機械敏感性離子通道Piezo2在激痛點炎癥誘導機械痛覺過敏中的潛在作用

[摘要]目的觀察機械敏感性離子通道Piezo2在激痛點炎癥誘導的機械痛覺過敏中的作用。方法將30只SPF級雄性SD大鼠隨機分為空白組、模型組、弗氏佐劑組、依托考昔組及Piezo2抑制劑組（以下簡稱抑制劑組），每組6只。除空白組外，其余4組大鼠均造模，造模部位為左側股內(nèi)側肌。造模完成后，在弗氏佐劑組大鼠激痛點局部注射 150μL 弗氏完全佐劑（CFA）1次；依托考昔組大鼠以 5.5mg/kg 劑量的依托考昔懸濁液灌胃，每日2次，連續(xù)灌胃2d;抑制劑組大鼠予激痛點組織注射 60μg/μL 抑制劑1次，注射量為 120μL 干預前后，檢測激痛點局部機械痛閾值和軟組織張力。干預2周后收集激痛點樣本，HE染色觀察其顯微結構，ELISA法檢測白細胞介素-1β（IL-1β）含量，免疫組織化學法和Westem blot法檢測Piezo2的表達。結果與干預前比較，干預后弗氏佐劑組機械痛閾值 值均降低（ Plt;0.05，Plt;0.01 ，依托考昔組和抑制劑組均升高 ′Plt;0.05，Plt;0.01 ）。干預后，與空白組比較，模型組機械痛閾值 值均降低（ Plt;0.01 ）；與模型組比較，弗氏佐劑組機械痛閾值 值均降低（ Plt;0.01 ），依托考昔組和抑制劑組均升高 （Plt;0.01） ；與弗氏佐劑組比較，依托考昔組和抑制劑組機械痛閾值 J_02kg 值均升高 （Plt;0.01 ）。HE染色顯示：模型組和弗氏佐劑組肌細胞受損，局部炎性細胞浸潤;依托考昔組和抑制劑組肌細胞受損明顯減輕，局部炎癥細胞減少。與空白組比較，模型組IL-1β 含量升高 （Plt;0.01） ；與模型組比較，弗氏佐劑組IL- ?1β 含量升高 （Plt;0.01） ，依托考昔組和抑制劑組均降低 （Plt;0.01） ；與弗氏佐劑組比較，依托考昔組和抑制劑組 IL-1β 含量均降低 （Plt;0.01 。與空白組比較，模型組Piezo2表達升高 Plt;0.01 ）；與模型組比較，依托考昔組和抑制劑組Piezo2表達均降低 Plt;0.05） ，弗氏佐劑組差異無統(tǒng)計學意義（ Pgt;0.05） ；與弗氏佐劑組比較，依托考昔組和抑制劑組Piezo2表達均降低 （Plt;0.05，Plt;0.01 ）。結論（1）弗氏完全佐劑能增強激痛點局部炎癥反應、肌細胞受損，依托考昔和Piezo2抑制劑可抑制其炎癥反應；（2）Piezo2可能在激痛點組織炎癥所致機械痛覺過敏中發(fā)揮作用。

本文引用：，，，.機械敏感性離子通道 Piezo2 在激痛點炎癥誘導機械痛覺過敏中的潛在作用[J]湖南中醫(yī)藥大學學報，2025，45（5）：869-876.

