壯藥石崖茶對L-NAME誘導高血壓大鼠血壓的影響

[摘要]"目的""探討壯藥石崖茶對N-硝基-L-精氨酸甲酯（N-nitro-L-arginine"methyl"ester，L-NAME）誘導高血壓大鼠血壓的影響。方法"采用L-NAME誘導高血壓大鼠模型，分為空白組、模型組、卡托普利組及石崖茶高、中、低劑量組。大鼠連續灌胃給藥4周，每周測量大鼠血壓1次。腹腔注射麻醉，采集血液樣本，取材。采用蘇木精-伊紅染色觀察大鼠胸主動脈組織的病理變化，蛋白質印跡法檢測大鼠胸主動脈內皮型一氧化氮合酶（endothelial"nitric"oxide"synthase，eNOS）蛋白表達水平，酶聯免疫吸附法檢測大鼠血漿eNOS含量，一步還原法檢測大鼠血漿中一氧化氮（nitric"oxide，NO）含量。結果"與模型組比較，石崖茶高、中劑量組與卡托普利組大鼠的收縮壓和舒張壓均顯著降低（Plt;0.01），心率變化無統計學意義（Pgt;0.05）。石崖茶灌胃4周后，高、中劑量組大鼠的血管損傷得到明顯改善，胸主動脈eNOS蛋白表達明顯增加（Plt;0.01），血漿中eNOS、NO含量顯著增加（Plt;0.01）。結論"壯藥石崖茶對L-NAME誘導高血壓大鼠有降壓作用，可能與其對eNOS基因、NO的表達調節有關。

[關鍵詞]"石崖茶；N-硝基-L-精氨酸甲酯；高血壓；內皮型一氧化氮合酶；一氧化氮

[中圖分類號]"R285.5；R544.1""""""[文獻標識碼]"A""""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2025.15.001

Effect"of"Zhuang"medicine"Adinandra"nitida"on"blood"pressure"of"hypertensive"rats"induced"by"L-NAME

LUO"Xuelan1，"ZHOU"Weiqian2，"YANG"Peng3，"MO"Guojun4，"OU"Hesheng3

1.Zhuang"and"Yao"Pharmaceutical"Preparation"Center，"International"Zhuang"Medicine"Hospital"Affiliated"to"Guangxi"University"of"Chinese"Medicine，"Nanning"530201，"Guangxi，"China;"2."Key"Laboratory"of"Zhuang"Yao"Medicine，"International"Zhuang"Medicine"Hospital"Affiliated"to"Guangxi"University"of"Chinese"Medicine，"Nanning"530201，"Guangxi，"China;"3."Ministry"of"Science"and"Technology，"International"Zhuang"Medicine"Hospital"Affiliated"to"Guangxi"University"of"Chinese"Medicine，"Nanning"530201，"Guangxi，"China;"4."Pharmaceutical"Department，"The"Second"Affiliated"Hospital"of"Guangxi"Medical"University，"Nanning"530007，"Guangxi，"China

