探討氣相色譜外標(biāo)法測定植物油中棕櫚酸、亞麻酸

中圖分類號：TS207 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1001-0769（2025）03-0071-05

植物油中的脂肪酸在人體健康中發(fā)揮著多種重要作用[1]。植物油中的脂肪酸可提供能量，增強(qiáng)飽腹感，并有助于脂溶性維生素的吸收[2]。此外，部分脂肪酸還可以將攝入的碳水化合物轉(zhuǎn)化成人體需要的飽和脂肪和單不飽和脂肪，因?yàn)槿梭w自身不能將碳水化合物轉(zhuǎn)化為關(guān)鍵的多不飽和脂肪，只能從食物中獲取[3]。食物中脂肪酸是機(jī)體很多功能運(yùn)轉(zhuǎn)所需要的，如腦部運(yùn)轉(zhuǎn)、免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)、荷爾蒙調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)抑制以及毛發(fā)和皮膚組織的生長修復(fù)等[4-8]。近年來，隨著研究的深入，植物油脂在飼料領(lǐng)域的應(yīng)用日益增多。植物油脂富含蛋白質(zhì)、脂肪和不飽和脂肪酸，可增強(qiáng)畜禽機(jī)體免疫機(jī)能，提高生產(chǎn)性能，改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)[9]。

根據(jù)GB/T 1535-2017 《大豆油》標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，大豆油中亞麻酸含量需達(dá)到 4.2%～11.0% □而GB/T 10464-2017 《葵花籽油》則要求，葵花籽油中棕櫚酸含量需達(dá)到 2.7%～6.5% 。本研究以GB5009.168－2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪酸的測定》中的第二法氣相色譜外標(biāo)法測定植物油中亞麻酸和棕櫚酸的含量，對該方法的樣本處理和測定條件進(jìn)行探究，找出適宜的試驗(yàn)條件，為實(shí)際檢測提供幫助。

1材料與方法

1.1儀器和試劑

1.1.1儀器與設(shè)備

Agilent7890B安捷倫氣相色譜儀（配備FID檢測器），梅特勒電子天平（型號：AL104-IC），水浴鍋（配備冷凝器）。

1.1.2試驗(yàn)試劑與標(biāo)準(zhǔn)品

本試驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為一級水；正庚烷（色譜純，天津市鑫鉑特化工有限公司）；焦性沒食子酸（上海麥克林生化科技股份有限公司），三氟化硼甲醇（體積分?jǐn)?shù)為 15% ，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司），無水硫酸鈉，氯化鈉，氫氧化鈉， 95% 乙醇。

食用油中棕櫚酸（標(biāo)準(zhǔn)值為 8.925% ，擴(kuò)展不確定度為 1.740% ；北京微標(biāo)標(biāo)物科技有限公司）；食用油中α-亞麻酸（標(biāo)準(zhǔn)值為52.0g/100g ，擴(kuò)展不確定度為 5.7g/100g 北京微標(biāo)標(biāo)物科技有限公司）；棕櫚酸甲酯C16：0（標(biāo)準(zhǔn)值 99.5% ，不確定度 0.8% ；上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；十八碳三烯酸甲酯（順9、12、15）C18：3（標(biāo)準(zhǔn)值 99.0% ，不確定度 2.0% ；上海安譜驗(yàn)科技股份有限公司）。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1色譜條件

采用氣相色譜儀對目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行分離檢測，具體色譜條件如下：

（1）色譜柱：選用CP-Sil88毛細(xì)管柱，規(guī)格為柱長 100m 、內(nèi)徑 0.25mm 、固定液膜厚0.2μm。

（2）進(jìn)樣口溫度： 270° 。

（3）檢測器溫度：配置FID檢測器，溫度280°C 。

（4）柱溫箱程序升溫：采用階梯式升溫程序，初 始溫度100 ^°C 并保持13min，隨后以10 ^°C /min 的速率升溫至180 ^°C 后保持6min；接著以 1 °C /min的速率升溫至200 ^°C 后保持20min; 最后以4℃/min的速率升溫至230 ^°C 后保持 10.5 min。

（5）氣體流量：氫氣作為燃燒氣，流量設(shè)定為30mL/min ；空氣作為助燃?xì)猓髁?300mL/min 尾吹氣（氮?dú)猓┝髁?15mL/min ；載氣（氮?dú)猓┝髁?mL/min；分流比設(shè)置為 100：1 。

