參芪固本方調控IL-17信號通路改善癌因性疲乏的作用機制

中圖分類號R965；R285 文獻標志碼A 文章編號 1001-0408（2025）14-1722-08

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.14.06

ABSTRACTOBJECTIVEToexplore the mechanismof Shenqi guben formula（SQGB）in improving cancer-related fatigue （CRF）based on network pharmacologyand celular experiments.METHODS Activecomponentsof SQGB and CRF-related targetswereidentifiedonthebasisofdatabasessuchastheTraditionalChineseMedicineSystemsPharmacologyplatform.Anin vitro CRFcellmodel was establishedby inducing A549celswith interleukin-17（IL-17）.Cells were treated with low（ 1.0mg/mL ）orhigh （1.5mg/mL ）concentrations of SQGB.The effectson cellviability，migration，apoptosis，inflammatoryfactors， mRNA expression，apoptosis-related proteins and key proteins of IL-17 signaling pathway were evaluated using scratch assay， flowcytometry，ELISA，real-time fluorescent quantitative PCR and Western blot analysis.RESULTS SQGB contained 84 active components acting on 209 potential CRF targets. Among these，quercetin，kaempferol，and luteolin were identified as thecore components of the compound.Core targets included tumorproteip53，AKTserie/threoninekinase1，I-6，andtumornecrosisfactor（TNF）IL-17，TFandphosphatidylioitol-- kinase-serine/threonineprotein kinase（PI3K/Akt）signaling pathwayswereidentifiedascrucial pathways.Compared with IL-17 interventiongroup，thecellmigrationrate，B-cellymphoma 2（Bcl-2）protein expression，thelevelsofIL-6and TNF- α in the supernatant，mRNA expression of IL-17 receptor A（IL-17RA），TNF- α_?∝ ，and IL-6，as well as the protein expression of IL-17RA and nuclear factorkappa-Bp65subunit（p65），andphosphorylated（p）-p65/p65ratioinIL-17+SQGBlow-andhigh-quality concentration groups were all significantly decreased or down-regulation （Plt;0.05 ）；theapoptosis rate，expression levels of Bcl-2 asociatedXprotein（Bax）andcleavedcaspase-3protein，theratioofBax/Bcl-2，theexpresionlevelofp-p38protein，andthepp38/p38 ratio were all significantly increased or up-regulated（ Plt;0.05 ）.Moreover，the improvement effects of these indicators weremostly beterinthehigh-quality concentrationgroups compared tothelow-qualityconcentrationgroups（ Plt;0.05） 1 CONCLUSIONSSQGBameliorates CRFbyregulating the IL-17signalingpathway，inhibiting the expresionof inflammatory factors，and activating p38 MAPK-dependent apoptosis pathway.

KEYWORDsShenqi guben formula；network pharmacology；cancer-related fatigue；celllar experiments

癌因性疲乏（cancer-relatedfatigue，CRF）被定義為持續存在的、與活動量不匹配的疲乏感，是惡性腫瘤患者的常見癥狀之一。CRF無法通過休息緩解，可影響患者的身心健康及日常功能。研究顯示， 20%～46% 的惡性腫瘤患者會在治療過程中或接受治療后出現不同程度的CRF，且持續疲勞者的死亡風險比無疲勞者高2.56倍[2-3]。雖然CRF在惡性腫瘤患者中的高發性已得到學界廣泛關注，但自前尚無特異性藥物被批準用于治療該病。已有研究者嘗試使用抗炎藥物、抗抑郁藥物和興奮劑來緩解CRF，但療效不佳4。例如，抗炎藥物雖然能夠減少慢性炎癥對疲乏的影響，但并未在所有患者中表現出顯著療效，且長期使用可能引發免疫抑制或其他不良反應。

參芪固本方是國醫大師周岱翰教授的臨床經驗方，由黨參、黃芪、白術、茯苓等中藥組成，具有健脾益腎、滋陰補陽的功效。該方已在臨床廣泛用于術后恢復、化療及免疫治療的惡性腫瘤患者6-]。本團隊前期的臨床觀察研究顯示，參芪固本方可降低CRF患者的炎癥指標，改善其體力和生存質量（另文待發），但具體機制尚不明確。基于此，本研究擬通過網絡藥理學分析及細胞實驗，初步揭示參芪固本方改善CRF的藥效物質及作用機制，以期為該藥的臨床使用提供參考。

