白果內(nèi)酯改善環(huán)磷酰胺所致小鼠免疫功能低下及其相關(guān)機制的研究

[摘要]目的探究白果內(nèi)酯對環(huán)磷酰胺（CTX）所致免疫功能低下小鼠的影響。方法將24只C57BL6J小鼠隨機分為正常組、模型組及白果內(nèi)酯低劑量（ 10mg/kg 組和白果內(nèi)酯高劑量 （20mg/kg） 組，每組6只。除正常組外，其余各組于實驗第1＼～3天腹腔注射 50mg/kg CTX建立小鼠免疫功能低下模型。正常組和模型組小鼠灌胃等體積生理鹽水，白果內(nèi)酯治療組以低、高劑量的白果內(nèi)酯灌胃，每天1次，連續(xù)治療 14d_o 實驗結(jié)束后，檢測小鼠體質(zhì)量、胸腺和脾臟重量，計算胸腺和脾臟指數(shù);計數(shù)板計數(shù)法檢測外周血紅細胞、白細胞和血小板數(shù)量；CCK-8法檢測脾臟T淋巴細胞、B淋巴細胞增殖功能及巨噬細胞吞噬指數(shù)；流式細胞術(shù)檢測脾細胞中 CD4⁺，CD4⁺/CD8⁺T 細胞比例及NK細胞比例;HE染色觀察脾臟和胸腺結(jié)構(gòu)變化;Westemblot檢測脾臟磷脂酰肌醇-3-羥激酶（PI3K） ?^p -PI3K、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶 （Akt） 和 p-Akt 蛋白表達水平。結(jié)果與正常組比較，模型組體質(zhì)量、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)降低 （Plt;0.05，Plt;0.01，Plt;0.001） ；白細胞和血小板數(shù)量降低（ Plt;0.001 ；巨噬細胞、T淋巴細胞和B淋巴細胞增殖指數(shù)降低（ Plt;0.05，Plt; 0.001）；CD4+T細胞比例、CD4+CD8+比值和NK細胞比例降低 （Plt;0.01，Plt;0.001） ；胸腺和脾臟病理結(jié)構(gòu)顯著損傷； Δp -PI3K和 -Akt蛋白表達降低（ Plt;0.001 ）。與模型組比較，白果內(nèi)酯低劑量組血小板數(shù)量、巨噬細胞和T淋巴細胞增殖指數(shù)及CD4+T細胞比例、NK細胞比例 ?^p -PI3K和 p-Akt 蛋白表達均升高（ Plt;0.05） ；與模型組比較，白果內(nèi)酯高劑量組體質(zhì)量（ Plt;0.05 ）、脾臟指數(shù) （Plt;0.01 、胸腺指數(shù) （Plt;0.05） ）、白細胞和血小板數(shù)量（ Plt;0.05） ）、巨噬細胞和T淋巴細胞、B淋巴細胞增殖指數(shù) （Plt;0.05，Plt;0.01 及CD4T細胞比例（ Plt; 0.01）CD4+/CD8+比值（ Plt;0.05 ）、NK細胞比例（ Plt;0.001 ） ??p -PI3K和 p-Akt 蛋白表達（ Plt;0.05 均升高；白果內(nèi)酯高、低劑量組胸腺和脾臟病理損傷改善。與白果內(nèi)酯低劑量組比較，白果內(nèi)酯高劑量組體質(zhì)量、白細胞數(shù)量、NK細胞比例均升高 （Plt;0.05） 。結(jié)論白果內(nèi)酯可提高CTX誘導(dǎo)的免疫功能低下小鼠的特異性和非特異性免疫功能，作用機制可能與激活脾臟PI3K/Akt通路有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]免疫功能低下；白果內(nèi)酯；環(huán)磷酰胺；磷脂酰肌醇-3-羥激酶；絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶 [中圖分類號]R285.5 [文獻標(biāo)志碼]A [文章編號]doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.04.006

