藏藥“隆秀”軟膏的質量標準研究

【中圖分類號】R917 【文獻標志碼】A 【文章編號】1007－8517（2025）10-0069-06

DOI： 10.3969/j . issn.1007-8517.2025.10. zgmzmjyyzz202510013

StudyonQualityStandardforZangMedicineLongxiuOintment

LI Maojia1，2 DU Lianping1.2*Guanque Duojie3KA Zhejie1，2 MA Zhiliang1，2 1. Qinghai Laboratory of Zang Medicine，Xining 810003，China; 2. State Key Laboratory of Zang Medicine Xining 81OoO3，China; 3．Hainan Zang Autonomous Prefecture Zang Hospital，Hainan 813OOO，China

Abstract：Objective To establish thequalitystandard for Zang medicine Longxiu Ointment.Method Thecomponents of piperine andeugenolwereidentifiedbythin-layerchromatograghy（TLC）．Thecontentofpiperinewasdeterminedbyhighperformaceliquid chromatography（HPLC）.Results TheTLCchromatographic spots wereclearandnegativewithoutinterference.Thelinearrelationship of piperine was good in the range of 10.501μg/mL to 210.014μg/mL ，and the recovery rate was 101.97% （ RSD=2.79% ）. Conclusion Themethodcan efectivelyremove matrix interference，andtheexperimentalresultsareacurateandreliable.

Keywords：Longxiu Ointment；Piperine；Eugenol

“隆秀”是藏醫的一種治療“隆”性疾病的涂擦療法，隆秀軟膏是以療法命名的藥方，此方出自藏醫著作《臨床札記精粹》1]，由胡椒、丁香、干姜、肉豆蔻、沉香、白檀香、紫檀、木香等11味藥組成。各大藏醫院外治科主要以涂擦療法將隆秀軟膏用于痛風、濕痹、黃水病等引起的關節腫痛的治療，具有消腫、止痛功效。在藏醫中痛風、風濕性關節炎、濕痹、白色黃水病等多由飲食起居不當引起“培根隆”偏盛所致。而“隆”是人體固有“三因素”（隆、赤巴、培根）中的功能體之一，體內的助推功能體，遇“培根”則助力“培根”使之偏盛，從而使“培根”的寒性升高，引發寒性疾病[2-3]。因此，此方配伍了降“培根”的胡椒、丁香、干姜等熱性藥材，還配伍了壓制“隆”的沉香、肉豆蔻、木香等藥材，且胡椒治療寒性培根病，丁香主治培根隆病[4-5]，均有溫中散寒之功效[6。胡椒中的胡椒堿具有消炎、止痛功效，可治療風濕性關節炎、跌打損傷等[7-8]。丁香中的丁香酚具有抑菌、抗炎、鎮痛等藥理活性[9-10]。鑒于此，本實驗將此方中能抑制“培根隆”偏盛的，具有消炎、止痛功效的胡椒和丁香作為核心藥物，明確此方中胡椒堿、丁香酚為指標成分，建立隆秀軟膏的定性、定量質量控制方法，填補藏藥隆秀軟膏質量標準空白。為藏藥隆秀軟膏質量標準制定提供數據支撐，為提高藏醫藥外用制劑的整體質量評價提供參考依據。

1實驗材料

高效液相色譜儀［型號：LC-2030C，島津儀器（蘇州）有限公司]，電子分析天平［型號：AP225W，島津儀器（蘇州）有限公司]，超純水系統（型號：Comfort1，德國賽多利斯公司），全自動點樣儀（型號：ATS4，CAMAG），超聲波清洗器（型號：2700TH/HCS951，上海安譜實驗科技股份有限公司），恒溫水浴鍋（型號：HHS-21-6，上海博迅醫療生物儀器股份有限公司），電熱恒溫鼓風干燥箱（型號：LAS-9023A，上海精宏實驗設備有限公司），硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司）。