[中圖分類號]R259

[文獻標志碼]A [文章編號]doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.05.012

[Abstract]Objective Toobserve theefectsof Piezo2onmechanical hyperalgesia inducedbymyofascial triggerpoint nflammation Methods ThirtySPF-grademaleSDratswererandomlydivided intoblank group，modelgroup，completeFreund's adjuvant （CFA）group，etoricoxibgoupandPiezo2inibitorgroup（hereinaftereferrdtoastheihibitorgroup），withsixratsin each group.Exceptfortheblank group，modelswereestablishedintheother four groupsatthemodelingsiteoftheleft vastus medialis muscle. After modeling， the rats in the CFA group received a single 150uL CFA injection at the trigger point. The etoricoxib group was administered 5.5mg/kg etoricoxib suspension via gavage twice daily for two consecutive days. The inhibitor group received a single 120μL injection of Piezo2 inhibitor （ 60μg/μl ）at the trigger point tissue. Mechanical pain threshold and softtissuetensionweremeasuredbeforeandafterinterventionAftertwoweksofinterventio，triggerpointsampleswerecolected for microscopic structural observation by HE staining， measurement of interleukin- 1β （IL-1β） levels via ELISA，and analysis of Piezo2expresionusingbothimmunohistochemistryandWestern blot.ResultsComparedwithbeforeintervention，themeanical pain threshold and D_0zkg value in the CFA group decreased after intervention （ P lt;0.05， P?0.01 1），while thoseinthe etoricoxib group and the inhibitor group increased P lt;0.05， P lt;0.01）.After intervention， compared with the blank group， the model group showed a decrease in mechanical pain threshold and D_0.2kg value （ P lt;0.01）;compared with the model group，the mechanical pain threshold and D_00kg value in the CFA group decreased（ P- lt;0.01），while those in the etoricoxib group and the inhibitor group increased （ P lt;0.01）; compared with the CFA group， the mechanical pain threshold andD _Ukg value increased in both the etoricoxib group and the inhibitor group （ P lt;0.01）.HE staining showed that muscle cels were damaged in the model group and CFA group，with local inflammatorycellinfiltration;musclecelldamagewassignificantlyallviatedandlocaliammatorycellsdcreasedinboththe etoricoxib group and the inhibitor group. Compared with the blank group，the IL- 1β content in the model group increased （ Plt;0.01 ） compared with the model group， the content of IL- 1β increased in the CFA group ，while those in the etoricoxib group and the inhibitor group decreased P lt;0.01）;compared with the CFA group， the levels of IL- 1β decreased in both the etoricoxib group and the inhibitor group （ Plt; 0.01）.Compared with the blank group，the model group showed an increase in Piezo2 expression （ Plt;0.01 ） comparedwith the model group，theexpresionof Piezo2 decreased inboth theetoricoxib groupandtheinhibitor group（ Plt;0.05 ） and there was no statistically significant difference in the CFA group （ Pγ 0.05）;Compared with the CFA group， the expression of Piezo2 decreased in both the etoricoxib group and the inhibitor group （ P lt;0.05， P lt;0.01）.Conclusion （1） CFA can enhance local inflammatoryreactionandmusclecelldamageinMTrPs，whileetoricoxibandthePiezo2inhibitorcaninhibittheinflammatory reaction.（2）Piezo2 mayplayarolein mechanical hyperalgesia resulted from inflammation in MTrP tissue.

[Keywords]myofascial triggerpoint; Piezo2;inflammatoryreaction;peripheralsensitization；mechanicalhyperagesia;Freund's complete adjuvant; etoricoxib

激痛點是位于骨骼肌緊繃帶內(nèi)的僵硬和離散結節(jié)，其實質是肌小節(jié)的異常收縮。一般將激痛點導致的系列癥狀，如觸痛、局部肌肉抽搐、運動功能障礙等，稱為肌筋膜疼痛綜合征。研究表明，激痛點的活化與局部炎癥病理有關，炎癥介質刺激并敏化外周感受通路是激痛點疼痛的關鍵環(huán)節(jié)[2-3]。機械門控離子通道Piezo2主要表達在外周初級感覺神經(jīng)元、肌梭細胞以及特化的觸覺感知細胞，介導觸覺、本體感覺、機械超敏痛（觸摸痛）等。研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應在導致跨膜離子通道形成的信號通路中起著重要作用6-7，通過Piezo2介導機體機械痛覺敏化，如上調(diào)Piezo2的功能等8。Piezo2是否在激痛點組織中高表達，抑制其表達是否會影響激痛點組織炎癥反應尚未可知。為闡述這個科學問題，本實驗通過觀察在Piezo2抑制劑的影響下各促炎以及抑炎藥物組中激痛點組織白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL- ?1β ）和Piezo2的表達情況，探索激痛點組織中Piezo2對炎癥反應的影響。

