基于藥效及正交設計優選金喉顆粒的提取工藝

【中圖分類號】R284.2 【文獻標志碼】A 【文章編號】1007－8517（2025）11－0060-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2025.11. zgmzmjyyzz202511013

Optimization of Extraction Process of Jinhou Granules Based on Pharmacolodynamics and Orthogonal Design

Honghui JIANG Tao* ZENG Chen SU RuihuiCHEN LisiCHEN Xiaojian PENG HongyingWANG Chuany Guangzhou Baiyunshan Jingxiutang Pharmaceutical Company Limited，Guangzhou 51O13O，China

Abstract：Objective Tooptimize theoptimalextraction process ofJinhou granules（JHG）．Methods Basedonthescreeningresultsofpharmacodynamicexperiments，anorthogonalexperimentwasdopted，withtecomprehensivesoreofangiferintraseate anddrycreamieldasevaluationindicators，ndthefactorsofwateradition，extractiontime，ndextractionfrequencyaseaation factors，tooptiizeteextractionprocessofJinhougraulesandonductprocessvalidatioResultsTeanti-amatoryctiityf thewaterextractionprocessofJinhougranulesissuperiortothatoflcoholextractionandwaterextractionandalcoholprcipiation processes.Theoptialextractionprocessistoad10timestheamountof waterandrefuxtwice，achtimefor1.5hour.Thevalidation test results showed that the average transfer rate of mangiferin was 72.30% （ RSD=2.0%，n=3， ，and the dry cream yield was （204 19.20% （RSD=3.5%， n=3 ）.Conclusion The optimized extraction processfor Jinhou granules is stable and feasible with good repeatability，which can provide experimental reference for subsequent production process research.

KeyWords：Jinhou Granules；Orthogonal Design；Extraction Process；Anti-inflammatory effct；Mangiferin

金喉顆粒處方源于中醫藥大學趙思競教授臨床經驗方，方中由小金牛草和崗梅兩味中藥材組成，該品種是由的獨家品種金喉散經工藝和劑型改革而來。原劑型金喉散收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》中成藥制劑第十三冊[1]，具有清熱解毒、生津化痰、活血消腫止痛的功效，適用于聲音嘶啞、急慢性咽喉炎及喉炎引起的聲帶出血、聲帶水腫、喉痛等癥狀。由于原散劑藥味苦，臨床順應性差，引濕性強，生產操作可控性及產品質量穩定性差，儲運困難，制約了產品進一步的臨床推廣和應用。鑒于以上原因，需對原金喉散的工藝和劑型進行改進，開發質量穩定、口感好、方便患者服用的金喉顆粒。金喉顆粒方中主藥小金牛草具有散瘀止血、化痰止咳、解毒消腫的功效，其主要活性成分為芒果苷[2-3]。芒果苷具有抗炎抑菌、解熱鎮痛、平喘止咳祛痰等藥理作用[4-7]，這與金喉顆粒清熱解毒、生津化痰、活血消腫止痛的功效密切相關。因此，本文在藥效學試驗篩選結果基礎上，以芒果苷轉移率和干膏得率為評價指標，采用藥效學試驗與正交設計相結合的研究手段，優選金喉顆粒的提取工藝，為將其今后開發成中藥改良型新藥提供試驗依據。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent1260型液相色譜儀（美國Agi-lent公司）；XA105型、ME204T型電子分析天平（瑞士梅特勒－托利多公司）；DHG-9246A型電熱鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；10mL注射器（浙江歐健醫用器材有限公司）；自制足腫測量儀； 8mm 打孔器。

1.2試藥小金牛草（批號：150101）購自清平中藥材市場，經中國科學院華南植物園葉華谷研究員鑒定；芒果苷對照品（批號：111607-201503，純度： 98.4% ，中國食品藥品檢定研究院）；復方草珊瑚含片（批號：12110021，江中藥業股份有限公司）；二甲苯（批號：20120402－2，化學試劑廠）；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

