電針心經(jīng)/心包經(jīng)穴對(duì)AD大鼠海馬組織谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的影響

[中圖分類號(hào)]R245 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)]doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.08.010

Effects of electroacupuncture at heart meridian/pericardium meridian acupoints on glutamate transporters in hippocampal tissue of AD rats

KE Chao， SHAN Shengtao， TA N Yan，CAO Yang， XIE Zhengrong， ZHOU Zhuo， YUA N Liumei， PAN Jiang， ZHANG Wei* TheFirst Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 41ooo7，China

[Abstract]ObjectiveTo investigate theeffectsof electroacupuncture （EA）atheart meridian/pericardium meridianacupoints onbehavior hppocapalspticulasucturesileplaqudepositiondguaatetrasporsinteppocaaliofat withAlzheimers disease （AD）MethodsFortymale SDrats wererandomlydivided intosham-operated group （n=10）andmodelgroup （n=30）.AD models were established by bilateral hippocampal CA1 region injection of β -amyloid protein 1-42 （Aβ 1-42， .Postoperatively， oneratdiedinthesham-operatedgroupandthreeinthemodel group.Theremaining27succesfully modeledratswere then randomizedintomodelgroup，heart meridianacupointgroup，andpericardiummeridianacupointgroup，withnineratsineach group.EAwasapliedtotheheart meridianandpericardium meridiangroups，whilethe sham-operatedandmodel groupsonly underwentrestraintwithoutEA.Morrswatermazetestwasusedtoobservethechangesinlearningandmemoryabilitesofrats. Transmissionelectron microscopywasemployed toobserve the changesofsynapticultrastructurein hippocampalregionofrats. Congored stainingwasusedtoexamineAβplaquedeposition inhippocampalregionofrats.Westem blotwasperformedto examinetheexpressionlevelsof vesicularglutamatetransporter2（VGLUT2）andexcitatoryaminoacidtransporter2（EAAT2）in hippocampal tisueofratsResults Compared withthesham-operatedgroup，themodel groupexhibitedreducednumberof platform crossings and shorter duration in target quadrant （ P lt;0.01），impaired synaptic ultrastructure，aggravated Aβ plaque deposition， and reduced protein expression levels of VGLUT2 and EAAT2（ P lt;0.01）.Compared with the model group，both EA groups showed increased number of platform crossings and prolonged duration in target quadrant P?0.05 P?0.01 1）， improved synaptic ultrastructure， reduced Aβ plaque deposition，and elevated protein expression levels of VGLUT2 and EAAT2（ P lt;0.05， P lt;0.01）.No statistically significantdiferenceswereobservedinanyindicatorsbetweetheheartmeridianandpericardiummeridianacupointgroups（ Pgt; 0.05）.ConclusionEAathear/pericardiummeridianacupointsimprovesspatiallearningandmemoryinADrats，reducessenile plaque deposition and synaptic damage， with mechanisms potentially linked to glutamate transporter regulation.

[Keywords]Alzheimer'sdisease; electroacupuncture;heartmeridian/pericardiummeridian；glutamatetransporter;syaptic ultrastructure; vesicular glutamate transporter 2; excitatory amino acid transporter 2