[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheefectsofbilobalideoncyclophosphamide（CTX）-inducedimmunocompromisein mice.MethodsAtotalof24C57BL/6Jmicewererandomlydividedintoanormalgroup，amodelgroup，alow-dose（10 mg/ kg） bilobalide group，and a high-dose （20mg/kg） ）bilobalide group，with six mice in each group.Except for the normal group， theothergroupswereintraperitoneallyinjectedwithCTX（5Omg/kg）onthe1stto3rddayoftheexperimenttoestablishan immunocompromisedmousemodel.Themiceinthenormalandthemodelgroupsweregavagedwithanequal volumeof normalsaline，whilethebilobalidegroupsreceivedlow-orhigh-dosebilobalidebygavageoncedailyfor14consecutivedays. Aftertheexperiment，thebodyweight，thymusandsplenweightofmiceweremeasured，andthethymusandspleenindices werecalculated.Thenumberofperipheral blooderythrocyte，leukocyte，andplateletcountswereasssedusinga hemocytometer;；theCCK-8assywasusedtoevaluatetheproliferationofspleenTandBlymphocytesaswellasthe phagocytic index of macrophages; flow cytometry was performed to analyze the proportion of CD4 ?⁺ T cells， CD4+/CD8 + Tcell ratio，andNKcellratioinsplenocytes.Histopathologicalchangesinthesplenandthymuswereobservedusing HEstaining; Wester blot was conducted to check the protein expression levels of phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）， p -PI3K，serine/ threonineproteinkinase（Akt），andp-Aktinthespleen.ResultsComparedwiththenormalgroup，themodelgroupexhibiteda significant decrease in body weight，spleen index，and thymus idex （ Plt;0.05 ， Plt;0.01 Plt;0.001 ）; reduced leukocyte and platelet counts（ P lt;0.001）;decreasedproliferation indices ofmacrophages，T lymphocytes，and B lymphocytes（ P lt;0.05， P lt;0.001）;lower proportions of CD4 + Tcells， CD4⁺/CD8⁺ ratio，and NK cell ratio （ P lt;0.01， P lt;0.001）;significant pathological damage to the thymus and spleen; and downregulated expressions of p -PI3K and p-Akt proteins （ P- lt;0.001）.Compared with the model group， the low-dose bilobalide group showed increased platelet count， macrophage and Tcell proliferation indices，CD 4⁺ T cell proportion， NK cell ratio，and expressions of p -PI3K and p-Akt proteins（ P lt;0.05）.Compared with the model group，the high -dose bilobalide group exhibited significant increase in body weight （ P lt;0.05），spleenindex（ P lt;0.01），thymus index（ P lt;0.05）， leukocyte and platelet counts （ P- lt;0.05），proliferation indices of macrophages，T lymphocytes，and B lymphocytes （ P lt;0.05， Plt;0.01 ），CD4 ?⁺ T cell proportion （ P lt;0.05），CD4+/CD8+ ratio （ P- lt;0.05），NKcell ratio （ P lt;0.05）， and p -PI3K and p-Akt protein expressions （ P_- lt;0.05）. Additionally，bothlow-andhigh-dosebilobalidegroupsshowedameliorationinthymusandspleenpathologicaldamage. Comparedwiththelow-dosebilobalidegroup，thehigh-dosebilobalidegroupdemonstratedsignificantlyincreasedbodyweight， leukocytecount，andNKcellratio（O.O5）.ConclusionBilobalidecanenhancebothspecificandnonspecificimmunefunctionsin CTX-induced immunosuppressedmice，anditsmechanismof actionmayberelatedtotheactivationof thespleenPI3K/Akt signaling pathway.

[Keywords]immunocompromise；bilobalide;cyclophosphamide；phosphatidylinositol-3-hydroxykinase；serine-threonine protein kinase

化療藥物可快速高效殺滅腫瘤細胞，是目前臨床上治療各種惡性腫瘤的主要方法之一，但化療藥物也會對正常組織細胞產(chǎn)生損傷，其毒副作用使患者生存質(zhì)量嚴重降低，因此，降低化療的毒副作用是惡性腫瘤治療中的重要環(huán)節(jié)。環(huán)磷酰胺（cyclophos-phamide，CTX）是一種化療藥物，多年來被廣泛用于腫瘤治療，也是常用的免疫抑制動物模型的造模藥物。然而，在CTX應(yīng)用過程中，患者容易出現(xiàn)白細胞和中性粒細胞降低，導(dǎo)致免疫功能低下，繼而引發(fā)嚴重的感染，甚至危及生命。免疫功能低下是指各種原因?qū)е碌拿庖呒毎煅δ芙档停行某睾屯庵艹刂械母黝惷庖邤?shù)量降低3。白細胞減少癥和中性粒細胞減少癥等造成患者免疫功能低下，可能引發(fā)嚴重感染，危及生命，也阻礙了化療過程4。因此，需尋找合適的方法預(yù)防和治療化療導(dǎo)致的免疫功能低下。