1材料與方法

1.1 實驗動物及分組

研究對象選取30只SPF級SD大鼠，雄性，體質量 250～280g ，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物許可證號為SYXK（湘）：2019-0009，動物合格證號為430727231100020237。所有動物分籠飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學實驗動物中心，每籠3只。飼養(yǎng)條件：溫度 24～26°C ，濕度 50%～70% ，籠內(nèi)提供充足的食物和水， 12h 光照交替明暗循環(huán)，飼養(yǎng)場所定期消毒。本實驗經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學實驗動物倫理委員會審批，批準號：LL2021102004。運用隨機數(shù)字表法將大鼠分為空白組、模型組、弗氏佐劑組、依托考昔組和Piezo2抑制劑組（以下簡稱抑制劑組），每組6只。除空白組外，其余組別大鼠均造模處理。

1.2 主要儀器

呼吸麻醉機（型號：R500，深圳市瑞沃德生命科技有限公司）；小動物跑步機（型號：ZS-PT-IV，北京眾實迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責任公司）；鈍性擊打器（自制）：電子測痛儀、軟組織張力測定儀（型號：YT-10C、JZLIII，天津明通世紀科技有限責任公司）；石蠟包埋機（型號：KD-BM II，浙江省金華市科迪儀器設備有限公司）；病理切片機（型號：RM2016，上海徠卡儀器有限公司）;組織攤片機（型號：YD-A，金華市益迪醫(yī)療設備有限公司）；酶標儀[型號：InfiniteF50，帝肯（上海）實驗器材有限公司];凝膠成像系統(tǒng)（型號：GelDoc-It310，美國UVP公司）。

1.3 主要試劑

異氟烷（批號：R510-22，深圳市瑞沃德生命科技有限公司）；弗氏完全佐劑批號：F5881，西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司]；依托考昔片（批號：200318，規(guī)格： 60mg/ 片，成都苑東生物制藥股份有限公司）；Piezo2抑制劑（批號：AS1010，Piezo2反義寡核苷酸序列：CCACCACAUAAACACCUGCTTGCAG-GUGUUUAUGUGGUGGTT，上海吉瑪制藥技術有限公司，已經(jīng)過前期驗證）；蘇木素-伊紅染色試劑盒[批號： abs9217 ，愛必信（上海）生物科技有限公司];大鼠IL-1β定量檢測試劑盒（批號：YD30206，廈門侖昌碩生物科技有限公司）；BCA蛋白濃度測定kit（批號：MD913053，北京百奧思科生物醫(yī)學技術有限公司）；中等蛋白分子量marker[批號：26617，賽默飛世爾科技（中國）有限公司集團]；兔來源Piezo2 抗體（批號：NBP1-78624，美國 Novus Biolog-icals公司）。

1.4造模方法與模型評價

激痛點造模與模型評價參考黃強民團隊改良并證實的鈍性擊打結合離心運動的方法。造模分為適應期、造模期和恢復期3個階段。適應期予以適應性喂養(yǎng)1周，然后進入為期8周的造模期，每周第1天予以鈍性擊打：將大鼠異氟烷吸入麻醉（誘導濃度為 3%～4% ）并固定在鈍性擊打器底部（圖1A），一助手觸診大鼠左側股內(nèi)側肌，操作者將負重棒的尾端從離地面 20cm 高處自由落下?lián)舸?次，并完全接觸股內(nèi)側肌，動能約為2.352J，待大鼠清醒后放歸飼養(yǎng)籠。第2天進行離心跑臺（圖1B），跑臺設置坡度 -16^° 、速度 16m/min 、時間 90min ，跑臺過程中以機械刺激和聲音驅趕大鼠，確保按質按量完成跑臺運動。其余5d正常飼養(yǎng)和觀察，不做干預。后面7周重復此操作。恢復期4周不進行任何處理，僅作正常飼養(yǎng)和觀察。恢復期結束后，對所有大鼠的造模部位進行造模評價[1：若存在明顯的緊張帶或膨大結節(jié)，觸診可以誘發(fā)抽搐反應，則提示造模成功，納入實驗，否則排除。