阿爾茨海默病（Alzheimer'sdisease，AD）是以學(xué)習(xí)記憶障礙、認(rèn)知障礙、精神行為癥狀等為主要表現(xiàn)的一種退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其治療的重點(diǎn)在于如何提高患者的學(xué)習(xí)、記憶和認(rèn)知功能。目前，AD的發(fā)病機(jī)制尚不明確，較為公認(rèn)的典型病理標(biāo)志包括β淀粉樣蛋白（βamyloid，Aβ）積累、Tau 磷酸化及突觸損傷。突觸是學(xué)習(xí)與記憶形成的重要的形態(tài)學(xué)和功能學(xué)基礎(chǔ)。最新研究表明，谷氨酸能神經(jīng)元是中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性突觸傳遞的主要來(lái)源，參與AD中突觸可塑性、學(xué)習(xí)與記憶的形成。其中，谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體是維持谷氨酸能穩(wěn)態(tài)的重要組成之一，包括囊泡型谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（vesicularglutamatetransporter2，VGLUT2）和興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（excitatory amino acid transporter 2， EAAT2）。因此，檢測(cè)海馬VGLUT2與EAAT2的表達(dá)水平對(duì)于探討電針對(duì)AD療效有一定的價(jià)值。越來(lái)越多的證據(jù)表明，針灸防治AD具有一定的優(yōu)勢(shì)[4。且根據(jù)AD發(fā)病的不同病因病機(jī)特點(diǎn)，學(xué)者們將其和針灸理論相結(jié)合，提出不同的針灸治則和選穴處方，諸多針?lè)ㄏ嗬^出現(xiàn)[7-8]。中醫(yī)理論認(rèn)為，心具有“主神明\"這一生理功能，與心相關(guān)的經(jīng)脈絡(luò)屬（即手少陰心經(jīng)和手厥陰心包絡(luò)經(jīng)）與腦的關(guān)系密切，研究心經(jīng)/心包經(jīng)穴治療神明疾病具有重要意義。因此，本實(shí)驗(yàn)以谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體為切入點(diǎn)，觀察電針心經(jīng)/心包經(jīng)穴對(duì)AD大鼠海馬組織的突觸超微結(jié)構(gòu)、Aβ沉積及VG-LUT2、EAAT2蛋白表達(dá)的影響，探討電針干預(yù)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的可能作用機(jī)制。

1材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

選取體質(zhì)量 600～700g 的SPF級(jí)健康雄性SD大鼠40只，10～12月齡，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)為SCXK（湘）2019-0004。于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房喂養(yǎng)，保持 12h/12h 的明暗循環(huán)周期，濕度 40%～60% ，自由攝食飲水。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格遵守《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南》。該實(shí)驗(yàn)方案已獲湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：LL2020070102）。

1.2 主要儀器和試劑

1.2.1主要儀器華佗牌一次性無(wú)菌針灸針（規(guī)格： 13mm×0.16mm 和 7mm×0.16mm ）、電針治療儀（型號(hào)：華佗牌SDZ-V）購(gòu)自蘇州醫(yī)療用品廠有限公司；手持式顱鉆（型號(hào)：FD3002）購(gòu)自上海玉研科學(xué)儀器有限公司；腦立體定位儀（型號(hào)：DW-2000）Morris水迷宮系統(tǒng)（型號(hào)：BL-420N）購(gòu)自成都泰盟軟件有限公司；透射電子顯微鏡（型號(hào)：JEM-2010）購(gòu)自日本電子公司；超薄切片機(jī)（型號(hào)：LeicaUC7）購(gòu)自德國(guó)Leica公司；臺(tái)式冷凍離心機(jī)（型號(hào)：H1650R）購(gòu)自湖南湘儀公司；電泳儀（型號(hào)：DYY-6C）、電泳槽（型號(hào)：DYCZ-24DN）、轉(zhuǎn)膜儀（型號(hào)：DYCZ-40D）購(gòu)自北京六一公司；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（型號(hào)：ChemiScope6100）購(gòu)自上海勤翔科學(xué)儀器有限公司；課題組研發(fā)的含頭套的大鼠固定裝置（專利號(hào)：ZL202023115252.9）等。

1.2.2 主要試劑 EAAT2抗體（批號(hào)：22515-1-AP）、

VGLUT2抗體（批號(hào)：25261-1-AP） β -actin（批號(hào)：66009-1-Ig 購(gòu)自美國(guó)Proteintech公司；HRP-山羊抗兔IgG（批號(hào)：AWS0002）HRP-山羊抗小鼠IgG（批號(hào)：AWS0001）購(gòu)自中國(guó)Abiowell公司；Gluta固定液（批號(hào)：P1128）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；剛果紅染液套裝（批號(hào)：S12553）購(gòu)自武漢賽維爾生物科技有限公司等。