1.3試驗動物KM小鼠，雌雄各半，SPF級，體重（ 20±2 ） g ，合格證號：SCXK（粵）2008-0020；SD雄性大鼠，SPF級，體重（ 200±20 ） g ，合格證號：SCXK（粵） 2013-0020 。購于中醫藥大學實驗動物中心。

2方法與結果

2.1藥效學試驗篩選金喉顆粒提取工藝

2.1.1不同提取工藝樣品制備及劑量設置JHG水提物制備采用水提工藝，即稱取藥材共 400g ，加10倍量水提取2次，每次 ^2h ，濃縮干燥即得（ 1g 干膏粉相當于原生藥 5.21g ）；JHG醇提物制備采用加10倍量 60% 乙醇提取2次，每次 回收乙醇干燥即得（ 干膏粉相當于原生藥7.25g）；JHG水提醇沉物制備在水提工藝基礎上進行60% 醇沉取上清即得（ 1g 干膏粉相當于原生藥8.70g? 。各提取工藝樣品制備方法如圖1所示。

根據原劑型金喉散臨床日服用劑量 4g 折算JHG水提物設置劑量為4341mg/人/天，按照 60kg 體重計算為 72.35mg/kg/d ，以人臨床使用量的20倍計算，動物給藥劑量為 1.447g/kg/d ；折算JHG醇提物設置劑量為 3618mg 人天，同法計算動物給藥劑量為 1.206g/kg/d ；折算JHG水提醇沉物設置劑量為2600mg/ 人天，同法計算動物給藥劑量為0.866g/kg/d 。陽性對照藥復方草珊瑚含片按臨床使用量的20倍計算，動物給藥劑量為 1.760g/kg/d 。2.1.2不同提取工藝樣品對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響取SPF級KM小鼠，雌雄各半，隨機分為模型組、復方草珊瑚組、不同提取工藝樣品給藥組，共5組，每組10只。動物每天按設置劑量灌胃給藥1次，連續5d，模型組給予等量蒸餾水。末次給藥后 30min ，用移液槍吸取 0.05mL 二甲苯均勻滴于小鼠右耳前、后面，左耳作為對照。 ^2h 后將小鼠頸椎脫白致死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑 8mm 打孔器在左、右耳同一部位沖下圓耳片，稱重。以左右耳片重量之差為腫脹度計算抑制率，比較組間差異顯著性，抑制率 Σ=Σ （模型組腫脹度-給藥組腫脹度）/模型組腫脹度，見表1。結果表明，與模型組相比，JHG水提物可顯著降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度（ Plt;0.05 ），且藥效優于醇提、水提醇沉工藝樣品。

2.1.3不同提取工藝樣品對大鼠蛋清足腫脹的影響取SD雄性大鼠，隨機分為模型組、復方草珊瑚組、不同提取工藝樣品給藥組，共5組，每組10只。動物每天按設置劑量灌胃給藥1次，連續5d，模型組給予等量蒸餾水。末次給藥前按容積測量法測定每鼠右后肢正常足跖容積。末次給藥后 ¹h ，每只大鼠右后肢足跖皮下注射 10% 新鮮蛋清 0.1mL 。測量注射雞蛋清后 0.5h ！ ¹h ！ ^2h 、4h、6h的足容積，以致炎前后足容積差值為足腫脹度，比較各給藥組與對照組的足腫脹度，見表2。結果表明，致炎 1h.2h.4h.6h 后，與模型組相比，JHG水提物可顯著降低大鼠足跖腫脹體積（ Plt;0.05 或 Plt;0.01 ），水提物組相對于醇提物、水提醇沉物組可快速降低大鼠足跖腫脹體積，且藥效更優。

（x±s， n=10！

基于以上藥效學試驗篩選結果，金喉顆粒水提工藝的抗炎活性優于醇提、水提醇沉工藝，最終選擇水提工藝進行優化研究。

2.2芒果苷含量的測定[8]

