3次。接著，利用相同 值的PBS緩沖液調整細胞懸液，直至細胞密度接近100萬個 運用超聲波技術裂解細胞，釋放其內部成分。在 環境下，再次以 2 5 0 0 r / m i n 的速度離心約 2 0 m i n 細心收集上清液，若保存期間出現沉淀，需重復離心步驟。使用ELISA方法，按照試劑盒操作指南，利用酶標儀定量測定樣本中SOD和CAT的活性水平。炎癥程度與這兩種酶的活性呈現負相關關系。

1.4統計學方法運用SPSS28.0軟件進行統計分析，計量資料采用 表示，在對比兩組數據時，若數據符合正態分布且方差齊性條件，則運用單因素方差分析法，并通過LSD-t檢驗進行兩兩比較；若條件不滿足，則采用Kruskal-Wallis H 檢驗進行分析。兩個變量間的相關分析采用Pearson相關分析。Plt;0 . 0 5 為差異有統計學意義。

2結果

2.1各組大鼠處理前及處理后牙齦狀態大鼠造模后，雙下門齒牙齦出現明顯充血，紅腫等情況，提示實驗性齦炎構建成功。受孕后，各組大鼠處理后牙齦紅腫程度：模型組 gt; 造模后，提示妊娠期大鼠實驗性齦炎加重；模型組 gt; 中藥組 ？ 陽性藥物對照組 gt; 空白對照組，提示陽性藥物對照組及中藥組具備明顯的療效，見圖1＼～圖5。

2.2清熱安胎膏對SD大鼠牙齦組織中SOD、CAT水平的影響 本研究中每組大鼠的死亡數量各為1只。相較于空白對照組，模型組SOD、CAT水平下降中 ，而陽性藥物對照組與中藥組較模型組SOD、CAT水平均升高（ Plt;0 . 0 5 ） ，其中中藥組SOD、CAT水平略低于陽性藥物對照組（ Plt;0 . 0 5 ） ，見表1、圖6、圖7。

3討論

由于妊娠期雌激素和孕激素水平的改變，使牙齦局部微血管扭曲和擴張，增加了口腔血管的通透性，使宿主免疫力下降，最終導致宿主更容易受到口腔感染或原有的牙齦感染加重[14，15]。在妊娠期齦炎的病理發展中，牙菌斑刺激牙齦組織募集和激活多形核中性粒細胞（polymorphonuclearneutrophils，PMN）和巨噬細胞。被激活的PMN產生大量活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）以及大量炎癥介質，包括白細胞介素、趨化因子、粘附分子等。當ROS過量產生，超過細胞的抗氧化能力時，就會發生氧化應激，通過氧化脂質、蛋白質和DNA導致細胞損傷，在嚴重的氧化損傷下，細胞死亡是最終的結果。如SOD、CAT等抗氧化酶能有效保護組織免受各種代謝過程中產生的自由基的氧化損傷，SOD通過催化兩個 分解為 ，從細胞環境中去除有害的ROS；CAT酶能夠催化 分解成氧氣和水，有效移除體內的過氧化氫，保護細胞不受 的毒性影響。

相關研究表明，妊娠期齦炎與不良妊娠關系密切，可能造成新生低體重兒，妊娠期牙齦炎對妊娠期婦女的生活產生嚴重影響。在牙齦炎的臨床治療中，最常見的治療方法是超聲潔治去除牙石后，雙氧水沖洗，局部應用碘甘油消炎、收斂、防腐。但鑒于孕婦群體的特殊性，超聲潔治過程中產生的噪音和震動可能引發孕婦疼痛及顯著的不適感，以及過量含碘類藥物的使用會對胎兒的甲狀腺功能、智力發育造成影響，甚至增加某些腫瘤的發病風險[，這對于早產低出生體重兒危害更大[18]。使得常規妊娠期齦炎在治療和用藥上存在著諸多局限性，導致其治療效果不理想。

中醫藥具有兩千多年的歷史，作為我國的寶貴藥物資源在人類多種疾病的治療中發揮著重要作用。以中藥不良反應發生率低為根本，輔以局部用藥，在治療妊娠性齦炎方面開辟了新的臨床思路。基于中醫理論解析妊娠期齦炎發病機制：孕婦脾胃蘊熱，熱邪循經上犯齒齦，形成局部熏灼之勢。熱毒積聚致使齦絡受損，病理表現為齦肉腐潰伴膿血滲出，遷延不愈則引發牙齦萎縮、牙根暴露及牙齒松動等器質性改變[19。因此，本病治療以清泄瀉火、滋陰安胎為原則。本研究以經典方劑玉女煎為基礎，結合妊娠期齦炎的中醫病因病機特點進行藥物化裁，創制了清熱安胎方。該方劑由生石膏、生地黃、黃芩、鹽知母、菟絲子、麥冬及茯苓七味中藥配伍而成。本方以生石膏、黃芩為君藥，旨在清熱燥濕、瀉火安胎；以生地黃、菟絲子為臣藥，發揮滋陰清熱、涼血補血、滋補肝腎之效；以知母、麥冬為佐藥，清熱泄火、滋陰潤燥、滋養胃陰、固護根本；以茯苓為使藥，利水滲濕、健脾安神[12，20]。全方清熱瀉火，滋陰安胎，對妊娠期齦炎具有良好的治療作用。

本研究結果顯示，模型組受孕后牙齦紅腫程度較造模后增加，表明大鼠妊娠期由于激素水平的改變，導致原有的齦炎加重。中藥組牙齦紅腫程度較模型組減輕，提示清熱安胎膏可以改善妊娠期齦炎的臨床癥狀，這與其具備清熱瀉火的功能有關。模型組SOD、CAT水平低于空白對照組，提示妊娠期齦炎造模成功；中藥組SOD、CAT水平高于模型組，提示清熱安胎膏具有較強的抗炎、抗氧化活性，可阻止氧化應激及炎癥反應的發生及進展，對于妊娠期齦炎大鼠治療效果顯著；中藥組SOD、CAT水平低于陽性藥物對照組，提示清熱安胎膏抗氧化應激效果略低于碘甘油，但含碘類藥物使用具有諸多局限性，清熱安胎膏優勢在于安全性。

綜上所述，妊娠期齦炎發生發展與局部氧化應激密切相關，清熱安胎膏可以提高妊娠期齦炎大鼠牙齦組織中SOD、CAT活性，通過降低局部氧化應激水平，有效減輕牙齦組織損傷，為妊娠期齦炎的中醫藥治療開辟新途徑。然而，清熱安胎膏的具體作用機制尚需深入研究，建議通過擴大動物實驗規模、優化實驗方案，改善給藥制劑，并結合細胞實驗加以驗證。

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收稿日期：2025-02-20；修回日期：2025-03-04 編輯/成森