蝴蝶蘭花梗腋芽脫毒組培快繁技術分析

中圖分類號：S682.31 文獻標識碼：A 文章編號：1005-7897（2025）11-0004-03

0引言

蝴蝶蘭屬于蘭科蝴蝶蘭屬的一類花卉植物，最早出現于熱帶雨林地區，本身具備喜暖畏寒特性，該花卉植物可長至 50cm ，每個短莖可見3枚左右葉片。在實際栽培作業中，該植物常因感染齒蘭環斑病毒（Odontoglossumringspotvirus，ORsV）與建蘭花葉病毒（Cymbidiummosaicvirus，CyMV）影響培育質量，故經過采用花梗腋芽脫毒組培快繁技術，能夠有效抑制病毒對植物長勢及成活率的不利影響，使其在脫毒劑有效作用下保持最佳生長狀態，為組培快繁活動的開展提供明確的技術指導，滿足高產優質培育需求。

1蝴蝶蘭花梗腋芽脫毒組培快繁技術要點

蝴蝶蘭花梗腋芽脫毒組培快繁技術的實踐應用，主要是為了改善蝴蝶蘭花卉植物的培育質量，體現花梗腋芽脫毒價值，以符合高質量、高效培育標準。在該技術應用階段，技術人員有必要深刻掌握技術要點，以達到預期培育效果，充分展現該技術的實用價值。

1.1花梗腋芽培養技術

出于改善蝴蝶蘭培育質量的目的，技術人員可充分運用花梗腋芽培養技術，了解與花梗腋芽萌發率關聯密切的影響因素，而后在脫毒操作中，確保在脫毒劑助力下提高萌發率。經過相關研究，可根據蝴蝶蘭花梗腋芽培養過程的取材時間、取材部位、培養基成分等內容歸納技術要點。蝴蝶蘭花梗腋芽脫毒組培快繁技術的核心在于外植體的高效活化與無菌體系構建。本研究針對開花花梗腋芽的生物學特性，系統性優化了取材定位、消毒程序及培養基配方三大關鍵環節。相關分析如下。

1.1.1取材定位的解剖學依據

根據蝴蝶蘭花梗發育規律，開花后30＼～45d的花梗進入生理成熟期，其腋芽分生組織細胞處于活性峰值。本試驗選取‘大辣椒'品種開花后35d的健康花梗，依據解剖學特征將其劃分為3個功能區域。

（1上部（距頂端 5-10（m） ：維管束密集，芽點飽滿，分生組織直徑 0.5-0.8mm 0

（②中部（距頂端 10-20（m） ：維管束間距增大，芽點部分被苞片包裹。

③下部（距頂端 20～30cm） ：木質化程度高，芽點呈休眠態。

1.1.2階梯式消毒程序優化

預試驗發現，花梗表面溝壑結構易藏匿病原菌，需采用復合消毒策略。

（1）物理清潔：用軟毛刷蘸取含 0.05% Triton X-100的清洗液 Λ（pH 為6.8）刷洗 3min ，去除表面蠟質層。

（②化學滅菌：重點比較乙醇-升汞（方案A）與次氯酸鈉-抗生素（方案B的效果差異，如表1所示。

表1數據表明，方案B的抗生素輔助處理可顯著降低污染率 （pΔ0.01） ，這可能是由于頭孢噻肟能滲透至維管束殺滅內生菌。最終確定方案B為最優消毒程序，但需注意次氯酸鈉處理時間，若超過 20min 會引發細胞質壁分離。

1.1.3培養基配方的響應面優化

在MS基礎培養基上，采用Box-Behnken設計對3種關鍵添加物進行優化。

（1）自變量：椰子汁 （X₁：10～309/L） 、6-BA （X₂;0.5～ 2.0mg/L） 、活性炭 。

（2）響應值：萌發率 Y₁ 、增殖系數 Y₂ 0多組試驗構建二次多項式模型，具體如下：

0.932） ;

當椰子汁濃度達25g/L、6-BA濃度達到 1.5mg/L. 活性炭 0.3g/L 時，萌發率可達 （82.6±3.2）% ，較基礎配方提升了 37.4% 。此配比下，分生組織細胞在培養7d后即出現明顯膨大，14d后可見2＼～3個新生芽點。

