異鼠李素通過上調SLC25A25-AS1對胃癌發展的影響

摘要目的 探究異鼠李素通過上調溶質載體家族25成員25反義RNA1（SLC25A25-AS1）對胃癌發展的影響。方法 以BALB/c裸鼠為對象，通過腋下接種人胃癌細胞MKN28細胞構建移植瘤模型，考察低、高劑量異鼠李素 （20，40mg/kg） 對裸鼠瘤體體積及質量的影響。以MKN28細胞為對象，將其分為對照組、異鼠李素（ 70μmol/L ，下同）組、異鼠李素 + 敲減陰性對照組、異鼠李素 + 敲減SLC25A25-AS1組、異鼠李素 + 過表達陰性對照組、異鼠李素 + 過表達SLC25A25-AS1組，考察敲減/過表達SLC25A25-AS1對異鼠李素處理細胞活力、凋亡、遷移和侵襲能力的影響；驗證微RNA-212-3p（miR-212-3p）與SLC25A25-AS1、第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源物（PTEN）的靶向關系，進一步考察敲減/過表達SLC25A25-AS1對異鼠李素處理細胞中miR-212-3p、PTEN mRNA及蛋白表達的影響。結果與模型對照組比較，異鼠李素低、高劑量組裸鼠的瘤體體積及質量均顯著降低，且異鼠李素高劑量組顯著低于異鼠李素低劑量組（ Plt;0.05 ）。miR-212-3p與SLC25A25-AS1、PTEN存在靶向關系。與對照組比較，異鼠李素組、異鼠李素 敲減陰性對照組和異鼠李素 過表達陰性對照組的細胞活力（干預 24，48h ）、遷移細胞數、侵襲細胞數、miR-212-3p的表達均顯著降低或減少或下調，凋亡率、PTENmRNA及蛋白的表達均顯著升高或上調 （"Plt;0.05 ）；與異鼠李素組和異鼠李素+敲減陰性對照組比較，異鼠李素 + 敲減SLC25A25-AS1組的細胞活力、遷移細胞數、侵襲細胞數、miR-212-3p的表達均顯著升高或增多或上調，凋亡率、PTENmRNA及蛋白的表達均顯著降低或下調（ Plt;0.05） ；與異鼠李素組和異鼠李素 + 過表達陰性對照組比較，異鼠李素 + 過表達SLC25A25-AS1組的細胞活力、遷移細胞數、侵襲細胞數、miR-212-3p的表達均顯著降低或減少或下調，凋亡率、PTENmRNA及蛋白的表達均顯著升高或上調 （Plt;0.05） ）。結論異鼠李素可能通過上調SLC25A25-AS1表達、下調miR-212-3p并上調miR-212-3p下游靶點PTEN的表達，從而抑制胃癌的發展。

中圖分類號R965；R735.2 文獻標志碼A 文章編號1001-0408（2025）08-0932-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.08.07

Effects isorhamnetin on the development gastric cancer by up-regulating SLC25A25-AS1

ZHANG Yang'，WANG Jing2，NA Lisha， ZENG Aoran2， PANG Bowen2，LIU Yulin2（1. Laborary， Hongqi Afiliated University， Heilongjiang ， China；2. Biology Teaching and Research Office， School Medicine， University， Heilongjiang 1570ll， China； 3. Pharmacy， Hongqi Afiliated University， Heilongjiang ， China）