鈍性擊打器參考姚明華等的方法自制打擊裝置。如圖1C示，整個擊打器由一根長 50cm 直徑約為 2.5cm. 總質量為1 200g 的不銹鋼圓柱形負重棒、固定負重棒的“F\"字型不銹鋼結構以及固定大鼠的底座組成。其中，負重棒的頭端用多層棉紗布裹住，便于操作者手持，此外，通過調(diào)節(jié)打擊棒上面的額外負荷改變打擊動能的大小，尾端為錐形鈍頭。“F\"字型不銹鋼結構下端與底座相連，左側固定不銹鋼圓柱體和其內(nèi)上下活動的負重棒，保證負重棒垂直落下。

1.5 干預方法

空白組僅觀察、不做處理，模型組僅做造模處理。弗氏佐劑組和抑制劑組在造模完成后第1天，分別于大鼠激痛點組織注射 150μL CFA1次和 60μg/μL 抑制劑1次（注射量為 120μL ）。考慮到依托考昔片是一種高度疏水性的藥物，水中溶解度較低，可能會形成較大且不均勻的晶體，在水中結晶時不易溶解，故配制成懸濁液灌胃。參照尤卓等的方法，將 60mg/ 片的依托考昔片充分研磨后，用無菌蒸餾水將藥粉配制成濃度為 1.1mg/mL 的懸濁液，置于 4‰ 冰箱冷藏備用。依托考昔組大鼠于造模完成后第1天以 5.5mg/kg 劑量的依托考昔懸濁液灌胄，即每 1kg 體質量大鼠灌胃 5mL 混懸液，每日2次，連續(xù)灌胃

1.6 樣本收集

干預2周后，檢測各組大鼠激痛點的機械痛閥值及軟組織張力，檢測結束后立即取材。將大鼠異氟烷吸入麻醉（誘導濃度 5% ） 2～4min 后觀察到大鼠翻正反射消失，正血鉗鉗夾尾尖無反應。對大鼠造模部位（左側股內(nèi)側肌）進行觸診，若指下可觸及明顯的肌肉緊張帶或收縮膨大結節(jié)，即為需要收集的組織樣本部位，對該部位進行標記。提取樣本時，去除該部位的皮膚和皮下筋膜組織，即可暴露激痛點所在部位（肉眼可見局部肌肉呈暗紅和蒼白色，排列紊亂，有明顯粘連），用手術剪剪下該部位的肌肉緊張帶即可。

1.7 指標檢測

1.7.1機械痛閾值檢測待測大鼠適應環(huán)境 30min 助手固定大鼠，暴露左側股內(nèi)側肌。操作者觸診造模部位的肌肉緊張帶或收縮結節(jié)并標記，用電子測痛儀頭部的針尖（根據(jù)實驗需要選用不同克數(shù)的針尖）對準標記區(qū)域垂直緩慢施壓，使針尖彎曲（不超過30^° ），并保持 2s ，當大鼠出現(xiàn)縮腿動作或尖叫時，針尖撤回，電子測痛儀自動記錄1次測量數(shù)值。每只大鼠檢測3次，每次間隔 10min ，取平均值[2]。

1.7.2軟組織張力檢測待測大鼠適應環(huán)境 30min ，助手固定大鼠，暴露左側股內(nèi)側肌。操作者觸診造模部位的肌肉緊張帶或收縮結節(jié)并標記。將軟組織張力測定儀的檢測頭對準檢測區(qū)域，垂直均勻按壓約3s ，然后均勻撤力約 3s 。檢測系統(tǒng)自動記錄加載卸載時的力量-位移曲線并進行數(shù)據(jù)分析。取曲線中 0.2kg 對應位移值 D_0.2kg 作為觀察指標，可以較好地反應大鼠肌肉軟組織張力情況， D_0.2kg 值與軟組織張力呈負相關，即 D_0.2kg 值越小，軟組織張力越大。每只大鼠檢測3次，每次間隔 10min ，取平均值[13]。1.7.3激痛點組織HE染色將組織樣本固定、脫水、石蠟包埋、切片烤片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇處理。蘇木精溶液染色 5min ，切片以蘇木素分化液分化3s、蘇木素返藍液返藍 3s 。切片入 70% 和 90% 乙醇中脫水各 5min ，伊紅染色 3min ，兩次無水乙醇脫水各 5min 。兩次二甲苯各處理 5min ，中性樹膠封片后顯微成像。