白果內(nèi)酯是一種倍半萜類三內(nèi)酯，在銀杏葉提取物中的含量約為 。已有研究證明，白果內(nèi)酯對神經(jīng)細胞、癌癥細胞和脂肪細胞具有抗炎、抗氧化應(yīng)激和治療缺氧損傷的作用5-。然而，潛在的機制尚未完全闡明。有研究表明，白果內(nèi)酯通過促進磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol-3-hydroxyki-nase，PI3K）/絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（serine/threo-nineproteinkinases，Akt）通路抑制Toll樣受體4（Tolllikereceptor，TLR4）-核因子 κB （nuclear factor- ??κB. NF- σ_κB ）信號通路，從而減輕脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的人肝細胞癌（human hepatocellular car-cinoma，HepG2）細胞氧化應(yīng)激損傷。白果內(nèi)酯可通過激活PI3K/Akt通路蛋白在神經(jīng)母細胞瘤細胞系中的表達，減輕過氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和凋亡損傷8。此外，體內(nèi)和體外實驗研究表明，白果內(nèi)酯和雙葉內(nèi)酯對腦缺血損傷動物模型具有顯著的抗氧化和治療作用，白果內(nèi)酯可能通過激活A(yù)kt/核轉(zhuǎn)錄因子紅系2相關(guān)因子2（nuclear factor-erythroid2-re-latedfactor2，Nrf2）通路發(fā)揮抗氧化作用

已有各種研究報道了白果內(nèi)酯的抗炎、抗氧化和抗腫瘤作用，然而其對免疫功能的影響，尤其是對CTX所致的免疫功能低下小鼠的作用和機制未見報道。本研究擬通過建立CTX導(dǎo)致的免疫功能低下小鼠模型探究白果內(nèi)酯對免疫功能的影響。

1材料

1.1 動物

24只雄性C57BL/6小鼠，8周齡，體質(zhì)量（ 22± 2）g ，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，合格證號：SCXK（京）2018-0001。小鼠飼養(yǎng)在西安醫(yī)學(xué)院藥理實驗室清潔級動物房，溫度 （25±2） ） ^°C，12h 明暗循環(huán)照明，自由攝取食物和水。所有實驗程序均遵循實驗動物護理原則，并經(jīng)西北婦女兒童醫(yī)院科教科倫理委員會批準（批準號：dwll20240203）。

1.2 主要試劑

注射用CTX（江蘇恒瑞公司，批號：22041525）;白果內(nèi)酯（美國MCE公司，貨號：HY-N0076，分子式C₁₅H₁₈O₈， ；刀豆蛋白A（concanavalinA，ConA）LPS（美國Sigma公司，貨號：C5275、L5293）;CCK-8試劑盒（上海翌圣生物公司，貨號：40203ES）;PerCP-Cy5.5標(biāo)記的抗小鼠 CD4⁺ 抗體、PE-Cy7標(biāo)記的抗小鼠CD8+抗體、PE標(biāo)記的抗小鼠CD3+抗體、APC標(biāo)記的抗小鼠NK1.1抗體（美國BD公司，貨號：550954、5528779091617，9011560）;AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒（上海圣爾生物公司，貨號：SB-Y6002）;抗小鼠PI3K抗體、抗小鼠 -PI3K抗體、抗小鼠Akt抗體、抗小鼠p-Akt抗體（艾比瑪特生物公司，貨號：T40115、T40116、T55561、T40067）。

1.3 主要儀器

酶標(biāo)儀（美國MolecularDevices公司，型號：M3）;二氧化碳培養(yǎng)箱（新加坡Esco公司，型號：CelMate）;全自動血細胞分析儀（日本Sysmex公司，型號：XN1000）;低溫高速離心機、流式細胞儀（美國Beck-man公司，型號：Allegra V-15R、CytoFLEXS）;Mini-Chemi化學(xué)發(fā)光成像儀（中國賽智SINSAGE公司，型號：Champ Gel 6000）。

2方法

2.1 動物分組及造模

小鼠按照隨機數(shù)字表法分為正常組、模型組及白果內(nèi)酯低劑量組（ 10mg/kg^′ 和白果內(nèi)酯高劑量組（20mg/kg）^[10 ，每組6只。正常組和模型組小鼠每天灌胃生理鹽水 ，白果內(nèi)酯低、高劑量組按照對應(yīng)的劑量每天灌胃 0.2mL 治療，均連續(xù)灌胃治療14d，每天1次。