1材料

1.1主要儀器

本研究所用主要儀器包括NanoDropOne/OneC型微量核酸蛋白濃度測定儀和QuantStudio5型熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）儀[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]、PowerPacBasic164-5050型電泳儀和MiniTrans-Blot 170-3930型轉印槽（美國Bio-Rad公司）、Synergy-HT型酶標儀（美國BioTek公司）、1300NovoCyte型流式細胞儀（美國ACEABiosciencesInc.）BDS400型倒置生物顯微鏡（重慶奧特光學儀器有限責任公司）L3-5K型冷凍離心機（湖南可成儀器設備有限公司）等。

1.2主要藥品與試劑

參芪固本方凍干粉（1g凍干粉相當于1g生藥，于4^°C 保存）由廣州中醫藥大學深圳醫院（福田）中藥房自制。

青-鏈霉素溶液（ 100× ，批號15140-122）胎牛血清（批號10099-141）均購自美國Life Technologies公司；RPMI-1640培養基（批號C11875500BT）購自美國Gibco公司；CCK-8試劑盒（批號GH802）購自東仁化學科技（上海）有限公司；白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子 ∝ （tumor necrosis factor- ∝ TNF-α 試劑盒（批號分別為CB10373-Hu、CB11762-Hu）均購自上海科艾博生物技術有限公司；重組人IL-17蛋白（純度 gt; 98% ，批號ab9567）購自英國Abcam公司；AnnexinV-FITC/PI調亡檢測試劑盒（批號A211-01）購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體（兔抗，批號10494-1-AP）購自武漢三鷹生物技術有限公司； β -肌動蛋白（ β -actin）抗體（批號AF7018）、IL-17受體A（IL-17receptorA，IL-17RA）抗體（批號DF3602）、p38絲裂原活化的蛋白激酶（p38mitogen-activated proteinkinase，p38MAPK）抗體（批號AF6456）、核因子 κB p65亞基（nuclear factor kappa-Bp65subunit，p65）抗體（批號AF5006）、磷酸化p38MAPK（phosphorylated p38 MAPK，p-p38 MAPK）抗體（批號AF4001）、磷酸化p65（phosphorylatedp65，p-p65）抗體（批號AF2006）、B細胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma2，Bcl-2）抗體（批號BF9103）、Bcl-2關聯X蛋白（Bcl-2associatedXprotein，Bax）抗體（批號AF0120）、切割型胱天蛋白酶3（cleaved-caspase3，cleaved-CASP3）抗體（批號AF7022）均購自美國Affinity Biosciences公司（以上一抗僅Bcl-2是鼠抗，其余均為兔抗）;逆轉錄試劑（批號K1622）購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司;IRDye680RD標記的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批號925-68071）IRDye800CW標記的山羊抗小鼠免疫球蛋白G二抗（批號925-32210）均購自美國LI-COR公司；PCR所用引物由生工生物工程（上海）股份有限公司設計、合成。

1.3 細胞

人A549肺癌細胞（批號FH0045）購自上海富衡生物科技有限公司。

2 方法

2.1 網絡藥理學分析

2.1.1參芪固本方活性成分及CRF靶點獲取

使用TCMSP數據庫（https：//tcmsp-e.com/），以口服生物利用度 ?30% 、類藥性 ?0.18 為條件，篩選得到參芪固本方的活性成分。通過TCMSP網站內置靶點預測功能獲取活性成分對應靶點，將整理得到的靶點經UniProt數據庫（https：//www.uniprot.org/）校準得到標準化的基因名，即為參芪固本方的藥物成分靶點。以“cancer-relatedfatigue”為關鍵詞檢索GeneCards數據庫（https：//www.genecards.org/）、OMIM數據庫（https：//www.omim.org/，得到CRF的相關靶點，剔除重復靶點，經UniProt數據庫校正，得到疾病靶點。通過R4.3.2軟件對藥物成分靶點與疾病靶點取交集，使用Cytoscape3.7.2軟件構建“藥物-成分-作用靶點\"網絡。

2.1.2 蛋白-蛋白相互作用網絡的構建

將交集靶點導人STRING數據庫（https：//string-db）org/），物種設置為\"Homosapiens”最低相互作用閾值設置0.7，構建蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interac-tion，PPI）網絡圖。將PPI網絡圖導人Cytoscape3.7.2軟件進行拓撲學分析，包括度值（degree）和相互作用評分（combinedscore），并以degree gt;9 為標準篩選核心靶點。

2.1.3生物功能富集分析

將交集靶點導人DAVID數據庫（https：//david.ncif-crf.gov/summary.jsp）進行基因本體（geneontology，GO）功能、京都基因和基因組數據（Kyotoencyclopediaofgenesand genomes，KEGG）通路富集分析。 Plt;0.01 表示差異有統計學意義。