ABSTRACTOBJECTIVEToexplore theeffcts isorhamnetinonthedevelopment gastriccancer throughup-regulation solute carrierfamily 25 member 25 antisense RNA1（SLC25A25-AS1）.METHODS UsingBALB/c nude mice as the subjects，the xenograft tumormodelwasestablishedbysubcutaneouslinoculatinghuman gastriccancerMKN28cellintheaxillaryregion. The effects low and high doses isorhamnetin （20 and 40 mg/kg ）on the tumor volume and mass in nude mice were investigated. MKN28 cells were selected and divided in control group， isorhamnetin group（ 70μmol/L ，similarly hereinafter）， isorhamnetin+knocking down negative control group，isorhamnetin+knocking down SLC25A25-AS1 group，isorhamnetint overexpressionnegativecontrolgroupand isorhamnetinoverexpressing SLC25A25-ASlgroup.Effects knocking down/ overexpressingSLC25A2-ASlonviabilityapopsis，migrationandinvasionabilt isorhamnetintreatedcellswere detected. After verifyingthetargeting relationships between microRNA-212-3p（miR-212-3p）and SLC25A25-ASl，as wellas phosphatase andtensin homologuedeletedonchromosome10（PTEN），theefectsknockingdown/overexpressing SLC25A25-ASlonthe

expression miR-212-3p，PTEN mRNA，and PTENprotein in isorhamnetin-treated cells were investigated. RESULTS Compared with the model control group， tumor volume and mass nude mice in the isorhamnetin low-dose and high-dose groups were reduced significantly， and the isorhamnetin high

dose group was significantly lower than the isorhamnetin low-dose group （ （Plt;0.05 ）.miR-212-3p had targeting relationships with SLC25A25-ASl and PTEN. Compared with the control group， the cell viability （intervened for 24， ），migration number， invasionnumberandmi-212-3pexpressioncellintheisorhamnetingroup，isorhamnetinknocking downnegativecontrol groupanisorhamnetioverexpressngnegativecontrolgroupweresignificantlyreducedordecreasedorownregulatedwhilethe apopsis rate， mRNA and protein expressions PTEN were significantly increased or up-regulated （ （Plt;0.05 ）. Compared with isorhamnetingroupandisorhamnetiknockingdownnegativecontrolgroupthecellviabilitymigrationnumberinvasinumber andmi-212-3pexpressioncell intheisorhamnetinknockingdownSLC25A25-ASlgroupweresignificantlincreasedorupregulated，whiletheapopsisratemRNAandproteinexpressons PTENwere significantlyreducedordownregulated（ Plt; 0.05）.Comparedwithisohamnetingroupandisorhamnetinoverexpressngnegativecontrolgroup，thecellviability，migration number， invasion number and miR-212- ？3p expression cells in isorhamnetin+overexpressing SLC25A25-AS1 group were significantlyreducedordecreasedordown-regulated，whiletheapopsis ratePTENmRNAand proteinexpressions were significantly increased or up-regulated （Plt;0.05 ）. CONCLUSIONS Isorhamnetin may inhibit the development gastric cancer by up-regulating the expression SLC25A25-AS1， down-regulating miR-212- ？3p ，and up-regulating the expression PTEN，which is a downstream target miR-212- 3p

KEYWORDS isorhamnetin； gastric cancer； SLC25A25-AS1； miR-212-3p； PTEN

胃癌是一種發病率、死亡率均較高的惡性腫瘤，以幽門螺桿菌感染、基因改變以及飲食、肥胖、吸煙等為主要風險因素。目前，胃癌的主要治療方法包括手術、化療、放療、靶向治療和免疫療法等，雖能讓患者有所獲益，但臨床仍面臨預后差、復發率高等嚴重問題，故開發減緩胃癌進展和降低胃癌患者死亡率的新策略具有重要意義。

天然藥物具有靶點多、途徑多、副作用小等優點，是抗腫瘤藥物篩選的重要來源，已成為近年來臨床相關研究的熱點。異鼠李素是從沙棘、銀杏和多枝柳等植物中分離出的天然產物，也是皮素在哺乳動物體內的直接代謝產物，具有調節免疫、抗炎、保護心腦血管等作用。近期，異鼠李素因能夠抑制胃癌、結直腸癌、皮膚癌、肺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤的發展而受到學界的廣泛關注。由此可見，深入探究異鼠李素抑制胃癌發展的具體機制，可為胃癌治療藥物的研發提供新思路。