1.7.4激痛點組織IL-1β含量ELISA檢測取適量組織樣本于冰上溶解，稱重、清洗、剪碎后，加入適量PBS溶液碾磨 3～5min ，離心取上清液。檢測前將大鼠IL-1β定量檢測試劑盒平衡至室溫 20min 。設置標準品孔和樣本孔并加樣，按要求滴加各步驟需要的試劑， 37°C 恒溫箱孵育、洗板和計算標準曲線。1.7.5激痛點組織Piezo2免疫組織化學半定量檢測將組織樣本固定、脫水、石蠟包埋、切片烤片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇處理。將切片置于檸檬酸鈉溶液5min 以及 ，滴加 10% 山羊血清并孵育。滴加一抗，孵育。滴加反應增強液，孵育。滴加增強酶標羊抗兔IgG聚合物，孵育。滴加DAB顯色液，孵育。滴加蘇木精溶液，反應 10～20s_c 。切片經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片后顯微成像，通過軟件ImageJ6.0分析其總光密度值。

1.7.6激痛點組織Piezo2蛋白定量檢測取適量組織樣本冰上溶解，稱重、清洗、剪碎后，加入適量PBS溶液碾磨 3～5min ，冰上靜置，低溫離心，收集上清液。測定蛋白濃度，用裂解液和SDS溶液配平，100°C 加熱至蛋白變性。配制 10% 分離膠和 5% 濃縮膠，上樣， 80V 恒壓電泳，當Marker到達膠底部時即可終止電泳，以冰浴 100mV 電壓轉膜 1h 封閉¹h ，加一抗 4% 反應過夜，加二抗室溫孵育 1h 將膜置于凝膠成像系統(tǒng)成像，通過軟件ImageJ6.0分析條帶灰度值。

1.8 統(tǒng)計學分析

采用SPSS26.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料采用 x±s ”表示。數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布時，組內(nèi)比較采用配對 χ_t 檢驗，兩組間比較采用獨立樣本 χ_t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布時，組內(nèi)比較采用Wilcoxon符號秩檢驗，兩組間比較采用Mann-Whitney U 檢驗，多組間比較采用Kruskal-Wallis分析。采用GraphadPrism9.O軟件繪制統(tǒng)計圖。均以 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1各組大鼠激痛點組織機械痛閾值比較

干預前，空白組的激痛點組織機械痛閾平均值為17.967，造模后與空白組比較，模型組、弗氏佐劑組、依托考昔組和抑制劑組的機械痛閾值均降低 ，且4組間比較差異無統(tǒng)計學意義 （P50.05） 。干預后，弗氏佐劑組機械痛閾值較治療前降低（ Plt; 0.05），依托考昔組和抑制劑組均較治療前升高（ Plt; 0.05，Plt;0.01 ）。干預后，與空白組比較，模型組機械痛閾值降低 （Plt;0.01） ；與模型組比較，弗氏佐劑組機械痛閾值降低 （Plt;0.01） ，依托考昔組和抑制劑組均升高 （Plt;0.01） ；與弗氏佐劑組比較，依托考昔組和抑制劑組機械痛閥值均升高 （Plt;0.01） ；與依托考昔組比較，抑制劑組機械痛閾值差異無統(tǒng)計學意義（ Pgt; 0.05）。與空白組比較，模型組干預前后機械痛閾差值差異無統(tǒng)計學意義 （P50.05） ；與模型組比較，弗氏佐劑組機械痛閾差值負向升高 （Plt;0.01） ，依托考昔組和抑制劑組機械痛閾差值均正向升高（ ?Plt;0.05，Plt; 0.01）；與弗氏佐劑組比較，依托考昔組和抑制劑組機械痛閾差值均升高 （Plt;0.01） ；與依托考昔組比較，抑制劑組機械痛閾差值差異無統(tǒng)計學意義 （P50.05） 。詳見表1。