[Abstract]"Objective"To"investigate"the"effect"of"Zhuang"medicine"Adinandra"nitida"on"blood"pressure"of"hypertensive"rats"induced"by"N-nitro-L-arginine"methyl"ester"（L-NAME）."Methods"L-NAME"was"used"to"induce"hypertension"rats"model，"they"were"divided"into"blank"group，"model"group，"captopril"group，"and"high，"medium，"and"low"dose"groups"of"Adinandra"nitida."The"rats"were"continuous"gavaged"for"4"weeks，"and"the"blood"pressures"were"measured"once"a"week."Rats"were"anesthetized"by"intraperitoneal"injection，"blood"samples"and"tissues"were"collected."Pathological"changes"of"the"rat"thoracic"aortic"tissue"were"observed"by"hematoxylin"eosin"staining，"the"protein"expression"level"of"endothelial"nitric"oxide"synthase"（eNOS）"in"rat"thoracic"aorta"was"detected"by"western"blotting，"the"content"of"eNOS"in"rat"plasma"was"measured"by"enzyme"linked"immunosorbent"assay"and"nitric"oxide"（NO）"content"in"rat"plasma"was"detected"by"one-step"reduction"method."Results"Compared"with"model"group，"high"and"medium"dose"groups"of"Adinandra"nitida"and"captopril"group"of"rats"showed"significant"reductions"in"systolic"blood"pressure"and"diastolic"blood"pressure"（Plt;0.01），"while"there"were"no"statistically"significant"change"in"heart"rate"（Pgt;0.05）."After"4"weeks"of"oral"administration"with"Adinandra"nitida，"the"damage"of"the"vascular"tissues"of"hypertensive"rats"induced"by"L-NAME"had"been"improved，"the"expression"of"eNOS"protein"in"thoracic"aorta"was"significantly"increased"（Plt;0.01），"and"the"contents"of"eNOS"and"NO"in"rat"plasma"were"significantly"increased"（Plt;0.01）."Conclusion"Zhuang"medicine"Adinandra"nitida"has"a"hypotensive"effect"on"L-NAME"induced"hypertensive"rats，"which"may"be"related"to"the"regulation"of"eNOS"and"NO.

[Key"words]"Adinandra"nitida;"N-nitro-L-arginine"methyl"ester;"Hypertension;"Endothelial"nitric"oxide"synthase;"Nitric"oxide

高血壓是一種臨床綜合征，其特征是全身動脈壓和外周小動脈阻力增加，并伴有心臟、大腦、腎臟和其他器官的功能性或器質性損傷，同時是心血管疾病（cardiovascular"diseases，CVD）發生發展的主要危險因素[1]。根據《中國心血管健康與疾病報告2022》[2]要點解讀，推算目前中國CVD患病人數約3.3億，其中高血壓患病人數為2.45億，且人數仍在增長。預計2025年全球高血壓患者人數將達15.6億（15.4億～15.8億）[3]。因此，尋找可能的降壓藥物特別是天然的降壓藥物成為研究的重點。

石崖茶學名亮葉黃瑞木Adinandra"nitida"Merr.ex"H.L.Li，系山茶科Theaceae楊桐屬Adinandra"Jack植物的干燥葉[4]。野生石崖茶主要分布在廣西、貴州等地，資源豐富，保健和藥用價值高[5]。石崖茶香氣濃郁，味微苦，后回甘，具有清熱解毒、消炎潤肺、調脂降壓及健胃消食等作用[6-8]。已有研究者對石崖茶的化學成分進行分析，然而對石崖茶的藥理作用研究甚少，未見其降壓作用和機制的相關研究[9]。本研究初步探討石崖茶對L-NAME誘導高血壓大鼠的降壓作用及可能分子機制，以期為石崖茶的深入研究提供理論依據。

1""材料與方法

1.1""實驗動物

雄性SD大鼠60只，體質量150～180g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供[許可證號：SCXK（湘）2021-0002]。大鼠適應性飼養1周，自由飲水和進食，飼養條件和實驗內容符合實驗動物的倫理要求，實驗過程嚴格遵守《實驗動物管理條例》。本研究經廣西中醫藥大學附屬國際壯醫醫院倫理委員會審批通過（倫理審批號：DW20220621-131）。