1.1.4環境參數的精準控制

通過正交試驗L9（3探究溫度、光照、濕度3個因素影響，具體如表2所示。

環境參數正交試驗極差分析如表3所示。溫度對萌發率的貢獻率達 47.3%（F=12.85，plt;0.01） ，這與蝴蝶蘭景天酸代謝（Crassulaceanacidmetabolism，CAM）代謝途徑的酶活性溫度閾值直接相關。最終確定最優組合為：晝溫 28% 夜溫 23% 、光照 1500Lx（16h/d） 、濕度70% ，此條件下腋芽萌發時間可縮短至 （18.3±1.5）d 。

1.1.5技術驗證與穩定性測試

對優化后的技術體系進行3批次重復試驗（每批次 n=100） ，結果顯示：平均萌發率為 （80.3±2.8）% （相對標準偏差為 3.5% ；污染率 ?5% ；褐化率 ≤10% 。電鏡觀察顯示，優化組腋芽分生組織細胞線粒體數量較對照組增加2.3倍，內質網結構更為發達，表明能量代謝水平顯著提升。 RT-qPCR 檢測發現，生長素響應基因（AUX/IAA）表達量上調4.7倍，細胞分裂素合成關鍵酶IPT表達量上調3.2倍，從分子層面驗證了技術體系的有效性。

1.2莖尖梯度脫毒技術體系

蝴蝶蘭病毒脫除需基于分生組織病毒分布梯度特性，采用“物理剝離-熱激誘導\"的協同脫毒策略。實際操作中，選取經預處理的健康莖尖，在超凈工作臺內進行三級梯度剝離：首先，用顯微手術刀切除外層2＼～3片葉原基，保留直徑約 1.0mm 的莖尖圓錐體；其次，在40倍解剖鏡下沿維管束切線方向削除基部 0.2mm 組織，消除潛藏病毒粒子的薄壁細胞；最后，使用 0.05mm 鎢絲針精確剔除分生區邊緣可能殘留病毒的過渡細胞，獲得直徑 0.3-0.5mm 的無菌分生組織。此過程需在15min內完成，避免外植體氧化褐化。脫毒核心環節采用動態熱激處理：將剝離后的莖尖接種于改良KnudsonC培養基（含 0.5mg/LΛ6-BA+0.1mg/L 萘乙酸），初始3d 維持25^°C 促進細胞代謝恢復，隨后每日升溫 2^°C 至 38°C 恒溫狀態，持續處理21d。熱激第7d向培養基添加 0.1μmol/L 水楊酸與 0.05% 氨基寡糖素復合誘導劑，前者通過激活病程相關蛋白（Pathogenesis related protein，PR protein）切割病毒RNA，后者增強細胞壁胼胝質沉積形成物理屏障。實驗數據顯示， 38^°C 處理使病毒外殼蛋白（coatprotein，CP）熱變性效率達 92.7% ，配合化學誘導劑可將ORSV脫毒率提升至 93.5% 。實際操作中需嚴格監控兩點：培養基滲透壓維持在 280～300mOsm/kg 防止高溫脫水，氨基寡糖素濃度不超過 0.05% 以避免細胞程序性死亡。該技術體系的關鍵在于多機制協同：熱激促使HSP70分子伴侶包裹病毒粒子，阻斷其復制酶組裝；水楊酸誘導的系統抗性可清除漏網的病毒RNA；氨基寡糖素則通過激發茉莉酸信號通路強化細胞防御。

2蝴蝶蘭花梗腋芽脫毒組培快繁技術優化路徑

蝴蝶蘭花梗腋芽脫毒組培快繁技術應用階段，按照上述技術要點確定培育重點之后，還應當從整體化培育體系角度進行優化改進，使蝴蝶蘭花卉植物在新技術指導下逐漸發育成完整植株。

2.1莖尖雙效預處理技術體系構建

針對蝴蝶蘭莖尖脫毒的技術瓶頸，可采用“復合消毒-低溫鈍化\"雙效預處理工藝。實際操作中，選取開花后45d的健康母株，于清晨露水未干時截取頂端3cm幼嫩莖段。首先進行復合消毒處理：將莖段置于含 0.1% 吐溫-80的超聲波清洗儀 （40kHz） 中震蕩5min，利用空化效應剝離表面蠟質層；隨后轉入預冷的 4^°C 消毒液中，該溶液由 2% 次氯酸鈉（含 0.05% Tween-20增強滲透性） .50mg/L 頭孢克肟及 0.1% 氨基寡糖素組成，在磁力攪拌器（300rpm）輔助下處理15min。此階段需嚴格控制液溫在 （4±0.5）^°C ，低溫環境既可抑制酚類物質氧化，又能增強氨基寡糖素對病毒外殼蛋白的分解作用。完成化學消毒后，立即將莖尖轉移至無菌操作臺進行顯微解剖。使用體視顯微鏡 （40×） 剝離外層苞片，精確切取 0.3-0.5mm 的頂端分生組織，要求包含1＼～2個葉原基且維管束原基未分化。將獲取的莖尖外植體置于改良型MS培養基中（附加 0.3mg/L 赤霉素、 1.0mg/L 萘乙酸），于 36^°C 暗培養箱中進行為期7d的病毒鈍化處理。此階段通過熱激效應破壞病毒RNA復制酶活性，同時培養基中添加的 2% 二甲亞砜可有效提高細胞膜通透性，促進抗病毒因子滲透。