胡椒堿（批號：RDD－H00111802014，含量以98.0% 計），丁香酚（批號：RDD-H00111802014，含量以 98.0% 計）均購自成都瑞芬思德丹生物科技有限公司。胡椒、丁香、干姜、沉香、白檀香、降香、肉豆蔻、寒水石（炒）、肉桂、石榴子、紅花、訶子等均購自青海九康中藥飲片有限公司。“隆秀”軟膏由青海省海南州藏醫院制劑科提供（批號：2023072601、2023072602、2023072603）。甲醇為色譜純（美國Tedia）；水為娃哈哈純凈水；無水乙醇等其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 胡椒堿取本品 2.5g ，加無水乙醇50mL，加熱回流 60min ，稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取上清液10mL，置 25mL 量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。根據制備工藝及上述方法，制得缺胡椒陰性對照溶液。另取胡椒堿，加無水乙醇制成每 1mL 含 4mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）[4]試驗，吸取上述溶液各 2μL ，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10% 硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰，分別置 365nm 紫外光燈下檢視。結果供試品在與對照如圖2所示。

2.1.2 丁香酚 取本品 20g ，加乙醇 25mL ，超聲處理（功率 300W ，頻率 40kHz ， 25°C ）30min ，濾過，取濾液作為供試品溶液。根據制備工藝及上述方法，制得缺丁香陰性對照溶液。另取丁香酚，加乙醇制成每 1mL 含 25μL 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）4試驗，吸取供試品溶液 5μL ，對照品溶液 1μL ，陰性樣品溶液 5μL ，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 5% 香草醛硫酸溶液，在 105^°C 下加熱至斑點顯色清晰。結果供試品在與對照品色譜對應處，可見相同顏色的斑點，陰性無干擾，如圖3所示。

圖2胡椒薄層色譜圖（紫外燈 365nm ）

A：胡椒堿對照品；B：陰性樣品；C：2023072601；D：2023072602；E：2023072603

A：丁香酚；B：陰性樣品；C：2023072601；D：2023072602；E：2023072603

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件BDS HYpersilTM C₁₈ （ 4.6mm ×250mm ， 5μm ）；流動相為甲醇：水（ 65：35 ，梯度洗脫（ 0～20min ， 68% A; 20～25min ， 68% ～100% A； 25～26min ， 100%～68% A； 26～30 min ， 68% A）；體積流量 0.8mL/min ；柱溫30C ；進樣量 10μL ；胡椒堿檢測波長為 343nm 。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液精密稱定胡椒堿 1.118mg 于50mL 容量瓶中，加入甲醇制成對照品母液，精密量取母液 1mL 于 20mL 容量瓶，作為對照品溶液

2.2.2.2供試品溶液制備取隆秀軟膏劑 2.5g 精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇50mL ，密塞，稱定質量，加熱回流 60min ，再稱定質量，無水乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取上清液 10mL ，置 25mL 量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.2.3 陰性對照溶液按隆秀軟膏的處方比例和制備工藝，按“2.2.2.2”項下方法制得缺胡椒陰性對照溶液。

2.2.3 方法學考察

2.2.3.1專屬性考察分別精密吸取“2.2.2”項下對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL ，進樣分析，HPLC色譜圖如圖4所示。由圖可知，供試品溶液在與對照品相應保留時間處出現胡椒堿色譜峰，而缺胡椒陰性對照溶液未見相應色譜峰，表明對胡椒堿成分的測定未產生干擾。

2.2.3.2線性關系考察精密稱定胡椒堿2.143mg，置 10mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成每 1mL 含胡椒堿 210.014μg 的線性對照品貯備液。精密吸取對照品貯備液 2mL ，置 5mL 量瓶中，加甲醇定容成 84.0056μg/mL 的對照品溶液 ① ；精密吸取對照品貯備液 3mL ，置 10mL 量瓶中，加甲醇定容成 63.0042μg/mL 的對照品溶液② ；精密吸取對照品貯備液 1mL ，置 5mL 量瓶中，加甲醇定容成 42.0028μg/mL 的對照品溶液 ③ ；精密吸取對照品貯備液 1mL ，置 20mL 量瓶中，加甲醇定容成 10.507μg/mL 的對照品溶液 ④ ，即得到線性濃度對照品溶液。按“2.2.1”項下條件進樣分析，記錄色譜峰面積。以峰面積為縱坐標 （y） ，對照品濃度為橫坐標 （x） ，見表1，標準曲線，如圖5。結果表明濃度為 10.501～210.014μg/mL 的范圍內胡椒堿濃度與峰面積線性關系良好。

2.2.3.3精密度試驗精密吸取上述專屬性考察的供試品溶液，按照“2.2.1”項下條件重復進樣6次，記錄峰面積，計算峰面積RSD值。結果顯示，同一份供試品溶液連續進6針，胡椒堿峰面積RSD值為 0.43% ，RSD值小于 3.0% ，說明儀器精密度良好。結果見表2。