1.2""藥物試劑和儀器

實驗用野生石崖茶（產地廣西金秀）經廣西中醫藥大學附屬國際壯醫醫院陳松主任藥師鑒定為山茶科楊桐屬植物亮葉黃瑞木的干燥葉。槲皮苷購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈分析純購自西隴科學股份有限公司；卡托普利片購自上海旭東海普藥業有限公司；L-NAME購自美國APExBIO公司；"eNOS抗體購自武漢三鷹生物有限公司；山羊抗兔二抗購自美國Affinity公司；增強型化學發光（enhanced"chemiluminescence，ECL）高敏顯影液購自武漢莫納生物科技有限公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic"acid，BCA）蛋白濃度測定試劑盒（增強型）購自上海碧云天生物技術股份有限公司；一氧化氮（nitric"oxide，NO）試劑盒購自南京建成生物工程研究所。大鼠無創尾動脈血壓計購自美國IITC公司；高效液相色譜儀Agilent"1260"InfinityⅡ購自德國Agilent公司；Multiskan"SkyHigh酶標儀購自美國賽默飛公司；Bio-Rad電泳儀購自美國Bio-Rad公司；Image"Quant"800超靈敏凝膠成像儀購自美國AMERSHAM公司。

1.3""方法

1.3.1""試藥制備""取石崖茶2.5kg打成粗粉，加入10倍量純化水，浸泡30min，之后回流提取60min，過濾，沉渣再加8倍量純化水，繼續回流提取60min，過濾，將2次回流提取所得濾液混合，旋轉蒸發濃縮烘干，得到石崖茶提取物（得率為48.97%），分裝后4℃保存備用。

1.3.2""高效液相色譜法檢測石崖茶提取物槲皮苷含量""精密稱取槲皮苷1.03mg，置于10ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，作為槲皮苷對照品，濃度為0.0963mg/ml。石崖茶提取物粉碎后過2號篩，稱取粗粉2.1073g，加入甲醇20ml，超聲震蕩30min，取上清液，根據文獻方法測定其槲皮苷含量[10]。

1.3.3""動物造模與分組""60只SD大鼠適應喂養1周后，連續測試3d基準血壓。隨機選取10只作為正常對照組（空白組），正常飲食、自由飲水；其余50只大鼠參考文獻[11]所述每天腹腔注射L-NAME制作高血壓大鼠模型，注射量為25mg/kg，連續注射4周，每周測定血壓1次。根據處理，實驗動物按血壓均值隨機分為模型組、卡托普利組和石崖茶（高、中、低）劑量組。隨后各組按1ml/100g灌胃，每天灌胃1次，其中空白組和模型組灌胃生理鹽水，卡托普利組灌胃5mg/kg卡托普利（生理鹽水配制），石崖茶（高、中、低）劑量組分別以12.0g/kg、6.0g/kg和1.0g/kg的石崖茶水提物灌胃。灌胃處理4周，其間造模成功的高血壓大鼠繼續注射L-NAME。

1.3.4""大鼠血壓及心率測定""大鼠的血壓及心率采用尾套法無創尾動脈血壓計測定，測試溫度設置為30～35℃，保溫時間約20min，每周測定1次。記錄收縮壓、舒張壓、平均動脈壓及心率等參數值，單只大鼠保持穩定狀態下連續測量3～5次，取平均值。

1.3.5""血樣采集和取材""大鼠灌胃4周后，用3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，腹動脈取血注入含肝素鈉的真空采血管中，4℃"3000轉/min離心15min，分離血漿保存于–80℃超低溫冰箱。取大鼠胸主動脈血管組織并剪取部分（長度約5mm）浸泡在4%多聚甲醛溶液中，剩余組織保存于–80℃超低溫冰箱。

1.3.6""蘇木精-伊紅染色觀察血管組織形態變化""將固定于4%多聚甲醛溶液48h以上的胸主動脈血管組織取出，常規脫水修整，石蠟包埋。選擇靠近主動脈弓一端連續行5μｍ切片，然后經甲苯脫蠟、乙醇脫水及蒸餾水洗滌后，進行蘇木精-伊紅（hematoxylin"eosin，HE）染色。應用正置顯微鏡觀察胸主動脈血管組織的病理學變化，并用軟件Image"J計算各組大鼠血管中膜厚度和橫截面積。

