一測多評法測定舒肝顆粒中4種成分的含量

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】A 【文章編號】1007-8517（2025）12-0062-05

DOI ： 10.3969/j . issn.1007-8517.2025.12. zgmzmjyyzz202512014

Abstract：ObjectiveTo establish aquantitativeanalysis of multi-components bysingle marker（QAMS）method forsimultaneousdeterminationoffourcomponents（geniposide，paeoniflorin，liquirin，andammoniumglycyrhizinate）inShuganGranules. Method High performance liquid chromatography（HPLC）was employed，using a JADE-PAK^°ledastKM-C₁₈ column （ 250mm× 4.6 mm， 5μm ），with methanol- 0.05% formic acid aqueous solution as the elution mobile phase for gradient elution. The flow rate was （204號 1.0mL/min ，the detection wavelength was 26Onm，and the column temperature was 40% .Geniposide was used as the internal referencesubstance toestablishtherelativecorrectionfactorsoftheoterthre componentsandcalculatethecontentsofthefourcomponents tobedetermined，achievingmulti-omponentdeterminationbyasinglemeasurement.Meanwhile，itwascomparedwiththeexteralstandardmethodtoverifytheaccuracyandfeasibilityoftheQAMSmethodResultsThefourcomponentshaveagoodlinearelationship within their respective ranges（ rgt;0.999 6 ）. The average sample recovery rate is 99.01% to 102.64% ，and the RSD is 0.54% to 1.5% .Theresults obtained bythequantitative analysisof multi-components by single marker method are close to those by theexternalstandardmethod.Conclusion Usinggeniposideas theinteralreferencesubstance，theQAMS metodforthefourcomponents in Shugan Granules is accurateand feasible，andcan be used to strengthen thequalitycontrolof Shugan Granules.

Key words： Shugan Granules;QAMS； Four Components

舒肝顆粒是昆明中藥廠有限公司研制生產的治療肝郁證的中成藥制劑，由當歸、白芍、白術等10味中草藥制成，方中柴胡、香附為君藥，舒肝散郁，條達肝氣，理氣調中，調經止痛；當歸、白芍、茯苓、白術四藥為臣藥，養血柔肝；梔子、牡丹皮為佐藥，清熱涼血；甘草為使藥，健脾益氣，調和諸藥[1]。臨床研究[2-4]表明，舒肝顆粒能預防抑郁發作，并能改善輕度抑郁患者的抑郁癥狀，還能有效改善更年期患者臨床癥狀，且不良反應較少。

舒肝顆粒現行質量標準收載于《衛生部頒藥品標準》中藥成方制劑第十七冊[5]，標準僅有性狀、鑒別、制劑通則檢查項，缺少含量測定的質控方法，且目前關于舒肝顆粒有效成分含量測定的報道有限，因此繼續完善舒肝顆粒的質量標準對于提高其質量控制標準有重要意義。一測多評法由中國中醫科學院王智民[提出，僅選定一個化學成分（內參物），建立內參物與其它多種成分間的相對校正因子，實現多個成分含量的測定[7]，該方法克服了對照品緊缺，降低了檢測成本，節約時間，操作簡便。本研究以梔子苷為對照，用QAMS同時測定舒肝顆粒中梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的含量，為提高舒肝顆粒的質量控制標準提供依據。

1儀器與試藥

1.1儀器LC-2010AHT型高效液相色譜儀（日本島津）；UC－7100S 型超聲波清洗器（美瑞泰克）；MS105DU型電子天平（梅特勒、托利多）。1.2試藥梔子苷（批號110749－202320，98.1% ），芍藥苷（批號110736－202246，96.7% ），甘草苷（批號111610－202209，95.2% ），甘草酸銨（批號110731－202122，94.4% ）均購于中國食品藥品檢定研究院；5批舒肝顆粒（批號：531721、533429、532259、520723、532714），編號： ΔS1_Δ～S5 ，昆明中藥廠有限公司；甲醇色譜純，賽默飛世爾科技（云南）有限公司；超純水。

2方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1混合對照品溶液的制備精密稱取梔子苷19.86mg 、芍藥苷 21.70mg 、甘草苷 24.78mg 、甘草酸銨 22.03mg 分別置 50mL 量瓶中，加甲醇定容，按 1：1：1：1 的體積混合，制成濃度分別為97.413μg/mL 、 104.920μg/mL 、 117.953μg/mL 、103.982μg/mL 的混合溶液，搖勻，即得。2.1.2樣品溶液取舒肝顆粒適量，研細，精密稱取約 1.0g 置于具塞錐形瓶中，精密加入 50% 甲醇 50mL ，稱重，超聲（ 100W ， 53kHz ） 30min 補足減失的重量，過 0.45μm 微孔濾膜，即得。2.2色譜條件色譜柱： JADK-PAK^°ledcircKM-C₁₈ （2號（ 4.6mm×250mm ， 5μm ）；流動相為甲醇（A）-0.05% 甲酸溶液（B），梯度洗脫時間程序（0～20min ， 15%～25%A ： 20～45min ， 25%～70% A;45～50min ， 70%～85%A ； 50～52min ， 85%～15% A; 52～60min ， 15%A ）；流速為 1.0mL/min ，檢測波長為 260nm ；柱溫： 40% ；進樣量 10μL 。2.3系統適用性分別取混合對照品溶液、供試品溶液，按“2.2”項條件進樣測定，考察系統適用性。在“2.2”項色譜條件下，各成分色譜峰與相鄰峰的分離度均大于1.5。色譜圖如圖1所示。