2.2 細胞實驗

2.2.1 IL-17作用于A549細胞的最佳濃度、時間篩選

采用CCK-8法檢測。取A549細胞，接種于完全培養基，于 37°C，5% CO2條件下培養。取對數生長期細胞以 5×10³ 個/孔接種于96孔板中，培養 24h 后，將其分為對照組[加入完全培養基（不含IL-17） 100μL] 和給藥組[分別加入含不同質量濃度 IL-17（0，25，50，100，200 ng/mL ）的完全培養基 。同時，設置不含細胞、不含藥物的空白組。每組設置3個復孔。取各組細胞，分別培養 24、48h 后，于避光條件下加入CCK-8試劑10μL ；繼續培養 2h ，使用酶標儀于 450nm 波長處檢測各孔的吸光度 （A） 值，計算細胞活力：細胞活力 =（A_5：4÷5- A_??（?H））/（A_MASH-A_??（?H）） 。

2.2.2 參芪固本方干預劑量篩選

采用CCK-8法檢測。取對數生長期細胞以 5×10³ 個孔接種于96孔板中，培養 24h 后，將其分為IL-17干預組[加入含有 100ng/mL IL-17（按\"2.2.1\"項下結果設置）不含參芪固本方的完全培養基 100μL] 和參芪固本方組[分別加入含 100ng/mL IL-17及不同質量濃度參芪固本方 （0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00mg/mL） 的完全培養基 100μL] 。同時，設置不含細胞、不含藥物的空白組。每組設置3個復孔。培養 48h （按\"2.2.1\"項下結果設置）后，按“2.2.1\"項下方法檢測并計算細胞活力。

2.2.3 細胞遷移能力檢測

采用細胞劃痕實驗進行檢測。取對數生長期細胞以 2×10⁵ 個孔接種于6孔板中，培養24h后，使用無菌200μL 槍尖于單細胞層上垂直、均勻快速地劃各孔細胞的培養血底部，保持劃痕寬度一致。之后將其分為對照組、IL-17干預組和IL-17+參芪固本方低、高質量濃度組（根據\"2.2.2\"項下結果，參芪固本方低、高質量濃度分別為 1.0，1.5mg/mL ），每組設置3個復孔。于 0，48h 時觀察、拍照。使用ImageJ軟件測量劃痕寬度并計算細胞遷移率：細胞遷移率 （%）=（0h 初始面積一48h終點面積） /0h 初始面積 ×100% 。

2.2.4 細胞凋亡檢測

采用流式細胞術檢測。取對數生長期細胞以 2× 10⁵ 個/孔接種于6孔板中，培養 24h 后，按“2.2.3”項下方法分組、給藥。培養 48h 后，收集各組經不含乙二胺四乙酸胰酶消化的細胞，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗后，以300×g 離心 5min 。加入染色緩沖液 100μL 重懸細胞，加人AnnexinV-FITC染液和PI染色液各 5μL ，于避光、室溫下反應 10min ，使用流式細胞儀檢測細胞調亡情況。

2.2.5 細胞上清液中IL-6、TNF- σ_?α 水平檢測

采用ELISA法檢測。取對數生長期細胞以 2×10⁵ 個孔接種于6孔板中，培養 24h 后，按\"2.2.3\"項下方法分組、給藥。培養 48h 后，收集各組細胞的上清液，使用酶標儀檢測其IL-6、TNF- α_?∝ 水平。嚴格按照相應試劑盒說明書操作。

2.2.6 細胞中IL-17RA、IL-6、TNF- σ_?∝ mRNA表達檢測

采用實時熒光定量PCR法進行檢測。取對數生長期細胞以 2×10⁵ 個/孔接種于6孔板中，培養 24h 后，按“2.2.3\"項下方法分組、給藥。培養 48h 后，收集各組細胞，使用Trizol法提取總RNA。經檢測濃度、純度后，反轉錄為cDNA。以cDNA為模板進行PCR擴增。反應體系包括： 2×SYBR Green Master Mix 10μL ，正、反向引物各 0.4μL（10μmol/L） ，模版cDNA（ 100ng/μL）2μL 無核酸酶水 7.2μL 。擴增條件如下： 95^°C 預變性 30s ：95^°C 變性 5s，60^°C 退火34s，共循環40次。以GAPDH作為內參，采用 2^-ΔΔCt 法計算各目標基因mRNA的相對表達量，結果以對照組為參照進行歸一化處理。引物序列及產物長度見表1。