2.2 各組大鼠激痛點組織 D_0.2kg 值比較

干預前，與空白組比較，模型組、弗氏佐劑組、依托考昔組和抑制劑組 D_0.2kg 值均降低（ Plt;0.01? ），且4組間比較差異無統(tǒng)計學意義（ P50.05 ）。干預后，弗氏佐劑組 D_0.2kg 值較治療前降低 （Plt;0.05） ，依托考昔組和抑制劑組均較治療前升高 （Plt;0.05，Plt;0.01） 。干預后，與空白組比較，模型組 D_02kg 值降低 （Plt;0.01） ：與模型組比較，弗氏佐劑組 D_0.2kg 值降低 （Plt;0.01） ，依托考昔組和抑制劑組均升高 （Plt;0.01） ；與弗氏佐劑組比較，依托考昔組和抑制劑組 D_0.2kg 值均升高（Plt;0.01） ；與依托考昔組比較，抑制劑組 D_02kg 值降低（Plt;0.01） 。與空白組比較，模型組干預前后 D_0.2kg 差值差異無統(tǒng)計學意義（ Pgt;0.05） ；與模型組比較，弗氏佐劑組 D_0.2kg 差值負向升高（ Plt;0.01 ，依托考昔組和抑制劑組 D_0.2kg 差值均正向升高 （Plt;0.05，Plt;0.01） ；與弗氏佐劑組比較，依托考昔組和抑制劑組 D_0.2kg 差值均升高（ （Plt;0.01） ;與依托考昔組比較，抑制劑組 D_0.2kg 差值降低 Plt;0.05 。詳見表2。

2.3各組大鼠激痛點組織HE染色結果

空白組：鏡下可見肌細胞呈規(guī)則的多邊形，輪廓清晰、排列整齊，無核內(nèi)移，未見炎癥細胞。模型組：鏡下肌細胞排列紊亂，可見多個增大圓形的肌細胞（圖2箭頭所示），出現(xiàn)不同程度核內(nèi)移，炎癥細胞浸潤。弗氏佐劑組：肌細胞形態(tài)極不規(guī)則，排列紊亂，細胞間炎癥細胞增多。依托考昔組和抑制劑組：細胞形態(tài)與排列趨于一致，部分細胞體積增大，炎癥細胞減少甚至消失，仍存在核內(nèi)移。詳見圖2。

2.4各組大鼠激痛點組織IL- 1β 含量比較

與空白組比較，模型組IL-1β含量升高 （Plt;0.01） ：與模型組比較，弗氏佐劑組IL-1β含量升高 （Plt;0.01） 依托考昔組和抑制劑組IL- 1β 含量均降低 （Plt;0.01） ;與弗氏佐劑組比較，依托考昔組和抑制劑組 IL-1β 含量均降低 （Plt;0.01） ；與依托考昔組比較，抑制劑組IL-1β含量差異無統(tǒng)計學意義 （Pgt;0.05） ）。詳見表3。

2.5 各組大鼠激痛點組織Piezo2表達比較

與空白組比較，模型組Piezo2表達升高 （Plt;0.01） ：

與模型組比較，依托考昔組和抑制劑組Piezo2表達均降低（ （Plt;0.05） ，弗氏佐劑組差異無統(tǒng)計學意義1 Pgt;0.05） ；與弗氏佐劑組比較，依托考昔組和抑制劑組Piezo2表達均降低 （Plt;0.05，Plt;0.01） ；與依托考昔組比較，抑制劑組差異無統(tǒng)計學意義（ （Pgt;0.05） 。空白組肌細胞呈規(guī)則的多邊形，大小均勻排列整齊規(guī)則，有少量陽性表達；模型組和弗氏佐劑組肌細胞體積增大變圓，陽性表達增多；依托考昔組和抑制劑組肌細胞形態(tài)趨于正常，陽性表達減少。詳見表4、圖3。

2.6各組大鼠激痛點組織Piezo2蛋白相對表達比較

與空白組比較，模型組Piezo2表達升高 ; 與模型組比較，依托考昔組和抑制劑組Piezo2表達 均降低 （Plt;0.01） ，弗氏佐劑組差異無統(tǒng)計學意義（ Pgt;

0.05）；與弗氏佐劑組比較，依托考昔組Piezo2表達降低 （Plt;0.01） ，抑制劑組差異無統(tǒng)計學意義 （P50.05） ;與依托考昔組比較，抑制劑組Piezo2表達差異無統(tǒng)計學意義 （P50.05） 。詳見表5、圖4。