雙效預處理工藝參數優化結果如表4所示。復合消毒階段可清除 85% 以上的表面污染菌，但對深層次病毒粒子清除率不足 40% ；經后續 36% 熱鈍化處理后，病毒脫除率顯著提升至 90% 以上。電鏡觀察顯示，聯合處理后的莖尖分生細胞中線粒體嵴結構完整，粗面內質網數量較單一處理組增加18倍，說明雙效處理在保障細胞活性的同時，有效激活了宿主抗病毒機制。實際操作中需注意：次氯酸鈉處理超過18min將導致分生細胞質壁分離，而熱鈍化溫度超過 38^°C 會引發蛋白質不可逆變性，嚴格的過程監控是技術成功的關鍵。

2.2調控組培快繁環境參數

該技術的有效應用，還需要通過調控環境參數，達到預期培育效果。以水質和溫度環境參數作為研究重點，觀察不同水質（A：可溶性鹽溶度 0.02ms/cm 純凈水；B：0.9ms/cm自來水）及溫度（C：白間 22% 夜間16% ;D：白間 25^°CI 夜間 18^°C） 環境下，蝴蝶蘭完整植株的長勢及最終培育結果。其中在A水質條件下同一批待測樣本花梗長度為56cm，花梗伸長量為 0.95cm/d ；花徑為 9.3cm ；花卉數量為7.5朵；B條件下分別為 55cm 、0.93cm/d.9cm.7.9 朵；C溫度下開花率為 12% ;D溫度條件下為 49% ；花卉數量分別為2.2朵、4.6朵；花梗長度為 10.5cm.18cm ；抽梗率為 45%65% 。經對比確定：若在蝴蝶蘭花梗腋芽脫毒組培快繁技術應用過程，水質參數對培育質量的影響較小。若有獲取長花梗需求，則可以考慮優先創造可溶性鹽溶度 0.02ms/cm 純凈水的水質條件；溫度調控部分，則以白間 25% 夜間 18°C 為標準，由此獲得滿意的培育成果。

2.3加強標準化增殖培養

技術人員應用該技術培育蝴蝶蘭花卉植物時，也可采用標準化增殖培養方式，促進花梗萌發。其中在增殖培養前期，需根據要求，使其在不同階段均能吸收所需營養成分。蝴蝶蘭不同生長階段施肥條件如表5所示。而在蝴蝶蘭進入休眠期以后，可通過設計增殖培養條件（酸堿度5.5；增殖系數2.2倍；持續進行12h的1200Lx以上光照培育；溫度 24°C ；培養基為 2% 蔗糖聯合花寶一號 +2% 蔗糖聯合 0.1mg/L 植物生長激素與花寶一號）激活花梗腋芽活力，并對恢復活力的蝴蝶蘭植株進行移栽，以實現健康生長。

3結語

蝴蝶蘭花梗腋芽脫毒組培快繁技術的系統優化，標志著傳統組培模式向高效、可控方向的轉型。通過科學整合外植體精準取材、復合消毒程序及環境動態調控，該技術體系在病毒脫除與植株活性間實現了協同提升，為規?；療o毒苗生產奠定基礎。研究揭示的梯度剝離與熱激誘導協同機制，不僅深化了對植物-病毒互作關系的理解，更為脫毒技術創新提供了關鍵理論支撐與實踐指導。

未來，相關研究需進一步聚焦病毒侵染的分子調控網絡，探索植物抗性信號通路的靶向激活策略，同時推動人工智能技術在環境參數優化與生產流程中的應用。隨著分子生物學與智能裝備技術的深度融合，蝴蝶蘭脫毒快繁技術有望邁向精準化與標準化，為花卉產業品種升級與可持續發展注入新動能。

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作者簡介：米曉潔（1979一），女，漢族，山東郛城人，碩士研究生，高級農藝師，研究方向為蘭科植物新品種選育、組織培養技術和脫毒技術。