表1引物序列及產物長度

2.2.7 細胞中凋亡蛋白和IL-17信號通路關鍵蛋白表達檢測

采用Westernblot法檢測細胞凋亡核心調控蛋白（Bax、Bcl-2、cleaved-CASP3）和IL-17信號通路關鍵調控蛋白（IL-17RA、p38MAPK、p-p38 MAPK、p65、p-p65）的表達。取對數生長期細胞以 2×10⁵ 個/孔接種于6孔板中，培養24h后，按“2.2.3\"項下方法分組、給藥。培養48h 后，收集各組細胞，提取總蛋白，經含量測定、變性處理后進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離并轉移至聚偏氟乙烯膜上，以 5% 脫脂牛奶于室溫下封閉1h;洗膜后，加入相應一抗（IL-17RA、p38MAPK、p65、p-p65、Bax、Bcl-2、cleaved-CASP3的稀釋度均為1：1000，p-p38MAPK的稀釋度為 1：800，β? -actin、GAPDH的稀釋度均為 1：5 000 ），于 4^°C 孵育過夜；洗膜后，加入相應二抗（稀釋度為1：10000），于室溫下孵育1h；經曝光、成像后，使用ImageJ軟件進行分析，以自的蛋白與內參（ -actin或GAPDH）的灰度值比值作為目的蛋白的表達水平。

2.3 統計學分析

所有實驗獨立重復3次。采用SPSS26.0軟件進行數據統計分析，采用GraphPadPrism10.0軟件繪圖。滿足正態分布的計量資料以 表示，多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。檢驗水準α=0.05 。

3結果

3.1 網絡藥理學分析結果

3.1.1參芪固本方抗CRF的活性成分及靶點

初步檢索獲得黃芪活性成分17個、黨參活性成分17個、茯苓活性成分6個、白術活性成分4個、淫羊藿活性成分23個、女貞子活性成分9個、五味子活性成分8個，藥物作用靶點共238個；得到CRF相關靶點8387、529個，去重后獲得與CRF相關疾病靶點8792個；將藥物作用靶點與CRF相關疾病靶點取交集，獲得參芪固本方治療CRF的交集靶點209個。

3.1.2參芪固本方抗CRF的核心活性成分預測

“藥物-成分-靶點\"網絡中包括節點289個、邊1499條；通過分析degree值，篩選出排前5位的核心活性成分，分別為槲皮素、山柰酚、木犀草素、常春藤皂昔元、7-O-甲基-異微凸劍葉莎醇。

3.1.3 核心靶點及PPI網絡

PPI網絡中包括節點109個、邊2542條，獲得10個核心靶點，分別為腫瘤蛋白p53（tumorproteinp53，TP53）、絲氨酸/蘇氨酸激酶1（AKTserine/threoninekinase1，AKT1）、IL-6、IL-1β、表皮生長因子受體、TNF、原癌因子Jun、CASP3、原癌因子MYC、Bcl-2。

3.1.4生物功能富集分析

GO功能富集分析共得到568個條目 （Plt;0.01 ，其中生物學過程占411個條目，涉及信號轉導、基因表達的正調控、凋亡過程的負調控等；細胞組分占57個條目，涉及細胞質、細胞核、等離子膜等；分子功能占100個條目，涉及蛋白質結合、酶結合、蛋白質同分異構活性等。

KEGG通路富集分析共得到151條通路（ （Plt;0.01） ，主要包括IL-17信號通路、TNF信號通路、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信號通路（PI3K/Akt）、細胞衰老、p53信號通路等；其中， P 值最小且富集分數最高的為IL-17信號通路，富集靶點數最多的為PI3K/Akt信號通路。

網絡藥理學分析結果預測，參芪固本方通過抑制IL-17信號通路改善CRF相關腫瘤炎癥微環境。基于KEGG富集通路及PPI核心靶點（IL-6、TNF- ∝ 的關聯性，本研究采用IL-17誘導A549細胞構建CRF細胞模型，通過IL-17信號通路及其調控的下游促炎因子模擬腫瘤炎癥微環境。

3.2 細胞實驗驗證結果

3.2.1IL-17作用的最佳濃度、時間篩選與參芪固本方干預劑量篩選

干預24、48h后，與 0ng/mL IL-17比較，隨干預濃度升高，細胞活力逐漸增加 （Plt;0.05 ；與 100ng/mL IL-17干預 48h 比較， 200ng/mL IL-17時細胞活力顯著降低中 （Plt;0.05 ），因此選擇 100ng/mL IL-17作用 48h 為最佳實驗條件（圖1）。圖2結果顯示，參芪固本方在 1.00～ 1.50mg/mL 范圍時， A 值隨濃度升高顯著降低（ Plt; 0.05），且在 1.50mg/mL 達到抑制峰值；當濃度升至1.75mg/mL 時， A 值回升，抑制效應減弱。 1.00mg/mL 是首次出現抑制的濃度，反映藥物起效濃度； 1.50mg/mL 為抑制峰值濃度，反映藥物最佳效能。因此選定 1.00mg/mL （低質量濃度）和 1.50mg/mL （高質量濃度）作為后續實驗的干預濃度。