2.2.1 色譜條件Phenomenex Synergi Fusion -RP80A色譜柱（ 250mm×4.6mm ， 4μm ）；流動相：乙腈 -0.1% 磷酸溶液（ 13：87 ）；檢測波長：258nm ；流速： 1.0mL/min ；柱溫： 25°C ；進樣量： 5μL 。

2.2.2對照品溶液制備及標準曲線繪制取芒果昔對照品約 10mg ，精密稱定，置 25mL 容量瓶中，加 60% 乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取對照品溶液 0.5mL 、 1.0mL 、2.0mL 、 3.0mL 、 5.0mL 、 7.0mL 、 10.0mL 置 20mL 容量瓶中，加 60% 乙醇溶解并稀釋至刻度；按“2.2.1”項下色譜條件測定，以峰面積Y為縱坐標，濃度X（ n=7 ）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為 Y=22.051X-4.925 8 ， r=0.9999 。結果表明，芒果苷在濃度 10.60～212.00μg/mL 范圍內呈良好線性關系。

2.2.3供試品溶液制備取干膏粉末約 0.3g ，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 60% 乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率 360W 頻率 40kHz ） 45min ，放冷，再稱定重量，用60% 乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4陰性對照溶液制備按處方和提取工藝制備缺小金牛草陰性樣品，再按“2.2.3”項下方法制備陰性對照溶液，即得。

2.2.5專屬性試驗分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各 5μL ，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果顯示，在供試品溶液與對照品溶液色譜相應的位置上有相同的吸收峰，且陰性對照溶液無干擾，提示該測定條件具有較好的專屬性，結果如圖2所示。

2.2.6加樣回收試驗按稱取量減半稱取已知含量供試品6份，分別精密加人芒果昔對照品溶液，加入量與供試品中芒果苷含量約為 1：1 ，按“2.2.1”項下方法測定，計算芒果苷平均回收率為 103.08% ， RSD=0.80% （ n=6 ），結果表明本法回收率良好。

2.2.7樣品含量測定精密稱取金喉顆粒干膏樣品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，記錄色譜圖，每份樣品重復進樣兩次，計算芒果昔含量平均值。

2.3 水提工藝優選

2.3.1干膏得率測定 按處方稱取藥材共 100g 進行提取，量取 15mL 提取液置蒸發皿中，蒸干后，置烘箱內 80^°C 烘干為干膏，于干燥塔內冷卻至室溫，待恒重時，精密稱重，計算得膏率。

2.3.2水提工藝評價指標以干膏得率和芒果苷轉移率為評價指標綜合評分：芒果昔為小金牛草的主要活性成分，其轉移率越高，提取效果越好，為考察主要指標，權重系數為0.6；同時，兼顧其他作用成分，以干膏得率為次要指標，權重系數為0.4。干膏得率 Σ=Σ 樣品溶液總體積 x 干膏質量/（取樣體積× 原藥材質量）；芒果苷轉移率 Σ=Σ 干膏芒果苷含量 × 干膏質量/（原藥材芒果苷含量 × 原藥材質量）；綜合評分 Σ=Σ （干膏得率/最大干膏得率） ×40+ （芒果苷轉移率/最大芒果苷轉移率） ×60 。

2.3.3水提工藝正交設計與試驗選定加水量（A）、提取時間（B）、提取次數（C）為考察因素，采用 I₉ （ 3⁴ ）表進行正交試驗。水提工藝因素與水平見表3，正交試驗設計與結果見表4，方差分析結果見表5。

通過綜合評分直觀分析，3個因素對芒果昔轉移率、得膏率的影響程度不同，加水量（A） gt; 提取次數（C） gt; 提取時間（B），最優工藝為A₃B₃C₃ 。根據方差分析結果可知，3個因素中只有加水量和提取次數對綜合評分有顯著性影響（ Plt; 0.05），但由于加10倍量水與12倍量水、提取2次與3次、提取 1.5h 與 ^2h 對試驗結果影響不大，結合生產實際，從節約成本方面綜合考慮后，最終確定 A₂B₂C₂ 為優選工藝，即藥材加10倍量的水回流提取2次，每次 1.5h 。