第1＼～3天，除正常組腹腔注射生理鹽水外，其他組小鼠按照文獻方法連續(xù)3d腹腔注射CTX（ 50mg/kg） 建立小鼠免疫功能低下模型[1I-2]。模型小鼠流式細胞檢測結(jié)果表明 CD4⁺ 比例、 CD4⁺/CD8⁺ 比值和NK細胞比例相比于正常小鼠顯著降低，認為模型建立成功[12]。

2.2 體質(zhì)量及免疫器官指數(shù)測定

實驗結(jié)束后檢測各組小鼠體質(zhì)量，并取出胸腺和脾臟稱重。按照以下公式計算：胸腺指數(shù) 胸腺重量 （mg /體質(zhì)量 （g）×10 ;脾臟指數(shù) Ψ=Ψ 脾臟重量 （mg）/ 體質(zhì)量 （g）×10

2.3 胸腺和脾組織HE染色

將部分胸腺和脾組織放于 4% 多聚甲醛中固定24h ，經(jīng)脫水、石蠟包埋、切片后行HE染色，白光顯微鏡拍照觀察胸腺和脾組織的結(jié)構(gòu)變化。

2.4 血常規(guī)測定

獲得小鼠EDTA-K2抗凝血，使用改良牛鮑計數(shù)板對紅細胞、白細胞、血小板進行計數(shù)，離心全血獲取細胞沉淀，分別加入紅細胞、白細胞和血小板稀釋液，進行充池，在白光顯微鏡下計數(shù)并統(tǒng)計。

2.5T淋巴細胞和B淋巴細胞增殖及巨噬細胞吞噬能力測定

小鼠脾細胞鋪于96孔板中，5000個細胞/孔。分別加入ConA（ 或LPS（ 10μg/mL ，刺激T淋巴細胞、B淋巴細胞增殖，同時設(shè)置未刺激的對照孔，加入相應(yīng)體積的PBS。于細胞培養(yǎng)箱 37°C 、5% CO₂ 作用 72h 后每孔加入CCK-8試劑 20μL 門繼續(xù)培養(yǎng) ¹h 后在波長 450nm 處測定OD值并計算增殖指數(shù)。增殖指數(shù) 添加ConA或LPS孔的OD值/未添加ConA或LPS孔的OD值。

實驗結(jié)束前 ^48h ，小鼠腹腔注射 10% 滅菌過的淀粉溶液 2mL ，終止實驗當(dāng)天小鼠腹壁開孔注入生理鹽水反復(fù)吹吸并按揉腹部。收集懸液，200過濾網(wǎng)過濾后離心收集細胞計數(shù)，鋪于96孔板中，5000個細胞/孔。培養(yǎng) 6h 后，棄上清液，每孔加入200μL 的 0.1% 中性紅溶液，繼續(xù)孵育 30min 后PBS洗1次，加入 50μL 細胞裂解液（乙醇乙酸 =1：1 ），室溫放置 ，于 550nm 處測定OD值。

2.6脾細胞CD4+和 CD8⁺T 細胞和NK細胞檢測

取 1×10⁵ 個小鼠脾細胞于流式管中，加入 CD4⁺ 和CD8+熒光標(biāo)記抗體，避光孵育 15min ;另取 1×10⁵ 個小鼠脾細胞于流式管，加入 CD3⁺ 和NK1.1熒光標(biāo)記抗體，避光孵育 15min ，PBS洗細胞2次，重懸至500μL 的PBS中。采用流式細胞儀進行檢測，使用FlowJo10.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。

2.7 脾組織PI3K/Akt通路檢測

取新鮮的小鼠脾臟加入裂解液， 離心 10min （離心半徑 7.6cm^? ）后取上清液，BCA法測定蛋白濃度后加入上樣緩沖液，煮沸 10min 。使用Westernblot法對制備好的蛋白樣品進行檢測，將蛋白樣品加至 7.5% 的SDS-PAGE凝膠中電泳分離（ 100V，90min ）。將凝膠和PVDF膜制成三明治夾心進行電轉(zhuǎn)移 （80V，90min ）。將PVDF膜加人 5% 的BSA中室溫搖動封閉 ¹h ，加入稀釋的一抗 （PI3K，p-PI3K，Akt，p-Akt 稀釋比例均為1：1 000）4 C 孵育過夜，以 β -actin（稀釋比例為1：100000）作為上樣內(nèi)參。TBST洗膜，二抗室溫孵育 ¹h ，TBST洗膜3次，每次 5min 。ECL發(fā)光顯色拍照，每組3個生物學(xué)重復(fù)，采用ImageJ1.53軟件對條帶進行灰度相對定量分析。