長鏈非編碼RNA（longnon-codingRNA，lncRNA）是一類長度超過200個核昔酸的RNA，可參與調節細胞表觀遺傳學特征和細胞周期、細胞分化等功能。研究指出，諸多lncRNA在胃癌細胞中呈差異表達，可參與調節其病理過程，從而發揮抗癌或促癌作用。溶質載體家族25成員25反義RNA1（solutecarrier family25mem-ber25antisenseRNA1，SLC25A25-AS1）是學者近年發現的與惡性腫瘤進展密切相關的IncRNA，其對惡性腫瘤發生發展的影響具有兩面性，如可促進非小細胞肺癌的發展、抑制結腸癌的發展[910。本課題組前期通過生物信息學分析發現，異鼠李素可使SLC25A25-AS1在胃癌細胞中的表達上調，但該成分能否通過上調SLC25A25-AS1的表達來發揮抑癌作用尚不清楚。研究指出，lncRNA作為微RNA（microRNA，miR）的分子海綿，可通過相互結合來調節相關靶基因的表達。本研究前期亦通過生物信息學預測了SLC25A25-AS1的靶miR，發現miR-212-3p與SLC25A25-AS1具有潛在結合位點。研究表明，miR-212-3p可促進胃癌的發展；此外，腫瘤抑制因子第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源物（phosphatase and tensin homologue deleted onchromosome10，PTEN）是miR-212-3p的下游靶點4然而，異鼠李素能否介導SLC25A25-AS1調節miR-212-3p/PTEN軸，從而發揮抗胃癌作用尚未明確。基于此，本研究擬檢測不同濃度異鼠季素對人胃癌細胞MKN28移植瘤生長及體外惡性生物學行為的影響，并基于SLC25A25-AS1和miR-212-3p/PTEN軸初步探討該成分發揮抗胃癌作用的潛在機制，以期為異鼠季素在胃癌臨床治療中的應用研究提供參考。

1材料

1.1主要儀器

AttuneNxT型流式細胞儀和BB15型細胞培養箱均購自美國ThermoFisherScientific公司；SynergyH1型酶標儀購自美國BioTek公司；VeritiPro型普通聚合酶鏈式反應（PCR）儀和7500型熒光定量PCR儀均購自美國ABI公司；E100型光學顯微鏡購自日本Nikon公司；ChemiDoc型凝膠掃描成像系統購自美國Bio-Rad公司；GloMax20/20型化學發光儀購自美國Promega公司。

1.2 主要藥品與試劑

異鼠李素對照品（純度 99.94% ，批號HY-N0776）購自美國MCE公司；胎牛血清、RPMI-1640培養基（批號分別為10091148、11875093）均購自美國Gibco公司；CCK-8試劑盒、AnnexinV-FITC細胞凋亡檢測試劑盒、RIPA裂解液、BCA蛋白濃度檢測試劑盒、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）凝膠配制試劑盒、超敏ECL化學發光試劑盒（批號分別為C0037、C1062M、P0013B、P0009、P0012A、P0018M）均購自上海碧云天生物技術有限公司；RNAisoPlus提取試劑、逆轉錄試劑盒、實時熒光定量PCR（real-timefluorogenicquantitativePCR，RT-qPCR）試劑盒（批號分別為9108、RR092A、CN830S）均購自日本Takara公司；兔抗PTEN單克隆抗體、兔抗甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）多克隆抗體（批號分別為ab170941、ab9485）均購自英國Ab-cam公司；辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批號SA00001-2）購自武漢三鷹生物技術有限公司；雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒（批號E2920）購自美國Promega公司；敲減SLC25A25-AS1及其陰性對照慢病毒、過表達SLC25A25-AS1及其陰性對照慢病毒、miR-212-3p模擬物（miR-212-3pmimics）及其陰性對照（mimicsNC）、SLC25A25-AS1野生型（SLC25A25-AS1-WT）及突變型（SLC25A25-AS1-MUT）質粒、PTEN野生型（PTEN-WT）及突變型（PTEN-MUT）質粒均由蘇州吉瑪基因股份有限公司提供或合成；RT-qPCR實驗所用引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司設計并合成。