圖1不同濃度IL-17干預24、48h細胞活力比較

a：與 0ng/mL IL-17比較， Plt;0.05 ;b：與 100ng/mL IL-17比較， Plt; 0.05。

圖2不同濃度參芪固本方對IL-17誘導的A549細胞活力的影響 ）

a：與 0mg/mL 參芪固本方比較， Plt;0.05 ;b：與 1.50mg/mL 參芪固本方比較， Plt;0.05 。

3.2.2參芪固本方對IL-17誘導的A549細胞遷移、凋亡及凋亡相關蛋白的影響

與對照組比較，IL-17干預組細胞的遷移率、Bcl-2蛋白的表達均顯著升高或上調，凋亡率、Bax和cleaved-CASP3蛋白的表達、Bax/Bcl-2比值均顯著降低或下調（Plt;0.05） ；與IL-17干預組比較，IL-17+參芪固本方低、高質量濃度組細胞的遷移率、Bcl-2蛋白的表達均顯著降低或下調，凋亡率、Bax和cleaved-CASP3蛋白的表達、Bax/Bcl-2比值均顯著升高或上調（ （Plt;0.05） ；與IL-17+ 參芪固本方低質量濃度組比較，IL-17+參芪固本方高質量濃度組細胞的遷移率、cleaved-CASP3蛋白表達均顯著降低或下調，凋亡率顯著升高 （Plt;0.05 。結果見表2、圖 3～ 圖5。

表2各組細胞遷移、凋亡及凋亡相關蛋白比較 n=3， 0

a：與對照組比較， Plt;0.05：6 ：與IL-17干預組比較， Plt;0.05 ，c：與IL-17+參芪固本方低質量濃度組比較， Plt;0.05 。

3.2.3參芪固本方對IL-17誘導的A549細胞炎癥因子的影響

與空白組比較，IL-17干預組細胞上清液中IL-6、TNF- σ?α∝ 水平均顯著升高 （Plt;0.5） ；與IL-17干預組比較，IL-17+參芪固本方低、高質量濃度組細胞上清液中IL-6、TNF- σ?α∝ 水平均顯著降低（ Plt;0.5 ；與 IL-17+ 參芪固本方低質量濃度組比較，IL-17+參芪固本方高質量濃度組細胞上清液中IL-6、TNF- α_?∝ 水平均顯著降低 （Plt;0.5） 。結果見表3。

3.2.4參芪固本方對IL-17誘導的A549細胞IL-17RA、IL-6、TNF- σ?α∝ mRNA表達的影響

與對照組比較，IL-17干預組細胞中IL-17RA、IL-6、TNF- σ?α∝ mRNA的表達均顯著上調（ （Plt;0.05） ；與IL-17干預組比較，IL-17+參芪固本方低、高質量濃度組細胞中IL-17RA、IL-6mRNA的表達均顯著下調（ （Plt;0.05） ；與IL-17+參芪固本方低質量濃度組比較，IL-17+參芪固本方高質量濃度組細胞中IL-17RA、IL-6、TNF- σ?α∝ mRNA的表達均顯著下調（ ?lt;0.05 ）。結果見表3。

圖3細胞劃痕實驗顯微圖（ ×40 ））

圖4細胞凋亡流式細胞圖

圖5細胞凋亡相關蛋白電泳圖

A：對照組;B：IL-17干預組;C：IL-17+參芪固本方高質量濃度組；D：IL-17+參芪固本方低質量濃度組。

表3各組細胞炎癥因子以及IL-17RA、IL-6、TNF- α_αα_α mRNA表達的比較 ）

a：與對照組比較， Plt;0.05 ;b：與IL-17干預組比較， Plt;0.05 ，c：與參芪固本方低質量濃度組比較， Plt;0.05 。

3.2.5參芪固本方對IL-17誘導的A549細胞IL-17信號通路關鍵蛋白表達的影響

與對照組比較，IL-17干預組細胞中IL-17RA、p-p65的表達和 p?p65/p65 比值均顯著上調或升高，p-p38MAPK蛋白表達和p-p38MAPK/p38MAPK比值均顯著下調或降低（ ?Plt;0.05 ）;與IL-17干預組比較，IL-17+參芪固本方低、高質量濃度組細胞中IL-17RA、p-p65蛋白的表達和p-p65/p65比值均顯著下調或降低，p-p38MAPK蛋白的表達、 p-p38/p38 比值均顯著上調或升高（ Plt; 0.05）；與IL-17+參芪固本方低質量濃度組比較， IL-17+ 參芪固本方高質量濃度組細胞中IL-17RA、p-p65蛋白表達、 p?p65/p65 比值均顯著下調或降低，p-p38MAPK蛋白表達、p-p38MAPK/p38MAPK比值均顯著上調或升高 （Plt;0.05） 。結果見表4、圖6。

