HPLC法同時測定黃連膠囊中4種成分的含量

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】A 【文章編號】1007-8517（2025）11-0048-04

DOI： 10.3969/j . issn.1007-8517.2025.11. zgmzmjyyzz202511010

Simultaneous Determination of Four Componentsin Huanglian Capsules by HPLC

ZHANG Huowang' ZHANG Dongxia1* LAI Lihuan2 1.Heyuan Institute for Drug Control，Heyuan 517OOO，China; 2.Medical CollegeofJiayingUniversity，Meizhou 514OoO，China

Abstract：Objective To establishan HPLC method for simultaneous determinationofberberine hydrochloride，epiberberine， coptisine hydrochloride and palmatine hydrochloride in Huanglian Capsules.Methods CAPCELL PAK C₁₈ chromatographic column （ 250mm×4.6mm ， 5μm ）was used. The mobile phase was acetonitrile -0.05mol/L potassium dihydrogen phosphate solution （45：55），isocratic elution，flow rate 1.0mL/min ，detection wavelength 345nm ，column temperature 30^qC ，injection volume：10 （20 μL .ResultsBerberinehydrochloride，epiberberine hydrohloride，coptisinehydrochlorideandpalmatinehydrochloridehadgoodlinear relationship with the peak area in the linear ranges of 3.9041-23.4480μg/mL ，0.3644 -2.1888 μg/mL， 0.6711-4.0304μg/ mLand 0.8502-5.1064μg/mL ，respectively. The average recoveries were 99.61% 98.39% ，98.84 % ， 99.04% ，and the RSDs were 0.19 % ，1.21 % ，0.78 % ， 0.53% （ n=6 ），respectively. Conclusion The method is efficient，accurate and sensitive， andcanbeusedforthesimultaneousdetermiationofberberinehydrochloride，epiberberine，coptisinehydrochlorideandpalmatine hydrochloride inHuanglian Capsules，which providesascientific basis forbetercontrolofthequalityofHuanglian Capsules.

Keywords：Huanglian Capsules；HPLC；ContentDetermination

黃連膠囊是由黃連制成的單方制劑，具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效，用于濕熱蘊毒所致的痢疾、黃疸，癥見發(fā)熱、黃疸、吐瀉、尿黃如茶、牙齦腫痛或大便膿血。黃連的化學成分是生物堿，包括鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀等4 種成分[1]，鹽酸小檗堿主要對痢疾桿菌、大腸桿菌有抑制作用，臨床主要用于腸道感染及菌痢等[2-5]；表小檗堿具有抗病毒，抗炎的作用；鹽酸黃連堿有抗卡爾酵母菌的活性；鹽酸巴馬汀具有抗感染藥理作用。因此，黃連的4種成分，在適應(yīng)癥具有相同功能，均可作為其質(zhì)量的反映指標。金杏芳7采用高效液相色譜法測定復方黃連膠囊中鹽酸小檗堿的含量，僅以小檗堿為指標成分?，F(xiàn)行標準中僅對鹽酸小檗堿成分進行了定量研究，難以全面反映黃連膠囊的整體質(zhì)量，關(guān)于黃連膠囊4種成分的含量測定卻鮮有報道。本文建立同時測定黃連膠囊中鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀4種成分含量的HPLC法，同時為進一步完善其質(zhì)量標準提供一定的科學依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器島津 LC－20AT 高效液相色譜儀（ShimadzuCorporation），CPA225D型電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司），DTC-15F型超聲波清洗機（湖北鼎泰生化科技設(shè)備制造有限公司），UPW-20N型超純水器（北京歷元電子儀器有限公司）。

1.2試藥鹽酸小檗堿（批號為110713-202316，含量以 91.0% 計）、鹽酸黃連堿（批號為112026-201802，含量以 94.0% 計）、鹽酸巴馬?。ㄅ枮?10732-201913，含量以 85.7% 計）以上均購自中國食品藥品檢定研究院；表小檗堿（批號為14534，含量以 91.2% 計）購自上海詩丹德標準技術(shù)服務(wù)有限公司。乙腈（色譜純，霍尼韋爾貿(mào)易有限公司），甲醇（分析純，廣州化學試劑廠），磷酸二氫鉀（分析純，國藥集團化學試劑有限公司），磷酸（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司），水為超純水；黃連膠囊（湖北香連藥業(yè)有限責任公司，批號分別為20220701、20230601、20240301）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：CAPCELL PAK C₁₈ 柱L 250mm×4.6mm ， 5μm ）；流動相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（45：55）（每 100mL 中加入 0.4g 十二烷基硫酸鈉，再以磷酸調(diào)節(jié) pH 值到4.0）；等度洗脫；檢測波長： 345nm ；柱溫：30C ；進樣量： 10μL ；流速： 1.0mL/min 。