圖1高效液相色譜圖

1．梔子苷；2.芍藥苷；3.甘草苷；4.甘草酸銨 A.對照品溶液；B.供試品溶液

2.4方法學考察

2.4.1 線性關系 分別精密吸取混合對照品溶液

1μL 、2μL、 5μL 、 10μL 、 15μL ） 20μL 注人高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積。按“2.2”項色譜條件下進樣測定。所測4種成分的 回歸方程和相關系數見表1。色譜圖如圖1所示。

表14種成分的回歸方程和相關系數

2.4.2精密度試驗取混合對照品溶液，連續進樣6次，測得梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨色譜峰的峰面積RSD分別為 0.23%. 0.83% 、0.27%.1.2% 。

2.4.3 穩定性試驗 取舒肝顆粒（批號：531721），照“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，分別測定在 0h.2h.4h.8h.12h.24h 的峰面積。測得梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的峰面積RSD分別為 0.66% 、 1.1% 、 0.86% ！0.93% ，表明樣品在 24h 的穩定性良好。

2.4.4重復性試驗取舒肝顆粒（批號：531721），照“2.1.2”項下方法平行制備6份，測得梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的含量RSD分別為 0.53% 、0.86% 、 1.3% 、 0.82% ，表明該方法重復性良好。2.4.5加樣回收率試驗取各成分含量已知的本品內容物（批號531721）6份，每份約 _0.5g ，分別精密加入對照品溶液，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2”項色譜條件下進樣測定，計算回收率和RSD，結果見表2。表明該方法的回收率良好。

表2加標回收率表

2.5相對校正因子的測定吸取“2.4.1”項下的6個線性標準溶液，照“2.2”項下的色譜條件下進樣測定，依據相對校正因子計算公式，采用多點校正法計算，以梔子苷作為內標物質，計算芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的校正因子。芍藥苷校正因子分別為6.283、6.226、6.262、6.294、6.271、6.219，平均值：6.259，RSD為 0.49% ；甘草苷校正因子分別為0.623、0.639、0.626、0.630、0.635、0.622，平均值：0.629，RSD為 1.1% ；甘草酸銨校正因子分別為0.779、0.774、0.778、0.769、0.772、0.763，平均值：0.772，RSD為 0.78% 。2.6相對校正因子耐用性考察取適量混合對照品溶液適量，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，分別考察不同流速（ 0.8mL/min ： 1.0mL/min 1.2mL/min ）和不同柱溫（ 30^qC 、 35^qC 、 40% ）對相對校正因子的影響，結果見表3。表明不同色譜條件下芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的相對校正因子無顯著影響。

表3不同色譜條件下3個成分的相對校正因子表

2.7待測成分色譜峰定位取混合對照品溶液適量，按“2.2”項下色譜條件連續進樣測定6次，采用相對保留時間法對各成分色譜峰進行定位。

本研究考察了相對保留時間在不同色譜柱和不同儀器上的重現性，結果見表4，表明不同條件下各成分RRT無顯著差異。

表4不同條件下3種成分的相對保留時間

2.8一測多評法與外標法的比較先采用外標法對不同批次舒肝顆粒的4種成分進行含量測定，再用建立的一測多評法對以梔子苷為內參的另外3種成分的含量進行計算，并將兩種方法的結果進行比較，以驗證一測多評法的準確性，結果見表5。結果表明2種方法測定的結果無顯著差異，QAMS法測定舒肝顆粒中4個成分的含量具有可行性。

表53種成分兩種計算方法的比較表（mg/g）

注：RMD為相對平均偏差（ % ）

3討論

3.1供試品處理方法選擇分別考察不同提取溶液（甲醇、乙醇、 50% 甲醇、 70% 甲醇溶液）及不同提取方式（超聲提取、回流提取）對4個成分提取效率的影響，發現 50% 甲醇和 70% 甲醇提取效果較好，為節約成本，選用 50% 甲醇提取;回流提取和超聲提取差異不大，因此選擇操作方便的超聲提取。

3.2色譜條件選擇用文獻［8］中的條件甲醇-0.05% 甲酸水溶液為流動相，通過流速和比例的調整優化后，當采用“2.2”項下條件進樣測定時，梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨4個成分均能達到良好的分離，滿足分析要求。

3.3指標性成分及內參物選擇在2020版《中國藥典》9中，梔子苷是梔子的質量控制指標，具有抗炎、抗菌、降血糖、抗抑郁、抗氧化、免疫調節、抗腫瘤等藥理作用[10]；白芍和牡丹皮均含芍藥苷，而芍藥苷具有抗抑郁的作用[]；甘草的主要成分甘草苷和甘草酸銨具有抗病毒、抗氧化、抗炎、免疫調節、抗腫瘤等多種生物學作用[12-14]，其中甘草苷可改善抑郁模型中的快感缺乏癥狀并對抗絕望行為[15]。因此本研究選擇梔子苷、芍藥苷、甘草苷和甘草酸銨含量測定指標。由于梔子苷對照品性質穩定，色譜峰峰形良好，保留時間附近干擾成分少，符合內參物的選擇要求，故選擇梔子苷作為內參物。

3.4方法評價本研究中建立的一測多評法操作簡便，重復性好，結果準確可靠，可同時測定舒肝顆粒中4種成分的含量，且測定結果與外標法測定結果無顯著差異，可為制劑標準提升和質量控制提供參考。

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（收稿日期：2024-09-20 編輯：劉斌）