2.8 統(tǒng)計學(xué)分析

所有實驗數(shù)據(jù)均以\"x±s\"表示。采用GraphpadPrism9.0軟件統(tǒng)計數(shù)據(jù)并作圖。組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用 LSD 法。 Plt;0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1白果內(nèi)酯對免疫功能低下小鼠體質(zhì)量及免疫器官的影響

與正常組比較，模型組體質(zhì)量、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)降低 （Plt;0.05，Plt;0.01，Plt;0.001） ；與模型組比較，白果內(nèi)酯高劑量組體質(zhì)量、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)升高 （Plt;0.05，Plt;0.01） ；與白果內(nèi)酯低劑量組比較，白果內(nèi)酯高劑量組體質(zhì)量升高 （Plt;0.05） 。詳見表1。

正常組小鼠的脾臟組織形態(tài)完整，紅髓、白髓正常，清楚可辨，邊緣界限清晰，脾小結(jié)發(fā)育正常；胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)結(jié)構(gòu)清晰，皮質(zhì)染色深且面積較大，可觀察到排列緊密的淋巴細胞。模型組脾臟紅髓、白髓邊緣界限不清晰，脾小結(jié)嚴重縮小甚至無法辨認；胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)分界不清，可觀察到皮質(zhì)和髓質(zhì)面積均顯著減小且出現(xiàn)空泡，淋巴細胞數(shù)量顯著減少。白果內(nèi)酯低、高劑量組脾臟紅髓、白髓可辨，邊緣界限稍清晰，牌小結(jié)發(fā)育基本正常，且白果內(nèi)酯高劑量組效果更顯著;胸腺皮質(zhì)面積增加，皮質(zhì)、髓質(zhì)交界較為清晰，淋巴細胞數(shù)量較模型組顯著增多，且白果內(nèi)酯高劑量組效果更顯著。詳見圖1。

3.2白果內(nèi)酯對免疫功能低下小鼠外周血細胞數(shù) 量的影響

與正常組比較，模型組白細胞和血小板數(shù)量降低 （Plt;0.001） ；與模型組比較，白果內(nèi)酯低劑量組血小板數(shù)量升高 （Plt;0.05） ，白果內(nèi)酯高劑量組白細胞和血小板數(shù)量升高（ _{（Plt;0.05）} ；與白果內(nèi)酯低劑量組比較，白果內(nèi)酯高劑量組白細胞數(shù)量升高 （Plt;0.05） 。詳見表2。

3.3白果內(nèi)酯對免疫功能低下小鼠T淋巴細胞、B淋巴細胞增殖及巨噬細胞吞噬的影響

與正常組比較，模型組巨噬細胞 ?^T 淋巴細胞和B淋巴細胞增殖指數(shù)降低 （Plt;0.05，Plt;0.001） ；與模型組比較，白果內(nèi)酯低劑量組巨噬細胞和T淋巴細胞增殖指數(shù)升高 （Plt;0.05） ，白果內(nèi)酯高劑量組巨噬細胞、T淋巴細胞和B淋巴細胞增殖指數(shù)升高（Plt;0.05，Plt;0.01） 。詳見表3。

3.4白果內(nèi)酯對免疫功能低下小鼠 CD4^′T 比例、CD4+/CD8+比值和NK細胞比例的影響

與正常組比較，模型組 CD4⁺T 細胞比例、 CD4⁺/ CD8⁺ 比值和NK細胞比例降低 （Plt;0.01，Plt;0.001） ：與模型組比較，白果內(nèi)酯低劑量組 CD4^′T 細胞比例和NK細胞比例升高 （Plt;0.05） ，白果內(nèi)酯高劑量組CD4^′T 細胞比例 .CD4⁺/CD8⁺ 比值和NK細胞比例升高 （Plt;0.05，Plt;0.01，Plt;0.001） ；與白果內(nèi)酯低劑量組比較，白果內(nèi)酯高劑量組NK細胞比例升高 （Plt;0.05） 。詳見表4。

