HPLC法測定參芪通絡顆粒中羥基紅花黃色素A的含量

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】A 【文章編號】1007-8517（2025）11-0052-03

DOI： 10.3969/j . issn.1007-8517.2025.11. zgmzmjyyzz202511011

Determination of Hydroxysafflower Yellow A in Shenqi Tongluo Granules by HPLC

LIN Qunfeng'XU Jie2*ZHANG Huijing2 LI Ning2LI Qiang2 1. ， ， ，; 2. ， ，

Abstract：ObjectiveToestablishahighpeformance liquidchromatographymethodforthequantificationof hydroxysafflower Yellow A in Shenqi Tongluo granules. Methods After dissolved with 50% methanol，ultrasonic， filtered，the test sample was loaded onto a YMC - Triart C₁₈ （ 250mm×4.6mm ， 5μm ）column to separate with a mobile phase of methanol -acetonitrile -0.7% （2 phosphoric acid（30：2：68），the detection wavelength was 403nm ，the column temperature was 30 C ，the injection volume was 10 （20 μL ， the flow rate was 1.0mL/min . Results The calibration curve of hydroxysafflower yellow A showed a good linearity（ R²=1 ） in the range of32.55-651 ng.The recoverieswere in the range of100.17%-102.64 % ， the relative stard deviations（RSD） was 0.87% .Conclusion The method issimple，accurate，reproduciblestable，can beused forthedeterminationof hydroxysafflower yellow A in Shenqi Tongluo granules.

KeyWords：Shenqi Tongluo Granules；Hydroxysafflower Yellow A；Content Determination；HPLC

參芪通絡顆粒處方來源于壽光市中醫醫院臨床經驗方。該制劑由黃芪、太子參、當歸、生地黃、赤芍、川芎、紅花、菊花等十八味中藥組成，按一定比例混合均勻，加水浸泡，煎煮，濾過，濃縮，制成顆粒，干燥，即得。該制劑具有活血通絡、益氣養陰、健脾補腎等功效，臨床上常用于糖尿病周圍血管病變導致的肢體發涼、麻木、疼痛、腿足攣急、酸脹疼痛或小腿抽搐、肢端皮膚紫紺或蒼白、或間歇性跛行等癥狀的治療[1-2] 。

紅花味辛，性溫，活血通絡，祛瘀止痛，輔助赤芍、川芎、當歸促進血液循環，為本方的重要藥材，在藥效發揮中起到了重要作用[3-4]。羥基紅花黃色素A是紅花中的主要有效成分，具有抗氧化、減輕神經細胞損傷、降血糖等功效，且在紅花中含量較高，在《中國藥典》中作為評價紅花質量的指標[5-6]。該院內制劑的質量標準尚未建立含量測定方法，因此本文探討了參芪通絡顆粒中羥基紅花黃色素A的高效液相色譜測定方法，為參芪通絡顆粒的質量控制提供依據。

1材料與方法

1.1儀器與試劑LC-20A高效液相色譜儀（日本島津制作所，UV檢測器，Labsolution工作站），LE204E電子分析天平（瑞士梅特勒－托利多上海有限公司），GR202電子分析天平（日本艾安得股份有限公司），KQ3200DV數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。羥基紅花黃色素A對照品（批號：111637－202111；中國食品藥品檢定研究院），參芪通絡顆粒（批號：20220401，20220402，20220403；壽光市中醫醫院；規格：每袋 15g ），甲醇（色譜級，德國Merck公司），乙睛（色譜級，德國Merck公司），磷酸（分析純，煙臺雙雙化工有限公司），實驗用水為超純水（電阻率為 18.25MQ?cm 。

1.2方法

1.2.1對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素 A對照品適量，精密稱定，置量瓶中，加人 50% 甲醇水溶液，使溶解并定容，配制成每 1mL 含13.02μg 的溶液，即得。

1.2.2供試品溶液的制備取參芪通絡顆粒約3.0g ，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密量取25mL 50% 甲醇水溶液加入，密塞，稱定重量，超聲處理（功率2 4 0 ～W "，頻率 40kHz ） 45min ，放冷至室溫，再次稱定重量，加入適量 50% 甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。1.2.3陰性對照溶液的制備取處方中去除紅花的其他藥物，按處方比例制成不含羥基紅花黃色素A的陰性對照樣品。取陰性對照樣品，照“1.2.2”項下的制備方法制成陰性對照溶液。1.2.4色譜條件及系統適用性試驗色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，YMC-Triart C₁₈ （ 250mm×4.6mm ， 5μm ），流動相為甲醇-乙腈-0.7% 磷酸（30：2：68），流速 1.0mL/min ，柱溫30% ，檢測波長 403nm ，進樣體積 10μL 。

2結果

2.1專屬性考察分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液，照“1.2.4”項下色譜條件進樣測定。由圖1可見，陰性對照品溶液中未出現干擾羥基紅花黃色素A的色譜峰；供試品色譜圖中，羥基紅花黃色素A主峰與其他雜質峰完全分離，表明在該色譜條件下，羥基紅花黃色素A可以被檢出，且處方中其他成分不干擾羥基紅花黃色素A的測定，方法的專屬性高，選擇性好。