1.3.7""蛋白質印跡法檢測大鼠胸主動脈eNOS蛋白表達水平""取保存的大鼠胸主動脈血管組織，液氮研磨，加入適量裂解液冰上裂解20min，4℃"12"000轉/min離心10min，取上清液，采用BCA試劑盒測定各組蛋白濃度，樣本加入上樣緩沖液后95℃水浴5min變性。根據BCA結果計算上樣量，然后進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳、聚偏二氟乙烯膜轉膜，快速封閉液封閉，加入相應一抗稀釋液（1∶500），4℃孵育過夜。第2天用TBST緩沖液洗3次，5min/次。加入二抗（1∶1000），室溫避光孵育1h，TBST緩沖液洗3次，5min/次。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate"dehydrogenase，GAPDH）為內參，ECL顯影后成像，并用Image"J軟件分析蛋白的表達量。

1.3.8""酶聯免疫吸附法檢測血漿eNOS含量""嚴格按酶聯免疫吸附法（enzyme"linked"immunosorbent"assay，ELISA）檢測試劑盒說明書操作，制備各組樣品，測定各組血漿樣品的吸光度（optical"density，OD）值，并應用ELISA"calc專用軟件繪制標準曲線和計算劑量。

1.3.9""一步還原法檢測血漿NO含量""嚴格按硝酸還原法試劑盒說明書制備各組樣品，應用酶標儀測定波長550nm處各組血漿樣品的OD值，并按說明書計算各組NO含量。

1.4""統計學方法

采用Excelnbsp;2016版軟件進行數據處理，SPSS"20.0軟件進行單因素方差分析，采用GraphPad"Prism"8.0.2軟件作圖。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（"）表示，比較采用t檢驗。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2""結果

2.1""壯藥石崖茶提取物槲皮苷含量測定

采用高效液相色譜法測定石崖茶的代表性成分槲皮苷含量。色譜條件：色譜柱為TC-C18，流動相為乙腈–0.1%磷酸（20∶80），流速為5.0ml/min，檢測波長254nm，進樣量10μl。樣品中各組分達到基線分離，其他成分對槲皮苷的測定無干擾。結果槲皮苷平均含量為3.03mg/ml，相對標準偏差為1.6%，見圖1。

2.2""壯藥石崖茶對L-NAME誘導高血壓大鼠血壓及心率的影響

結果顯示在注射L-NAME造模期間，空白組大鼠血壓基本維持穩定，其余各組大鼠血壓明顯升高，4周后所有造模大鼠收縮壓均gt;140mmHg"（1mmHg=0.133kPa）或舒張壓gt;100mmHg，造模成功。石崖茶灌胃治療4周后，與空白組比較，模型組大鼠血壓明顯升高；與模型組比較，石崖茶高、中劑量組大鼠收縮壓和舒張壓均顯著降低（Plt;0.01）。實驗過程中各組大鼠的心率均有所波動，但差異無統計學意義（Pgt;0.05），見表1和表2。

2.3""壯藥石崖茶對L-NAME誘導高血壓大鼠胸主動脈血管組織病理學的影響

HE染色結果顯示空白組大鼠胸主動脈血管壁厚薄均衡，內膜光滑、完整，中膜平滑肌細胞無增生，見圖2。模型組大鼠胸主動脈血管壁明顯增厚，內膜明顯凸起，內皮細胞腫脹有破裂，中膜平滑肌增生明顯。卡托普利組胸主動脈血管壁厚薄基本均衡，內膜基本光滑，中膜平滑肌細胞未見明顯增生。石崖茶灌胃4周后，與模型組比較，高、中劑量組胸主動脈血管壁增厚、內膜凸起損傷及中膜平滑肌增生均得到顯著改善。與石崖茶高、中劑量組比較，低劑量組胸主動脈血管內皮細胞雖未見腫脹，但凸起明顯，中膜平滑肌有明顯增生。與空白組比較，模型組大鼠胸主動脈中膜厚度和中膜橫截面積均明顯增加（Plt;0.01）；與模型組比較，石崖茶高、中劑量組大鼠胸主動脈中膜厚度和中膜橫截面積均顯著減少（Plt;0.01），見表3。