1.3 造模與分組

將40只大鼠采用隨機(jī)數(shù)字法分為假手術(shù)組（10只）和造模組（30只）。造模組采用雙側(cè)大腦海馬CA1區(qū)內(nèi)注射 A3_1-42 構(gòu)建AD模型， Aβ_1-42 寡聚體的濃度為 5μg/μL ，假手術(shù)組雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射等量生理鹽水，具體造模方式參考課題組前期研究[]。術(shù)后假手術(shù)組死亡1只，造模組死亡3只。綜合造模組大鼠行為學(xué)Morris水迷宮數(shù)據(jù)以及后續(xù)檢測(cè)中大鼠海馬組織Aβ斑塊沉積，確認(rèn)AD模型是否構(gòu)建成功。將造模成功的27只模型大鼠采用隨機(jī)數(shù)字法分為模型組、心經(jīng)穴組、心包經(jīng)穴組，每組9只。

1.4 干預(yù)方法

假手術(shù)組、模型組大鼠予以捆綁固定 20min 不進(jìn)行電針刺激。為防止針刺過(guò)程中大鼠咬傷操作者，均予以含頭套的大鼠固定裝置進(jìn)行固定。心經(jīng)穴組、心包經(jīng)穴組大鼠予以上述捆綁固定并常規(guī)消毒后，分別用一次性無(wú)菌針灸針直刺入大鼠雙側(cè)心經(jīng)、心包經(jīng)穴位 2～4mm ，然后連接電子針療儀，按從胸走手的循行方向：心經(jīng)穴組“極泉”“少海\"相連，“靈道”“神門\"相連；心包經(jīng)穴組“天泉”“曲澤\"相連，“內(nèi)關(guān)\"與“大陵\"相連。采用疏密波，頻率 2Hz ，電流 1mA ，強(qiáng)度以局部組織輕顫為度，刺激時(shí)間20min ，每天1次，每周電針6d后休息 1d 均連續(xù)干預(yù)7周。所有穴位參照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用穴位名稱與定位第2部分：大鼠》I進(jìn)行定位。

1.5檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.5.1Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化在隱藏平臺(tái)實(shí)驗(yàn)中，平臺(tái)位置固定在第一象限（目標(biāo)象限）中心，并淹沒(méi)在水面下約 1cm 處。連續(xù)進(jìn)行4d的隱藏平臺(tái)實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練，在最后1次訓(xùn)練結(jié)束 24h 后進(jìn)行60s的探針試驗(yàn)。在探針試驗(yàn)中，將大鼠從平臺(tái)所在象限的對(duì)側(cè)象限入水點(diǎn)放人水中，記錄 1min 內(nèi)大鼠在池中的游泳軌跡，記錄迷宮中的穿越平臺(tái)次數(shù)、目標(biāo)象限內(nèi)的停留時(shí)間，以供后續(xù)分析。

1.5.2透射電鏡觀察大鼠海馬區(qū)突觸超微結(jié)構(gòu)的變化行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后，各組隨機(jī)選取3只大鼠麻醉后取腦組織，新鮮腦組織盡量減小牽拉、挫傷與擠壓等機(jī)械損傷，迅速置于Gluta固定液中4℃固定 2～4h 。進(jìn)行漂洗、固定、脫水和包埋后做超薄切片 （60～80nm） ，醋酸鈾溶液和枸橡酸鉛溶液各染色15min ，切片，室溫干燥過(guò)夜。于透射電子顯微鏡下觀察并采集圖像分析。

1.5.3剛果紅染色觀察海馬區(qū) Aβ 斑塊狀的沉積行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后，各組再隨機(jī)抽取3只大鼠麻醉后取腦組織， 4% 多聚甲醛固定液固定 24h 后，常規(guī)石蠟包埋并制備切片，將切片依次二甲苯脫蠟、乙醇水化。將切片入剛果紅染液 ¹h ，水洗，氫氧化鉀分化至陽(yáng)性斑塊明顯，水洗。入蘇木素染液復(fù)染 3～5min ！水洗。脫水中性樹(shù)膠封片。顯微鏡鏡檢，采集圖像分析，淀粉樣蛋白呈紅色。