2.3.4驗證試驗按最佳工藝提取，經3次重復試驗，測得芒果苷平均轉移率為 72.30% （ RSD= 2.0% ， n=3 ）；干膏得率為 19.20% （ RSD= 3.5% ， n=3 ）。結果表明該水提工藝穩定可行，重復性好。

3討論

原劑型金喉散是傳統的散劑，服用劑量大，藥味苦，臨床順應性差，引濕性強，生產操作可控性及產品質量穩定性差，制約了產品進一步的臨床推廣和應用。中藥顆粒劑具有載藥量大，易于吸收、起效快等優點[9]，通過一些輔料的加入在保證療效的前提下掩蓋了某些中藥的苦、澀、臭味，使患者使用的依從性大為提高，且能提高制劑的質量穩定性。因此，本文對原散劑的工藝和劑型進行了改進，改劑型為顆粒劑。

金喉顆粒為中藥復方制劑，根據方中各藥味的有效成分及其溶解性，并參考相關文獻[10-12]設計確定先采用水提、醇提及水提醇沉工藝進行藥效篩選。結果表明，水提工藝的抗炎活性優于醇提、水提醇沉工藝，同時考慮水提工藝與傳統湯劑相似，最終選擇水提工藝進行優化研究。目前中藥復方提取工藝研究中，大多數采用單一有效成分或有效部位含量作為指標篩選工藝，但這些化學成分往往難以代表整個復方的藥效[13-14]本文是基于藥效基礎上開展的提取工藝研究，將藥效學與處方中活性成分芒果苷轉移率、干膏得率相結合，綜合評價提取工藝的科學性、合理性，避免采用單一指標評價造成的片面性[15-16]

金喉顆粒由小金牛草和崗梅兩味中藥材組成，由于目前文獻關于崗梅尚缺乏對其指標成分的定量評價方法[17-18]。因此，新劑型金喉顆粒從處方組成、藥材活性成分及其含量、產品功效等方面考慮，在藥效學篩選試驗的基礎上對方中主藥小金牛草中的活性成分芒果昔轉移率進行了考察，建立了制劑中芒果昔的含量測定方法。在建立含量測定方法的前期試驗中，對檢測波長、流動相等色譜條件進行了考察，發現芒果苷在 258nm 波長處有最大紫外吸收，乙晴與 0.1% 磷酸溶液組成的流動相相比甲醇與不同體積分數醋酸（ 0.1% 、0.3% 、 0.5% ）或磷酸（ 0.1% 、 0.3% 、 0.5% ）

組成的流動相，其色譜峰峰形及分離度更好。供試品溶液的制備考察了超聲提取和加熱回流提取2種方法，并對提取溶劑、提取時間、溶劑體積等進行了考察，結果表明，加熱回流提取與超聲提取對芒果苷含量測定結果影響不大，故選擇操作方便的超聲提取。建立的芒果苷含量測定方法為水提工藝的正交試驗提供了方法學依據。

水提正交試驗中以芒果苷轉移率和干膏得率為評價指標綜合評分，選定加水量、提取時間、提取次數為考察因素。結果表明，只有加水量和提取次數對綜合評分有顯著性影響，但由于加10倍量水與12倍量水、提取2次與3次、提取 1.5h 與 ^2h 對試驗結果影響不大，結合生產實際，從節約成本方面綜合考慮后，最終確定的優選工藝為藥材加10倍量的水回流提取2次，每次 1.5h 。

綜上所述，本研究是基于藥效學與正交試驗相結合進行的金喉顆粒提取工藝優選，優選的最佳提取工藝為藥材加10倍量水回流提取2次，每次 1.5h 。在保證產品藥效的基礎上開展了工藝驗證，驗證結果表明優選的金喉顆粒提取工藝穩定可行、重復性好，可為后續的生產工藝研究及中藥改良型新藥開發提供試驗參考。

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