2.2 溶液制備

2.2.1對照品及混合對照品溶液制備精密稱取鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀對照品 9.77mg，9.12mg 、 9.16mg 、 9.82mg 分別置于 20mL 量瓶，加甲醇定容至刻度，制成儲備液。精密量取上述各成分儲備液 3mL ！ 0.3mL 、0.55mL 、 0.65mL ，置 25mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成每 mL 含鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀分別為 58.62μg ！ 5.47μg 、10.08μg ！ 12.77μg 的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備取本品內(nèi)容物 _0.2g ，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1：100）的混合溶液 50mL ，密塞，稱定重量，超聲處理（頻率 40kHz ，功率300W） 30min ，放冷，再次稱定重量，重量如有減失則用甲醇補足，搖勻后濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液 2mL 置 10mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（ 0.45μm ）濾過，同取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3方法學考察

2.3.1系統(tǒng)適用性試驗分別取“2.2.1”項下混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同的保留時間處有相應(yīng)吸收峰，陰性對照無干擾。如圖1所示。鹽酸小檗堿峰理論板數(shù)大于10000，分離度均大于2。

2.3.2線性關(guān)系考察精密量取“2.2.1”項下混合對照品溶液 0.666mL 、 1mL 、 1.333mL 、2mL ！ 4mL ，分別置 10mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成含鹽酸小檗堿 3.9041μg/mL 、5.8620μg/mL 、7.8140 μg/mL 、11.7240 （2 μg/mL 、23.4480μg/mL ，表小檗堿 0.3644μg/mL 、0.5472μg/mL 、0.7294 μg/mL 、 1.0944μg/mL 、2.1888μg/mL ，鹽酸黃連堿0.6711 μg/mL 、 1.0076μg/mL 、1.3431μg/mL ！ 2.0152μg/mL ！ 4.0304μg/mL ，鹽酸巴馬汀 0.8502μg/mL 、 1.2766μg/mL 、 1.7017μg/mL 2.5532μg/mL 、 5.1064μg/mL 的混合標準溶液，進樣體積為 10μL ，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以峰面積積分值為縱坐標 y ，濃度為橫坐標 x 繪制標準曲線，得4種成分的回歸方程及線性范圍。見表1。

2.3.3精密度試驗精密吸取“2.2.1”項下混合對照品溶液 10μL ，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果得鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀峰面積的RSD分別為 0.26% 、 1.39% 、1. 24% 、 1.40% （ n=6 ），表明儀器精密度良好。2.3.4重復性試驗取同一批（批號為20220701）黃連膠囊樣品適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，平行測定6份，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算含量。結(jié)果鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀平均含量的RSD分別為 0.59% 、 1.56% 、1. 60% 、 1.18% （ n=6 ），表明方法重復性良好。2.3.5穩(wěn)定性試驗取同一批（批號為20220701）供試品溶液適量，室溫下分別放置 ^0h 1、2h.4h 8h 、 ^12h 后，各進樣 10μL ，記錄峰面積。結(jié)果得鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀放置不同時間后峰面積的RSD分別為 0.46% 10.80% 、 1.60% 、 0.83% （ n=5 ），表明供試品溶液在室溫下 ^12h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6加樣回收率試驗精密稱取已知含量的同一批供試品6份，分別加入一定量的4種對照品溶液，按上述“2.2.2”項方法處理測定，計算回收率．結(jié)果得鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀的回收率分別 99.61% 、 98.39% ！98.84% 、 99.04% ，RSD分別為 0.19% 、 1.21% ！0.78% 、 0.53% 。見表2。

2.4含量測定取3批黃連膠囊，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，測定4種成分的含量。結(jié)果見表3。

3討論

3.1流動相的選擇通過查閱文獻[9-1]，在實驗中分別考察了乙腈 -0.1% 磷酸溶液，乙腈-含0.1% 三乙胺和 0.1% 甲酸的水溶液，乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液等流動相系統(tǒng)及多個比例，經(jīng)過反復比較，采用乙腈 -0.05mol/L 磷酸二氫鉀溶液（45：55）進行洗脫，黃連膠囊所含4種成分的色譜峰分離效果好，峰形對稱而尖銳，理論板數(shù)均達到10000以上，因此選用了乙晴-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液為本實驗的流動相。3.2檢測波長選擇采用二極管陣列檢測器，在190～400nm 波長范圍內(nèi)對對照品溶液進行掃描，發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀均在 345nm 波長處有最大吸收，故確定測定波長為 345nm 。3.3提取方法的考察提取溶劑分別考察了甲醇、鹽酸-甲醇（ 1：100 ），結(jié)果顯示以鹽酸－甲醇（1：100）的混合溶液為溶劑時，由于生物堿與鹽酸反應(yīng)形成鹽酸鹽，使得生物堿鹽酸鹽具有較高的溶解度，提取所得含量較高。采用了不同的超聲時間（ 30min ！ 45min 和 60min ）考察各組分提取量的變化，發(fā)現(xiàn) 30min 內(nèi)各成分提取量隨提取時間的增加而增加， 30min 后無明顯變化。故確定以鹽酸-甲醇（1：100）溶液進行超聲提取，提取時間為 30min 。

綜上，本研究建立的方法操作簡單，重現(xiàn)性好，專屬性強，對于提高黃連膠囊的質(zhì)量標準有積極意義。

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