表4各組細胞IL-17信號通路關鍵蛋白表達的比較

a：與對照組比較， Plt;0.05 ；b：與IL-17干預組比較， Plt;0.05 ，c：與IL-17+參芪固本方低質量濃度組比較， Plt;0.05 。

圖6各組細胞中IL-17信號通路關鍵蛋白表達電泳圖

A：對照組；B：IL-17干預組;C：IL-17+參芪固本方高質量濃度組；）：IL-17+參芪固本方低質量濃度組。

4討論

慢性低度炎癥是CRF發展的核心病理機制，其特征是促炎因子（IL-6、TNF- σ?α∝ 、IL-17等）的持續激活，這些因子可通過影響大腦的神經-免疫系統及腫瘤微環境來加重疲勞癥狀。臨床證據表明，在接受輔助化療的惡性腫瘤患者中，血液循環中IL-6、TNF- σ?α∝ 水平的升高與疲勞程度加重顯著相關[]。在卵巢癌荷瘤小鼠體內，血液循環中IL-6、TNF- σ?α∝ 及IL-17水平顯著升高，并伴隨疲勞樣行為，提示炎癥在CRF中的核心作用[]。 76%～99% 的肺癌患者在治療期間會出現疲勞[12-13]，這一高發率凸顯了深入解析CRF潛在機制，尤其是慢性炎癥作用的迫切性。值得注意的是，在慢性炎癥反應中，IL-17可通過激活NF- κB 信號通路發揮調控作用[4]。該通路的持續活化進一步促進TNF- σ?α?α?α?α IL-1、IL-6等下游促炎因子的分泌，形成正反饋循環，共同加劇CRF癥狀。

CRF屬中醫“虛勞”范疇，國醫大師周岱翰教授認為，手術或放化療所導致的脾胃失調、氣血不足、久虛不復成勞是CRF的主要病因[715]。《素問·陰陽應像大論》云：“形不足者溫之以氣，精不足者補之以味”，該方以黨參、黃芪為君藥，健脾補中、益氣養血;淫羊藿、女貞子為臣藥，補腎強精生血;佐以白術、茯苓健脾除濕，既助黨參補脾胃之氣，又增強脾胃之運化，以助后天之源，又以白術苦燥之性以利濕健脾；五味子為使藥，載藥入脾胃；全方充分體現了健脾、益腎、補氣、生血的特點。

4.1參芪固本方藥物靶點分析

本研究共篩選出84個活性成分及209個交集靶點，其中槲皮素、山柰酚和木犀草素等為核心活性成分，TP53、AKT1、IL-6、TNF等為核心靶點，IL-17、TNF、PI3K/Akt信號通路為關鍵信號通路。研究指出，TP53是一種促發細胞凋亡的抑癌因子，可通過減少腫瘤細胞間接改善CRF[]。IL-17和TNF信號通路均為促炎通路[17-18]，可通過引發系統性炎癥和肌肉消耗從而促進CRF。槲皮素可通過抑制IL-17誘導的NF σ_?κB 核轉位提高骨骼肌氧化磷酸化效率，從而減輕與CRF相關的肌肉疲勞[19-20];山柰酚可通過抑制PI3K/Akt和MAPK信號通路誘導細胞凋亡并減輕腫瘤負荷[2]；木犀草素可通過靶向NF- ??κB 和MAPK信號通路減少CRF炎癥并促進腫瘤細胞凋亡[22]