1.3 動物與細胞

本研究所用動物為15只SPF級雄性BALB/c裸鼠，體重 21～25g ，購自遼寧長生生物技術股份有限公司，生產許可證號為SCXK（遼）2020-0001。所有裸鼠均飼養于中國醫科大學實驗動物中心（溫度 ，相對濕度 50%～60% ，每 明暗交替）。本研究方案通過牡丹江醫學院實驗動物福利倫理委員會批準（編號2023-MYG2R01）。

本研究所用細胞為人胃癌細胞MKN28（批號FT-Y1357），購自上海梵態生物科技有限公司。

2 方法

2.1 細胞培養

將MKN28細胞接種于含 10% 胎牛血清和 1% 青-鏈霉素雙抗的RPMI-1640培養基中，于 條件下培養。

2.2 裸鼠成瘤實驗

裸鼠適應性飼養1周后，于左側腋下注射 個MKN28細胞（用生理鹽水重懸）以構建移植瘤模型。待瘤體生長至 時，將裸鼠隨機分為模型對照組和異鼠李素低、高劑量組，每組5只。異鼠李素低、高劑量組裸鼠分別腹腔注射 20，40mg/kg 異鼠李素[給藥方法及注射劑量參考相關文獻，以二甲基亞礬（DMSO）為溶劑]，模型對照組裸鼠腹腔注射等體積DMSO，每天1次，連續 15d 。末次給藥后，將裸鼠安樂死，取其瘤體并測定瘤體體積和質量。

2.3 MKN28細胞實驗

2.3.1異鼠李素處理濃度的確定

將MKN28細胞接種于96孔板中，培養過夜待貼壁后，加入0（對照） ，5，10，20，40，80，160μmol/L 的異鼠李素，并設置不含細胞、不含藥物的空白孔，每濃度設置3個復孔。繼續培養 24h ，棄去培養基，各孔加人CCK-8試劑 10μL ，于 下孵育1h后，使用酶標儀于 450nm 波長下檢測其吸光度值并計算細胞活力[細胞活力（%）= （實驗孔吸光度值一空白孔吸光度值）/（對照孔吸光度值一空白孔吸光度值） ，同時計算異鼠李素的半數抑制濃度 （IC₅₀）。

2.3.2 細胞分組、處理及轉染效果評價

將MKN28細胞分為對照組、異鼠李素組、異鼠季素 + 敲減陰性對照組、異鼠李素 + 敲減SLC25A25-AS1組、異鼠李素 + 過表達陰性對照組、異鼠季素 + 過表達SLC25A25-AS1組，每組設置3個復孔。除對照組加入等體積DMSO外，其余各組細胞均加人 70mumol/L 的異鼠李素（濃度參考“2.3.1”項下 值設置）；異鼠李素 + 敲減陰性對照組、異鼠李素 + 敲減SLC25A25-AS1組、異鼠李素+過表達陰性對照組和異鼠李素 + 過表達SLC25A25-AS1組則在加人異鼠李素前通過慢病毒轉染建立穩定的敲減陰性對照、敲減SLC25A25-AS1、過表達陰性對照和過表達SLC25A25-AS1細胞。具體轉染步驟如下：取對數生長期的細胞接種于6孔板中，待其匯合度達 50% 時分別加人敲減陰性對照、敲減SLC25A25-AS1、過表達對照和過表達SLC25A25-AS1慢病毒（感染復數為40，病毒滴度約為 ），繼續培養 24h 后，更換新鮮培養基；繼續培養，待細胞匯合度達 80% 時用嘌呤霉素 （1μg/mL ）篩選穩定轉染的細胞，并通過RT-qPCR實驗檢測其SLC25A25-AS1的表達情況來判斷轉染是否成功。