3討論

研究表明，炎性致痛物質刺激并敏化外周感受通路是激痛點疼痛的關鍵環(huán)節(jié)[14]。組織損傷或產(chǎn)生炎癥時，外周感受通路持續(xù)受到刺激進而敏化，從而產(chǎn)生機械性痛覺敏化的現(xiàn)象，即放大對疼痛本身的感知，使正常無害的觸覺變成劇烈疼痛感覺[15]。激痛點的維持是由于持續(xù)的肌小節(jié)收縮，外周致敏物質釋放增加，引起外周傷害性感受器敏化，引發(fā)運動終板功能障礙[1

CFA激活免疫反應，已被證明可以在小鼠中產(chǎn)生持久的觸覺異常性疼痛和熱痛敏。依托考昔屬于高選擇性環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制劑，能夠抑制外周和中樞COX-2表達，降低機體內(nèi)前列腺素E2合成量，進而提升疼痛閾值、降低疼痛敏感性，抑制炎癥因子釋放[8。促炎介質通過激活炎癥細胞，產(chǎn)生炎癥介質。 IL-1β 主要通過中性粒細胞的路徑以及單核巨噬細胞的炎性小體激活的方式釋放。研究證明，IL-1β可以激活小鼠胚胎成骨細胞前體細胞系中Piezo1的表達[]。本研究以激痛點模型大鼠為觀察對象，促炎和抑炎藥物作為干預手段，觀察大鼠激痛點局部的機械痛閾值 ?D_0.2kg 值和組織中 IL-1β 的含量。結果發(fā)現(xiàn)，CFA可降低激痛點局部機械痛閾值 值，升高組織中IL-1β含量；依托考昔可升高其機械痛閾值、 Ω.D_0.2kg 值，降低組織中IL-1β的含量。上述結果說明，CFA作為促炎藥物，可以增加激痛點組織炎癥反應、局部疼痛和組織硬度；依托考昔作為抑炎藥，可以減輕激痛點組織炎癥反應、局部疼痛和組織硬度。

離子通道是細胞膜上大分子蛋白圍成的含有水分子的孔道，是神經(jīng)元、心肌細胞、骨骼肌細胞等興奮性細胞電活動的物質基礎。機械敏感離子通道的開放和關閉受細胞膜或細胞骨架機械力變化的控制和調(diào)節(jié)，是實現(xiàn)機械信號向細胞電化學信號轉換的通道[20-21]。Piezo2離子通道傳導疼痛和觸覺，并調(diào)節(jié)本體感覺，在痛覺感受器中廣泛表達22。Piezo2對于小鼠機械性異常疼痛的發(fā)生是必需的，而有害的機械感覺僅部分依賴于該通道。研究表明，Piezo2介導炎癥和神經(jīng)損傷誘導的致敏性機械疼痛，其表達可能受到炎癥細胞因子如白細胞介素-6（inter-leukin-6，IL-6）的調(diào)節(jié)[23-24]。且局部應用Piezo2抑制劑可緩解由神經(jīng)損傷、慢性炎癥或長期損傷引起的機械性異常疼痛25。但Piezo2是否在激痛點組織高表達，抑制其表達是否會影響激痛點組織炎癥反應尚未可知。

基于此，本研究建立激痛點大鼠模型，在激痛點組織注射藥物，Westernblot法和免疫組織化學結果顯示，激痛點組織Piezo2表達增加，依托考昔組和抑制劑組Piezo2表達均降低；加之依托考昔組和抑制劑組的機械痛閾值較模型組升高，說明Piezo2可能在激痛點組織炎癥所致機械痛覺過敏中發(fā)揮作用。然而弗氏佐劑組Piezo2表達較模型組差異無統(tǒng)計學意義，可能是CFA注射后破壞了激痛點的結構，HE染色結果也顯示弗氏佐劑組的肌細胞受損。

綜上所述，弗氏完全佐劑可以增強激痛點局部炎癥反應、肌細胞受損，依托考昔和Piezo2抑制劑可抑制其炎癥反應，Piezo2可能在激痛點組織炎癥所致機械痛覺過敏中發(fā)揮作用。

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（本文編輯匡靜之）