4.2參芪固本方多靶點協同調控的分子網絡機制

中藥復方的核心優勢在于其多成分協同作用。本研究結果分析顯示，淫羊藿、女貞子的主要活性成分共同靶向于MAPK信號通路及cleaved-CASP3、Bax、Bcl-2等關鍵凋亡調控靶點，協同誘導腫瘤細胞凋亡，有助于減少腫瘤負荷，這可能是該方緩解CRF的潛在途徑之一；在抗炎層面，黃芪與黨參的活性成分可通過激活NF-κB 抑制蛋白 I_KBα 及抑制TNF- α_?α∝ 和IL-6等促炎因子的表達，阻斷NF- σ_κB 炎癥信號通路的過度激活，減少促炎因子的分泌。此抗炎效應與淫羊藿、女貞子介導的促凋亡作用在緩解CRF的病理進程中形成協同作用。除調控炎癥與免疫外，黃芪及黨參的活性成分還可作用于MAPK信號通路，促進線粒體生物合成與葡萄糖代謝；同時激活過氧化物酶體增殖物激活受體 ∝ 及其輔激活因子 lα ，改善線粒體脂肪酸氧化功能，糾正CRF相關的線粒體功能障礙與能量代謝紊亂。上述多層面的協同藥理作用，包括誘導腫瘤細胞凋亡、抑制慢性炎癥及改善能量代謝，構成了本方“補氣溫陽\"功效的現代藥理學基礎。網絡藥理分析還顯示，淫羊藿、女貞子的核心活性成分可靶向雌激素受體1、雄激素受體和鹽皮質激素受體等核受體，調控類固醇激素信號傳導。內分泌穩態失衡與CRF發生發展密切相關，參芪固本方通過調控激素信號改善下丘腦-垂體-性腺軸功能，糾正內分泌紊亂。該機制直接干預CRF情緒障礙的核心病理環節，從現代藥理學層面闡明本方“補腎滋陰溫陽\"調節內分泌功能、恢復“腎主志\"傳統功效的科學內涵。綜上，參芪固本方通過構建一個涉及腫瘤負荷減輕（凋亡誘導）、炎癥抑制、免疫增強、能量代謝改善及內分泌調節的多維度協同調控網絡，為改善CRF癥狀提供了堅實的分子基礎。

4.3參芪固本方調控IL-17信號通路的細胞實驗分析

細胞實驗結果表明，高質量濃度參芪固本方顯著抑制了炎癥因子IL-17RA、IL-6和TNF- ∝ mRNA表達水平，并降低NF- σ_κB 通路活化指標p-p65/p65比值，同時顯著抑制A549細胞遷移能力，與文獻研究一致，即抑制炎癥反應可有效緩解CRF。另外，低質量濃度參芪固本方則僅抑制IL-17RA和IL-6mRNA水平，提示復方中不同成分（如槲皮素、山柰酚）可能通過質量濃度依賴的協同作用增強抗炎效應。此外，參芪固本方干預顯著提高了細胞凋亡率，并上調了促凋亡蛋白Bax和cleaved-CASP3的表達水平，同時升高了Bax/Bcl2比值以及p38MAPK通路活化指標p-p38MAPK/p38MAPK比值。有趣的是，盡管傳統研究認為p38MAPK活化與炎癥相關[24，但在本研究特定微環境中，p38MAPK的激活可能通過觸發促凋亡信號誘導細胞凋亡，減輕腫瘤負荷，間接改善CRF。然而有文獻指出，p38MAPK的激活可促進骨骼肌疲勞發生，抑制該通路可增強肌肉耐力[25]。這種雙重作用提示，p38MAPK在CRF中的效應可能具有細胞類型特異性，即在腫瘤細胞中促進凋亡有益于疲乏緩解，而在肌肉細胞中需進一步研究其潛在的負面影響。

本研究的局限性包括：（1）CRF作為全身性綜合征，單一肺癌細胞模型難以全面模擬其“神經-免疫-代謝”網絡的交互特征；（2）p38MAPK激活在CRF中的生物學作用尚未完全明確，其在不同細胞類型中的功能差異需進一步驗證；（3）復方煎煮產物的化學成分及其轉化尚未被表征，可能影響藥效的全面評估。未來研究可通過建立腦-腫瘤類器官共培養模型、開展磷酸化蛋白質組學分析等系統解析參芪固本方的多維度作用機制。

綜上所述，參芪固本方可能通過調控IL-17信號通路、抑制炎癥因子表達、激活p38MAPK依賴的凋亡過程來改善CRF。

參考文獻

[1]BOWERJE.Cancer-related fatigue：mechanisms，risk factors，and treatments[J].NatRevClin Oncol，2014，11（1V）：uJI-UvJ

[2]FABI A，BHARGAVA R，FATIGONI S，et al. Cancerrelated fatigue：ESMO clinical practice guidelines for diagnosis and treatment[J]. Ann Oncol，2020，31（6） ：713-723.

[3]AL M M. Cancer-related fatigue：an overview[J].Br J Nurs，2021，30（4）：S36-S43.

[4]AGBEJULE O A，HART N H，EKBERG S，et al. Selfmanagement support for cancer-related fatigue： a systematic review[J]. Int JNurs Stud，2022，129：104206.