2.2線性范圍考察取羥基紅花黃色素 A對照品適量，精密稱定，用 50% 甲醇水溶液使溶解并定容，制成每 1mL 含 1.302mg 的儲備液1；精密量取 5mL 儲備液1置 50mL 量瓶中，加入 50% 甲醇水溶液定容至刻度，搖勻，即得儲備液2；用 50% 甲醇水溶液將儲備液2稀釋后配制成質量濃度分別為3.255 μg/mL 、 6.51μg/mL 、 13.02μg/mL 32.55μg/mL ！ 65.1μg/mL 的系列標準溶液，分別注入液相色譜儀，照“1.2.4”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，測定峰面積值，以羥基紅花黃色素A對照品的峰面積（ χ_y^′ ）對其進樣量（ng）進行線性回歸，繪制標準曲線，回歸方程為 y= 3034.7x-5852.1 （ R²=1 ）。結果表明，羥基紅花黃色素A在 32.55～651ng 質量范圍內，線性關系良好。

2.3重復性考察 取20220401批次供試品，照“1.2.2”項下供試品制備方法制得供試品溶液，平行配制6份，照“1.2.4”項下色譜條件進行測定，計算6份樣品中羥基紅花黃色素A的平均含量為 110.63μg ，其RSD為 0.57% ，表明本方法測定參芪通絡顆粒中的羥基紅花黃色素A的重復性良好。

2.4精密度考察取20220401批次供試品，照“1.2.2”項下供試品制備方法制得供試品溶液，照“1.2.4”項下色譜條件重復進樣6次，記錄色譜圖，羥基紅花黃色素A的峰面積RSD為0.30% ，保留時間的RSD為 0.35% ，表明該儀器測定羥基紅花黃色素A的精密度良好。

2.5穩定性考察取20220401批次供試品，照“1.2.2”項下供試品制備方法制得供試品溶液，照“1.2.4”項下色譜條件進行測定，分別于 ^0h 、^2h ！ ^4h ！ 6h ！ 、 ^10h 1 ^12h 、 ^16h 、 24h 進樣分析。結果顯示，在 0～24h 內，供試品中羥基紅花黃色素A的平均峰面積為380140.4，峰面積的RSD為 0.82% ，表明供試品溶液中羥基紅花黃色素A在 24h 內的穩定性良好。

2.6加樣回收率考察取已知羥基紅花黃色素 A含量的20220401批次供試品約 1.50g ，精密稱定，置 50mL 具塞錐形瓶中，按照與供試品（ 1.50g） 中羥基紅花黃色素A的量之比為1：1，精密加入羥基紅花黃色素A對照品，用 50% 甲醇水溶液溶解，照“1.2.2”項下供試品制備方法制得供試品溶液，平行制備6份。按“1.2.4”項下色譜條件進行測定。結果見表1。

2.7含量測定取3批參芪通絡顆粒樣品，照“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，照“1.2.4”項下色譜條件進行羥基紅花黃色素A含量測定，批號為20220401、20220402、20220403的三批供試品中羥基紅花黃色素A的含量分別為111.75μg/g 、1 11.24μg/g 、 112.12μg/g 。

3討論

3.1檢測波長及流動相的考察檢測波長直接參考《中國藥典》紅花中羥基紅花黃色素A的檢測方法，方法中其檢測波長采用了 403nm ，故本方法檢測波長定為403nm；流動相參考藥典及文獻[3.6-9]分別考察了甲醇-乙腈- 0.7% 磷酸溶液（26：2：72），甲醇－乙腈- 0.7% 磷酸溶液（30：2：72），甲醇-乙睛 -0.7% 磷酸溶液（33：2：72）3種流動相等度洗脫方法，結果表明甲醇-乙腈-0.7% 磷酸溶液（30：2：72）為流動相時，供試品中各成分分離度較好，且在羥基紅花黃色素A相應的出峰位置沒有干擾，因此選擇用此色譜條件作為本方案色譜條件。

3.2提取方法的考察參考相關文獻[10-I1]，實驗過程中考察了提取溶劑（ 25% 甲醇、 50% 甲醇、75% 甲醇），超聲時間（ 30min 7 45min ！ 60min ）及提取方式（加熱回流和超聲）對羥基紅花黃色素A提取率的影響。加熱回流和超聲提取相比，提取效果無明顯差異。考慮超聲提取操作更簡便，可操作性強，故選取超聲提取作為含量測定最終提取方法。羥基紅花黃色素A極性較大，在甲醇溶劑中溶解性比較好，最終確定 50% 甲醇超聲處理（ 240‰ ，頻率 40kHz ） 45min 為最優提取方法。

綜上所述，本研究中采用HPLC法測定參芪通絡顆粒中的羥基紅花黃色素A含量，以甲醇－乙腈 -0.7% 磷酸溶液為流動相，采用等度洗脫，其羥基紅花黃色素A的色譜峰與其他雜質峰具有良好的分離度，具有方法簡便、穩定性好、專屬性強、結果準確、重復性良好等優點，可用于參芪通絡顆粒中的羥基紅花黃色素A的含量測定，為制定參芪通絡顆粒的質量標準提供了依據。

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