2.4""壯藥石崖茶對L-NAME誘導高血壓大鼠胸主動脈eNOS表達的影響

與空白組比較，模型組大鼠的胸主動脈eNOS蛋白表達水平明顯降低（Plt;0.01）；與模型組比較，壯藥石崖茶高、中劑量組及卡托普利組大鼠的胸主動脈eNOS蛋白表達量均顯著增加（Plt;0.01），見圖3。

2.5""壯藥石崖茶對L-NAME誘導高血壓大鼠血漿eNOS和NO含量的影響

大鼠血漿eNOS和NO含量檢測結果顯示，與空白組比較，模型組大鼠的血漿eNOS和NO含量均明顯下降（Plt;0.01）；與模型組比較，石崖茶高、中劑量組及卡托普利組大鼠的血漿eNOS和NO含量顯著升高（Plt;0.01），見圖4。

3""討論

本研究結果發現：①石崖茶高、中劑量可降低由L-NAME誘導高血壓大鼠的收縮壓和舒張壓，且不影響L-NAME誘導高血壓大鼠的心率；②石崖茶高、中劑量對L-NAME誘導高血壓大鼠的動脈損傷有保護作用；③石崖茶高、中劑量可有效提高由L-NAME誘導高血壓大鼠的胸主動脈eNOS蛋白表達及血漿eNOS和NO含量。

石崖茶的化學成分有黃酮類、酚類及多糖等，其中黃酮類成分含量最高，包括山茶苷A、槲皮苷等。皮振宇等[12]通過HPLC指紋圖譜和網絡藥理學對石崖茶質量標志物（Q-Marker）預測分析，顯示槲皮苷是其5個主要差異性成分之一，可作為石崖茶的潛在Q-Marker。因此，本研究以槲皮苷為對照品，對石崖茶水提物樣品進行高效液相色譜分析。

高血壓是多種心血管疾病的重要致病因素，長期處于高血壓狀態，可導致心臟、血管損傷，引起心肌肥厚、血管壁增厚等[13-14]。本研究連續4周腹腔注射L-NAME，大鼠血壓升高，達到高血壓水平。繼續注射L-NAME至第8周，模型組大鼠血壓維持高血壓狀態，血管壁明顯增厚，內膜明顯凸起，內皮細胞腫脹有破裂，中膜平滑肌明顯增生，結果基本與已有研究一致[11]。灌胃石崖茶后，大鼠血壓逐漸下降，血管損傷得到一定恢復，說明石崖茶具有一定的降壓作用和保護靶組織的功能。

L-NAME是一種非特異性NO合成酶抑制劑，使用后可顯著降低血漿eNOS、NO含量，進而引起血壓升高和心臟重構[15]。此外，L-NAME誘導的高血壓使處于血管壁內層的內皮細胞受損，進一步影響eNOS基因的表達。本研究中模型組大鼠eNOS蛋白表達下降，血漿eNOS、NO含量也降低，高、中劑量石崖茶灌胃后，大鼠血管eNOS蛋白表達、血漿eNOS、NO含量明顯增加。石崖茶可通過保護血管內皮的完整性提高eNOS基因表達，增加血漿eNOS和NO含量，有效改善大鼠的高血壓狀態。然而，石崖茶的降壓作用是何種成分在發揮作用及可能分子機制尚需進一步探討。

綜上，壯藥石崖茶可有效降低L-NAME誘導高血壓大鼠的血壓，保護血管的完整性，其分子機制可能與血管eNOS基因的表達及血漿eNOS、NO作用相關。本研究可為壯藥石崖茶抗高血壓的藥用價值提供一定理論基礎，同時也為壯藥石崖茶有效成分進一步臨床應用提供實驗依據。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2025–02–15）

（修回日期：2025–05–12）