[5]KANG Y E，YOON JH，PARK N H，et al. Prevalence of cancer-related fatigue based on severity：a systematic review and meta-analysis[J]. Sci Rep，2023，13（1）：12815.

[6］林偉波，周岱翰.中藥破壁飲片治腸癌化療后造血抑制 臨床研究[J].新中醫，2017，49（8）：110-113.

[7］黃裕芳.參芪固本方破壁飲片對化療后骨髓抑制的臨床 與實驗研究[D].廣州：廣州中醫藥大學，2018.

[8]RU J，LI P，WANG J，et al. TCMSP： a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines[J].JCheminform，2014，6：13.

[9]BROWNSTEIN C G，TWOMEY R，TEMESI J，et al. Physiological and psychosocial correlates of cancerrelated fatigue[J].J Cancer Surviv，2022，16（6）：1339- 1354.

[10]SILVA E M，MARIANO V S，PASTREZPR A，et al. High systemic IL-6 is associated with worse prognosis in patients with non-small cell lung cancer[J]. PLoS One， 2017，12（7）：e0181125.

[11]COHEN M，LEVKOVICH I，KATZ R，et al. LoW physical activity，fatigue and depression in breast cancer survivors ：moderation by levels of IL-6 and IL-8[J]. Int JPsychophysiol，2020，158：96-102.

[12]姚利，吳燕，袁洋，等.肺癌化療患者癌因性疲乏變化軌 跡及其影響因素的縱向研究[J].中國臨床醫學，2022，29 （5）：795-802.

[13]BADE BC，FAIZ SA，HAD M，et al.Cancer-related fatigue in lung cancer：a research agenda：an official American Thoracic Society research statement[J].Am J Respir Crit Care Med，2023，207（5）：e6-e28.

[14]MIIOVANOVIC J，ARESNIJEVIC A，STOJANOVIC B， et al.Interleukin-17 in chronic inflammatory neurological diseases[J].Front Immunol，2020，11：947.

[15]王雄文，喬翠霞，張俊萍，等.參芪固本方破壁飲片與傳 統湯劑聯合鶴蟾片治療ⅢIB、IV期非小細胞肺癌的療效 及安全性研究[J].中醫腫瘤學雜志，2021，3（3）：18-23.

[16]VOSKARIDES K，GIANNOPOULOU N. The role of TP53in adaptation and evolution[J]. Cells，2023，12 （3）：512.

[17]SUBUDHII，KONIECZNY P，PRYSTUPA A，et al. Metabolic coordination between skin epithelium and type 17 immunity sustains chronic skin inflammation[J]. Immunity，2024，57（7） ：1665-1680.

[18]BERKHOUT L C，I'AMI MJ，KRUITHOF S，et al. Formation and clearance of TNF-TNF inhibitor complexes during TNF inhibitor treatment[J].Br JPharmacol，2024， 181（8）：1165-1181.

[19]YANG S Y，HU Y，ZHAO R，et al.Quercetin-loaded mesoporous nano-delivery system remodels osteoimmune microenvironment to regenerate alveolar bone in periodontitisvia the miR-21a-5p/PDCD4/NF- κB pathway[J].J Nanobiotechnol，2024，22（1） ：94.

[20]黃子祥，徐汪洋，劉彩霞，等.槲皮素通過抑制NF- σ_κB 通 路緩解IL-1β誘導的小鼠骶骼關節軟骨細胞損傷[J].中 藥材，2025，48（1）：212-216.

[21]ALMATROUDI A，ALLEMAILEM K S，ALWANIAN W M，et al. Effects and mechanisms of kaempferol in the management of cancers through modulation of inflammation and signal transduction pathways[J]. Int JMol Sci， 2023，24（10）：8630.

[22]CHE D N，SHIN JY， KANG H J，et al. Luteolin suppresses IL-31 production in IL-33-stimulated mast cells through MAPK and NF- ?κB signaling pathways[J]. Int Immunopharmacol，2020，83：106403.

[23]TSIMAFEYEU I，TISHOVA Y，ZUKOV R，et al.Testosterone for managing treatment-related fatigue in patients with metastatic renal cell carcinoma：a phase 2 randomized study FARETES[J].Am JClin Oncol，2021，44（4）： 137-142.

[24]YONG HY，KOH M S，MOON A. The p38 MAPK inhibitors for the treatment of inflammatory diseasesand cancer[J].Expert Opin Investig Drugs，2009，18（12）： 1893-1905.

[25]BENGAL E，AVIRAM S，HAYEK T. p38 MAPK in glucose metabolism of skeletal muscle：beneficial or harmful？ [J].Int JMol Sci，2020，21（18）：6480. （收稿日期：2025-03-17修回日期：2025-06-21）