RT-qPCR實驗的具體操作如下：取上述各組細胞，棄去培養基，以磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌后，以RNAisoPlus提取試劑提取總RNA，按相應試劑盒說明書方法將其逆轉錄為cDNA，并以此為模板進行qPCR擴增。反應體系為TB Green PremixEx TaqII FastqPCR試劑12.5μL ，正向、反向引物（引物序列及產物大小見表1）各 1μL ，cDNA模板 1μL ，滅菌水 9.5μL 。反應條件為： 預變性 變性 退火/延伸10s，共40個循環。分別以GAPDH（mRNA檢測）或U6（miR檢測）為內參，采用 法計算目的基因的相對表達量，結果以對照組為參照進行歸一化處理。

2.3.3 細胞活力檢測

采用CCK-8法檢測。取對數生長期細胞，按5000個孔接種于6孔板中，按“2.3.2\"項下方法分組、處理。分別于培養0、24、48h時，按\"2.3.1\"項下方法檢測并計算各組細胞活力。

2.3.4 細胞凋亡檢測

采用流式細胞術檢測。取對數生長期細胞，按 2× 個/孔接種于6孔板中，按“2.3.2\"項下方法分組、處理。培養 48h 后，收集細胞，用PBS洗滌3次后重懸，加入AnnexinV/FITC試劑 5μL ，吹打混勻，室溫避光孵育30min ；加入碘化丙啶（PI）溶液 5μL ，室溫避光孵育5min；用PBS洗滌后，使用流式細胞儀檢測各組細胞的凋亡情況。

2.3.5 細胞遷移和侵襲能力檢測

采用Transwell實驗檢測。取對數生長期細胞，以不含血清的培養基重懸，制成 個 /mL 的單細胞懸液。取上述懸液 0.1mL ，接種于不包被基質膠（檢測細胞遷移能力）或包被基質膠（檢測細胞侵襲能力）的Transwell小室上層；取含 20% 胎牛血清的培養基，置于小室下層。上室細胞按“2.3.2\"項下方法分組、處理。培養 48h 后，收集細胞，用PBS洗滌后置于 4% 多聚甲醛溶液中在室溫下固定 15min ；用PBS洗滌，以 0.1% 結晶紫染色液在室溫下染色 ；用PBS洗滌，以棉簽擦去未遷移的細胞，使用光學顯微鏡觀察各組細胞遷移和侵襲情況（遷移或侵襲細胞呈紫色）并拍照、計數。

2.3.6細胞中miR-212-3p、PTEN表達檢測

（1）miR-212-3p與SLC25A25-AS1、PTEN靶向關系驗證：利用ENCORI在線數據庫（https：//rnasysu.com/en-cori）預測miR-212-3p與SLC25A25-AS1、PTEN的潛在結合位點。采用雙螢光素酶報告基因實驗進行靶向關系驗證：構建含結合位點的野生型質粒載體（SLC25A25-AS1-WT和PTEN-WT）以及含突變結合位點的突變型質粒載體（SLC25A25-AS1-MUT和PTEN-MUT）。將上述野生型質粒載體和突變型質粒載體分別和miR-212-3pmimics或mimicsNC共轉染至MKN28細胞中，得SLC25A25-AS1-WT+mimicsNC組、SLC25A25-AS1-WT+miR-212-3pmimics組、SLC25A25-AS1-MUT+mimicsNC組、SLC25A25-AS1-MUT+miR-212-3p mimics組、PTEN-WT+mimics NC 組、PTEN-WT+miR-212-3p mimics 組、PTEN-MUT + mimics NC 組和 PTEN-MUT + miR-212-3pmimics組，每組設置3個復孔。培養 24h 后，收集細胞，按照雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒說明書方法使用酶標儀檢測螢光素酶活性。

（2）miR-212-3p、PTENmRNA及蛋白表達檢測：取對數生長期細胞，按 個/孔接種于6孔板中，按“2.3.2\"項下方法分組、處理。培養 48h 后，收集細胞，采用RT-qPCR法檢測其中miR-212-3p、PTENmRNA的相對表達量，具體操作同“2.3.2”項。采用Westernblot法檢測PTEN蛋白的表達，具體操作如下：收集各組細胞，以RIPA裂解液裂解后，離心收集總蛋白；總蛋白以BCA法測定濃度后，進行變性處理。取變性蛋白適量，進行SDS-PAGE分離并以濕轉法轉移至聚偏二氟乙烯膜上，以 5% 脫脂牛奶封閉1h；洗膜后，加入PTEN、GAPDH一抗（稀釋比例分別為 ， 孵育過夜；洗膜后，加入相應二抗（稀釋比例1：5000），室溫孵育1h；洗膜后，以ECL試劑顯影后成像，以目的蛋白與內參（GAPDH）的灰度值比值表示目的蛋白的相對表達量。