1.2.2試樣處理

稱取 0.25g 均勻植物油試樣，置于 200mL 錐形瓶中，依次加入約 100mg 焦性沒食子酸、幾粒沸石以及2mL 95% 乙醇，混勻。植物油直接進(jìn)行脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化，向錐形瓶內(nèi)加入8mL 2% 氫氧化鈉溶液和 8mL 甲醇溶液，連接回流冷凝器，將瓶置于 （80±1）^°C 水浴中回流處理，直至油滴消失。從回流冷凝器上端加入7mL 15% 三氟化硼甲醇溶液，繼續(xù)在 （80±1）°_C 水浴中回流2min。隨后用少量水沖洗回流冷凝器，停止加熱，并迅速冷卻至室溫。

準(zhǔn)確加入15mL正庚烷于錐形瓶中，振搖2min，再加入10mL飽和氯化鈉，靜置分層。用移液管吸取5mL上層正庚烷提取液于另一容器中，加入3g無水硫酸鈉，振搖1min去除水分，靜置5min，吸取上層溶液作為待測樣本溶液。

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取一定量的棕櫚酸甲酯C16：0和十八碳三烯酸甲酯（順9、12、15）C18：3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別配制成質(zhì)量濃度為64.0mg/mL和16.0mg/mL。將制備好的標(biāo)準(zhǔn)溶液上機(jī)檢測，所得譜圖見圖1和圖2。

2 結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)樣本的測定

分別稱取兩份亞麻酸和棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)樣本，按照1.2.2試樣處理步驟進(jìn)行前處理，上機(jī)測定，計(jì)算結(jié)果見表1。

通過表1可知，按照試驗(yàn)步驟進(jìn)行前處理，亞麻酸和棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)樣本的測定結(jié)果均不在標(biāo)準(zhǔn)值范圍內(nèi)，檢測數(shù)值相較標(biāo)準(zhǔn)值偏低。

2.2試驗(yàn)前處理?xiàng)l件的選擇

2.2.1脂肪的皂化和甲酯化

亞麻酸和棕櫚酸的標(biāo)準(zhǔn)樣本檢測結(jié)果偏低，可能與脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化程度不夠有關(guān)。為此設(shè)計(jì)一組對比試驗(yàn)：將相同標(biāo)準(zhǔn)樣本分成3組，每組皂化和甲酯化時(shí)間分別為1、2和3h。試驗(yàn)結(jié)果見表2，亞麻酸標(biāo)準(zhǔn)樣本回收率見圖3，棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)樣本回收率見圖4。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，3組標(biāo)準(zhǔn)樣本經(jīng)不同時(shí)間的皂化和甲酯化前處理，處理2h的試驗(yàn)結(jié)果比較滿意，亞麻酸和棕櫚酸的標(biāo)準(zhǔn)樣本的回收率在各自的合格區(qū)間內(nèi)。處理1h的試驗(yàn)組，雖然檢測結(jié)果接近標(biāo)準(zhǔn)值的下限，但未在合格區(qū)間內(nèi)，不合格。處理3h的試驗(yàn)組，檢測結(jié)果距離標(biāo)準(zhǔn)值下限相差較多，是3組對比試驗(yàn)結(jié)果中最不理想的一組。

2.2.2催化劑和抗氧化劑的影響

按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪酸的測定》要求，試樣中需加入 100mg 的焦性沒食子酸，作為試驗(yàn)的催化劑和抗氧化劑。為探究其對試驗(yàn)結(jié)果的影響，在皂化和甲酯化前處理時(shí)間均為2h的條件下，一組添加焦性沒食子酸，一組未添加。對比試驗(yàn)結(jié)果見表3，兩種標(biāo)準(zhǔn)樣本回收率結(jié)果見圖5和圖6。

對比試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，焦性沒食子酸對亞麻酸和棕櫚酸的標(biāo)準(zhǔn)樣本結(jié)果未產(chǎn)生影響，兩種標(biāo)準(zhǔn)樣本結(jié)果的回收率均在合格范圍內(nèi)。

3結(jié)論

本試驗(yàn)是在遵循國標(biāo)GB5009.168－2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪酸的測定》的前提下，對氣相色譜法（外標(biāo)法）測定植物油中的脂肪酸試驗(yàn)方法進(jìn)行了探索。

脂肪酸皂化和甲酯化時(shí)間試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)樣本約為0.2g時(shí)，雖然水浴回流1h能滿足標(biāo)準(zhǔn)要求的油滴消失現(xiàn)象，但樣本的皂化、甲酯化程度不夠，可繼續(xù)回流至2h，可獲得符合檢測要求的精準(zhǔn)試驗(yàn)結(jié)果。

在測定植物油中脂肪酸時(shí)，當(dāng)皂化和甲酯化水浴回流時(shí)間為2h時(shí)，焦性沒食子酸的添加并非必要操作，可以根據(jù)實(shí)際情況靈活選擇是否使用。

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