2.2.3.4穩定性試驗稱取同一批隆秀軟膏制劑（批號：2023072601） 2.5010g ，精密稱定，按照“2.2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件，分別于 0h 、 ^2h ） 、8h、 ^12h 、 24h 進樣分析，結果胡椒堿峰面積RSD為 0.36% ，表明供試品溶液在 24h 內穩定。結果見表3。

2.2.3.5重復性試驗稱取同一批隆秀軟膏（批號：2023072601）約 2.5g ，精密稱定，平行稱定6份，分別按“2.2.2.2”項下方法制備供試品溶液6份。按“2.2.1”項下色譜條件進樣分析。結果胡椒堿含量RSD值均小于 3.0% （見表4），表明該方法的重復性良好。

2.2.3.6 加樣回收率試驗取隆秀膏（批號：2023072601，胡椒堿含量： 1.015mg/g ）約1.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，平行3組，每組3份，分別加入加樣回收溶液 10mL ！ 20mL 和30mL，再分別加入 40mL 、 30mL 和 20mL 的無水乙醇，稱定重量，加熱回流 60min ，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取上清液 10mL ，置 25mL 量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。按“2.2.1”項下色譜條件進樣分析，測定供試品溶液中胡椒堿含量，計算加樣回收率，結果見表5。

2.2.3.7樣品含量測定精密稱取隆秀軟膏制劑3批（批號分別為2023072601，2023072602，2023072603），每份 2.5g ，按“2.2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣分析，見表6。三批樣品含量結果為 1.003mg/g ～1.020mg/g ，平均值為 1.012mg/g 。擬規定本品含胡椒堿（ C₁₇H₁₉NO₃ ）不得低于 0.71mg/g 。

3討論

在薄層鑒別中丁香酚用甲苯溶劑展開，效果略差，拖尾，經多次試驗，其在噴完顯色劑后，應立即在 105^°C 下進行烘烤，要注意烘烤薄層板時間不宜過長，否則斑點會模糊，不易辨認。含量測定中胡椒堿的甲醇溶液經PDA全波段掃描發現，該成分的紫外最大吸收波長為 343nm ，確定343nm為胡椒堿的檢測波長。流動相體系考察了甲醇-水、甲醇 -0.001% 磷酸水、乙腈－水的色譜條件，經對比得出，流動相用甲醇-水溶液加酸或洗脫能力較強的乙腈-水溶液時，胡椒堿成分出峰時間較短，易與溶劑峰混淆；流動相用甲醇-水體系時，所需對照品峰從峰面積、峰形、出峰時間等都優于其他兩個體系。

本研究在前期試驗中發現，軟膏制劑前處理過程中常出現藥品基質過硬或不易軟化等問題，這使得樣品不易溶解或溶解濃度較低，從而影響軟膏藥品質量標準的準確測定。因此，優化制劑工藝，確保軟膏基質的黏稠度、粒度適中，是后續外用制劑質控研究的重要前提。此外，無論是外用還是內服制劑，選擇合適的指標成分對質量標準評價是至關重要的，它不僅應具備藥品的整體有效性、安全性，還應體現特有性，但是中藥及民族藥多數為多味藥材組成的復方制劑，僅從某個藥的單一成分很難體現復方制劑的功效，從而影響整體質量評價。劉昌孝院士及其團隊提出的“質量標志物（Q－marker）”新概念[11-12]，為我們提供了寶貴的指導，這一理論適用于多成分、多靶點協同作用的中藥及民族藥的質量標準建立，其強調了在制定質量標準時，應注重中藥君臣佐使配伍理論，組成的方劑應遵循君藥首選原則，兼顧君臣藥物的復方機制，選定出可用于定性、定量的結構成分明確的質量標志物來建立一系列質量標準。藏醫藥可借鑒此經驗，立足藏醫配伍理論結合自身特點，建立基于“質量標志物”的具有有效性、安全性的，且能夠反應藥品整體質量的藏藥質量標準體系，為完善藏藥質量研究、評價和控制提供新方向。

4結論

本研究通過采用薄層鑒別和高效液相色譜方法，建立了藏藥隆秀軟膏的質量控制方法，該定性、定量方法簡便、可靠、專屬性強，可為該藥的質量控制方法提供依據。但藏藥“隆秀”軟膏的膏體基質較硬，后期有待優化，其黏稠度、粒度、裝量等法定檢測項在本次實驗中需進一步完善。

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