2.4 統計學方法

采用SPSS20軟件對數據進行統計分析。實驗數據以 表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用Tukey事后檢驗。檢驗水準 α=0.05。

3結果

3.1裸鼠成瘤實驗結果

與模型對照組比較，異鼠李素低、高劑量組裸鼠的瘤體體積及質量均顯著降低（plt;0.05） ，且異鼠李素高劑量組顯著低于異鼠李素低劑量組（ Plt;0.05 ）。結果見圖1表2。

3.2 MKN28細胞實驗結果

3.2.1 異鼠李素干預濃度篩選結果

與 0μmol/L 異鼠李素組[ 比較，5μmol/L 異鼠李素組細胞活力[ （95.35±0.97）% 差異無統計學意義 ，而 10、20、40、80、160 μmol/L異鼠李素組細胞活力[ （88.78±1.05）% 、 （85.67±1.11）% （ 62.48±1.14）% 、 （51.35±0.88）% 、 （18.97±1.07）% 均顯著降低 （Plt;0.05） ；異鼠李素抑制胃癌細胞的 值為67.11μmol/L ，遂以 70μmol/L 作為后續實驗的干預濃度。

3.2.2 轉染效果評價

與對照組 （1.02±0.05） 比較，異鼠李素組、異鼠李素 + 敲減陰性對照組、異鼠李素 +. 過表達陰性對照組細胞中SLC25A25-AS1的表達 ，4.09±0.38 均顯著上調（ （Plt;0.05 ）；與異鼠李素組和異鼠季素 + 敲減陰性對照組比較，異鼠李素 + 敲減SLC25A25-AS1組細胞中SLC25A25-AS1的表達（1.82±0.13 顯著下調 （Plt;0.05） ）；與異鼠李素組和異鼠李素 + 過表達陰性對照組比較，異鼠李素 + 過表達SLC25A25-AS1組細胞中SLC25A25-AS1的表達（ 5.42±0.28 顯著上調 ？ Plt;0.05 ），提示轉染成功。

3.2.3敲減/過表達SLC25A25-AS1對異鼠李素處理胃癌細胞活力的影響

培養0h時，各組細胞活力比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05 ）。細胞培養 24，48h 時，與對照組比較，異鼠李素組、異鼠李素 + 敲減陰性對照組和異鼠李素 過表達陰性對照組細胞活力均顯著降低 （Plt;0.05） ；與異鼠季素組和異鼠李素 敲減陰性對照組比較，異鼠李素 + 敲減SLC25A25-AS1組細胞活力顯著升高 .Plt;0.05） ；與異鼠李素組和異鼠李素 + 過表達陰性對照組比較，異鼠李素 + 過表達SLC25A25-AS1組細胞活力顯著降低 （Plt;0.05） 。結果見表3。

3.2.4敲減/過表達SLC25A25-AS1對異鼠李素處理胃癌細胞凋亡的影響

與對照組[ 比較，異鼠李素組、異鼠李素 + 敲減陰性對照組和異鼠李素 + 過表達陰性對照組細胞的凋亡率 （19.74±2.71）% 、 （18.85±2.14）% 、

a：與對照組比較， Plt;0.05 ；b：與異鼠李素組比較 ？ Plt;0.05 ；c：與異 鼠李素+敲減陰性對照組比較， Plt;0.05 ；d：與異鼠李素+過表達陰性對 照組比較， Plt;0.05。