3.5白果內(nèi)酯對免疫功能低下小鼠脾臟PI3K/Akt通路蛋白表達的影響

與正常組比較，模型組 p-PI3K 和 p-Akt 蛋白表達降低 （Plt;0.01，Plt;0.001） ；與模型組比較，白果內(nèi)酯低、高劑量組 p-PI3K 和 p-Akt 蛋白表達升高（Plt;0.05） 。詳見圖2。

4討論

CTX是臨床上常用的抗代謝和抗DNA合成的化療藥，通常用于治療血液系統(tǒng)腫瘤和慢性自身免疫病，其作用范圍廣泛，作用效果顯著[13]。但是由于長期使用和藥物劑量問題，CTX會造成免疫功能低下，即顯著的骨髓造血功能抑制，最終發(fā)生感染危及患者生命[14。因此，CTX導(dǎo)致的免疫功能低下需要引起重視。在目前的研究中，誘導(dǎo)免疫功能低下的模型方式很多，且各種藥物的劑量、時間、用藥方式各不相同，缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準。本研究結(jié)果表明，使用50mg/kg 的CTX連續(xù)腹腔注射3d制備的免疫功能低下小鼠模型的免疫器官胸腺和脾臟基本生理結(jié)構(gòu)被破壞，同時脾臟淋巴細胞的流式細胞分析結(jié)果也表明， CD4⁺ 和 CD8⁺ 細胞比例較正常組顯著降低，提示模型成功建立。

本研究探究銀杏葉提取物白果內(nèi)酯，通過免疫器官指數(shù)，外周血細胞數(shù)量，T淋巴細胞、B淋巴細胞增殖和巨噬細胞吞噬功能，脾淋巴細胞中CD4+/CD8⁺ 細胞比值，NK細胞比例的檢測，表明其可以顯著提高CTX導(dǎo)致的免疫功能低下小鼠的免疫功能，且在提高體質(zhì)量、白細胞數(shù)量和NK細胞比例上高劑量效果更佳。中藥復(fù)方和中藥活性成分具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤的功效[15]。銀杏提取物可通過調(diào)節(jié)腸黏膜Th17/Treg平衡改善大鼠潰瘍性結(jié)腸炎[一項研究報道，含有銀杏活性成分的銀杏蜜環(huán)口服液在緩解患者冠心病的同時，可以提高外周血中CD3⁺ 、 CD4⁺ 、 CD4⁺/CD8⁺ 比例，表明其具有提高免疫功能的功效，與本研究報道的結(jié)果一致7。

此外，本研究還對相關(guān)作用機制做了初步探究。PI3K/Akt信號通路在惡性腫瘤發(fā)展過程中起著重要作用，該通路能調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖和分化等，是參與惡性腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的重要分子機制之一[18]。PI3K是由p110催化亞基和p85調(diào)節(jié)亞基組成的異源二聚體，在各種細胞生理活動中發(fā)揮關(guān)鍵作用[]。Akt有3種亞型（Akt1、Akt2和Akt3），可響應(yīng)上游PI3K而被激活[20。Akt參與調(diào)節(jié)受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，因此，靶向PI3K/Akt成為治療化療藥導(dǎo)致的免疫功能低下的新策略。

本研究使用Westernblot檢測小鼠脾臟淋巴細胞中PI3K/Akt通路蛋白的表達，結(jié)果表明免疫功能低下小鼠的PI3K/Akt通路的活性顯著被抑制，表明免疫細胞的增殖降低，體外實驗證明模型組T淋巴細胞和B淋巴細胞增殖降低，使用低劑量或高劑量白果內(nèi)酯治療后PI3K/Akt通路相對于模型組顯著被激活，同時T淋巴細胞增殖指數(shù)也顯著升高，說明白果內(nèi)酯提高免疫功能的作用可能是通過激活脾臟免疫細胞PI3K/Akt通路促進免疫細胞增殖實現(xiàn)的。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)白果內(nèi)酯能治療CTX引起的小鼠免疫功能低下，且高劑量的治療效果更佳，其作用機制可能與上調(diào)PI3K/Akt信號通路有關(guān)。本研究探究了白果內(nèi)酯輔助化療對免疫功能低下小鼠的作用，以期為相關(guān)藥物的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

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（本文編輯 周旦）