（18.6±1.13）% 均顯著升高 （Plt;0.05） ；與異鼠李素組和異鼠李素 + 敲減陰性對照組比較，異鼠李素 + 敲減SLC25A25-AS1組細胞的凋亡率[ 顯著降低 （Plt;0.05 ）；與異鼠李素組和異鼠李素 + 過表達陰性對照組比較，異鼠李素 + 過表達SLC25A25-AS1組細胞的凋亡率 顯著升高 （Plt;0.05 ）。結果見圖2。

3.2.5敲減/過表達SLC25A25-AS1對異鼠李素處理胃癌細胞遷移和侵襲能力的影響

與對照組比較，異鼠李素組、異鼠李素 + 敲減陰性對照組和異鼠李素 + 過表達陰性對照組的遷移、侵襲細胞數均顯著減少（ ）；與異鼠李素組和異鼠李素 + 敲減陰性對照組比較，異鼠李素 + 敲減SLC25A25-AS1組的遷移、侵襲細胞數均顯著增多（ （Plt;0.05 ）；與異鼠李素組和異鼠李素 + 過表達陰性對照組比較，異鼠李素 過表達SLC25A25-AS1組的遷移、侵襲細胞數均顯著減少（Plt;0.05 ）。結果見圖3、表4。

a：與對照組比較， ：與異鼠李素組比較， Plt;0.05 ；c：與異鼠李素 敲減陰性對照組比較， Plt;0.05 ；d：與異鼠李素 過表達陰性對照組比較， Plt;0.05 。

3.2.6SLC25A25-AS1/miR-212-3p/PTEN靶向關系及表達調節作用驗證

與SLC25A25-AS1、PTEN靶向關系驗證結果：雙螢光素酶報告基因實驗結果（表5）顯示，轉染SLC25A25-AS1-WT或PTEN-WT后，與共轉染mimicsNC細胞比較，共轉染miR-212-3pmimics細胞的螢光素酶活性均顯著降低（ ；而轉染SLC25A25-AS1-MUT或PTEN-MUT后，與共轉染mimicsNC細胞比較，共轉染miR-212-3pmimics細胞的螢光素酶活性差異均無統計學意義 （Pgt;0.05） ），提示miR-212-3p與SLC25A25-AS1、PTEN存在靶向關系。

（2）敲減/過表達SLC25A25-AS1對異鼠李素處理胃癌細胞中miR-212-3p、PTEN表達的影響：與對照組比較，異鼠李素組、異鼠季素 + 敲減陰性對照組和異鼠季素 過表達陰性對照組細胞中miR-212-3p的表達顯著下調，PTENmRNA及蛋白的表達均顯著上調 （Plt;0.05） ：與異鼠李素組和異鼠李素 + 敲減陰性對照組比較，異鼠李素 + 敲減SLC25A25-AS1組細胞中miR-212-3p的表達顯著上調，PTENmRNA及蛋白的表達均顯著下調（ Plt; 0.05）；與異鼠李素組和異鼠李素 + 過表達陰性對照組比較，異鼠李素 + 過表達SLC25A25-AS1組細胞中miR-212-3p的表達顯著下調，PTENmRNA及蛋白的表達均顯著上調（ ）。結果見圖4、表6。

I：對照組；Ⅱ：異鼠季素組；Ⅲ：異鼠李素 + 敲減陰性對照組； IV ..異鼠李素+敲減SLC25A25-AS1組；V：異鼠李素+過表達陰性對照組；V：異鼠李素+過表達SLC25A25-AS1組。

a：與對照組比較 ：與異鼠李素組比較， ；c：與異 鼠李素 敲減陰性對照組比較， Plt;0.05 ；d：與異鼠李素+過表達陰性對 照組比較， Plt;0.05 0

4討論

盡管胃癌的早期檢測和化療已取得了很大進展，但在提高患者生存率方面仍收效甚微。天然藥物及其衍生物因療效好且副作用小而在惡性腫瘤臨床治療領域表現出了巨大的潛力。異鼠李素是皮素的 -O-甲基化代謝產物，對多種惡性腫瘤細胞具有抑制活性。研究表明，異鼠李素可通過線粒體依賴性凋亡、阻斷磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白信號通路、抑制胞外信號調節激酶/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白信號通路等途徑來抑制胃癌的發展[6-17]。本研究結果顯示，異鼠李素可抑制胃癌細胞移植瘤裸鼠體內腫瘤的生長，并可顯著降低胃癌細胞的活力，與上述研究結果一致。此外，本研究還發現，異鼠季素可顯著減弱胃癌細胞的遷移和侵襲能力，并增加細胞凋亡率，進一步證實了異鼠李素對胃癌發展的抑制作用。

lncRNASLC25A25-AS1對非小細胞肺癌具有一定的促進作用，其表達沉默與非小細胞肺癌細胞增殖受阻、凋亡增加、遷移/侵襲減弱有關；進一步的機制研究顯示，SLC25A25-AS1可通過海綿化miR-195-5p來上調其下游靶蛋白（整聯蛋白 ）的表達，從而促進非小細胞肺癌的發展。然而，SLC25A25-AS1對結直腸癌具有抑制作用，其過表達可抑制結直腸癌細胞的增殖和克隆形成，其表達下調可增強結直腸癌細胞化療耐藥性并促進上皮間質轉化。本研究前期基于生物信息學進行篩選發現，SLC25A25-AS1在異鼠李素處理的胃癌細胞中的表達有所上調。本研究結果顯示，經異鼠李素處理后，胃癌細胞中SLC25A25-AS1的表達顯著上調，與前期生物信息學分析結果一致。本研究還檢測了敲減/過表達SLC25A25-AS1對異鼠李素處理胃癌細胞活力、凋亡、遷移和侵襲的影響，結果顯示，敲減SLC25A25-AS1可逆轉異鼠李素對胃癌細胞活力、遷移、侵襲的抑制作用以及對細胞凋亡的促進作用，而過表達SLC25A25-AS1則可增強異鼠李素對胃癌細胞活力、遷移、侵襲的抑制作用以及對細胞凋亡的促進作用。這提示異鼠季素可能通過上調SLC25A25-AS1的表達來抑制胃癌的發展。

lncRNA常通過與miR下游靶基因競爭結合來上調該靶基因的表達，從而促進或抑制腫瘤的發展，如miR-212-3p在胃癌細胞中的表達明顯上調，并可通過抑制沉默信息調節因子1的表達來促進胃癌細胞的體外增殖、遷移、侵襲和腫瘤的體內生長。本研究通過雙螢光素酶報告基因實驗證實了SLC25A25-AS1與miR-212-3p的靶向結合關系，同時發現異鼠李素可顯著下調胃癌細胞中miR-212-3p的表達，敲減SLC25A25-AS1可逆轉異鼠李素對胃癌細胞中miR-212-3p表達的下調作用，而過表達SLC25A25-AS1則可增強異鼠李素對胃癌細胞中miR-212-3p表達的下調作用。PTEN為腫瘤抑制因子，是惡性腫瘤治療的重要靶點，其表達缺失與腫瘤細胞增殖增加及腫瘤發生密切相關。本研究通過雙螢光素酶報告基因實驗證實了PTEN與miR-212-3p的靶向結合關系。此外，本研究結果顯示，異鼠李素可上調胃癌細胞中PTENmRNA及蛋白的表達，敲減SLC25A25-AS1可逆轉異鼠季素對胃癌細胞中PTENmRNA及蛋白表達的上調作用，而過表達SLC25A25-AS1則可增強異鼠李素對胃癌細胞中PTENmRNA及蛋白表達的上調作用。這提示異鼠季素抑制胃癌發展的作用可能是通過上調SLC25A25-AS1的表達、調節miR-212-3p/PTEN軸而實現的。

綜上所述，異鼠李素可能通過上調SLC25A25-AS1表達、下調miR-212-3p并上調miR-212-3p下游靶點PTEN的表達，從而抑制胃癌的發展。

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（收稿日期：2024-09-30修回日期：2025-02-21）