1.5.4Western blot檢測(cè)大鼠海馬組織VGLUT2、EAAT2的蛋白表達(dá)水平各組最后剩余3只大鼠經(jīng)麻醉后取腦組織，冰上迅速剝離海馬， -80^°C 冰箱凍存。將海馬組織解凍，離心 （4Φ°C，12 000r/min ，離心半徑為 10cm）15min 后取 200μL 蛋白上清液至 1.5mL 離心管中。采用BCA法測(cè)定蛋白濃度，調(diào)整至統(tǒng)一濃度。等量蛋白（ 10～20μL） 經(jīng)SDS-PAGE（ 10% 分離膠， 4.8% 濃縮膠）電泳分離（恒壓78V）。濕轉(zhuǎn)法（ 300mA ）將蛋白轉(zhuǎn)移至NC膜。孵育膜用5% 脫脂牛奶室溫封閉 90min 一抗： β? -actin（1：5000）、VGLUT2（1：1 000）、EAAT2（1：1 000）4 C 孵育過(guò)夜。PBST洗滌3次后，HRP標(biāo)記二抗（1：5000）室溫孵育 90min 。ECL化學(xué)發(fā)光試劑顯影，ImageJ軟件分析條帶灰度值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本實(shí)驗(yàn)采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料以 x±s \"表示。當(dāng)數(shù)據(jù)符合正態(tài)性和方差齊性時(shí)，多組間數(shù)據(jù)兩兩比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA）；不符合正態(tài)分布或方差齊性時(shí)，采用多個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)秩和檢驗(yàn)（Kruskal-Wallis H ）。均以 Plt;0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的比較

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)、目標(biāo)象限停留時(shí)間均減少 （Plt;0.01） ；與模型組比較，心經(jīng)穴組和心包經(jīng)穴組穿越平臺(tái)次數(shù)、目標(biāo)象限停留

時(shí)間均增加 （Plt;0.05，Plt;0.01） ；心經(jīng)穴組和心包經(jīng)穴組之間穿越平臺(tái)次數(shù)、目標(biāo)象限停留時(shí)間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Pgt;0.05） 。詳見(jiàn)表1。

2.2各組大鼠海馬區(qū)突觸超微結(jié)構(gòu)的比較

假手術(shù)組大鼠海馬區(qū)突觸結(jié)構(gòu)清晰，突觸數(shù)量較多，突觸前區(qū)可見(jiàn)分布均勻圓形大小的突觸小泡，數(shù)目較多，突觸前后膜結(jié)構(gòu)清晰完整，突觸后膜致密帶豐富。模型組大鼠海馬區(qū)突觸結(jié)構(gòu)出現(xiàn)軸漿空泡化，前膜小泡分布散亂稀疏，突觸前后膜模糊不清，突觸后膜致密帶變薄，細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)散亂。心經(jīng)穴組、心包經(jīng)穴組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元也存在不同程度的損傷，但突觸結(jié)構(gòu)較清晰，突觸形態(tài)結(jié)構(gòu)改善明顯，前膜內(nèi)囊泡數(shù)量增多，突觸前后膜結(jié)構(gòu)較清晰完整，突觸后膜致密帶較豐富。詳見(jiàn)圖1。

2.3各組大鼠海馬區(qū)Aβ斑塊狀沉積的比較

假手術(shù)組大鼠海馬區(qū)細(xì)胞輪廓清晰，形態(tài)正常，細(xì)胞排列整齊、分布致密有序，幾乎沒(méi)有發(fā)現(xiàn) Aβ 斑塊狀的形成；模型組海馬區(qū)細(xì)胞排列散亂、數(shù)目減少，可見(jiàn)較多空隙，有較深紅色Aβ斑塊狀沉積，且沉積面積較大；心經(jīng)穴組和心包經(jīng)穴組海馬區(qū)細(xì)胞排列較整齊、分布較致密有序，偶見(jiàn)神經(jīng)元缺失造成的空隙，Aβ斑塊狀沉積程度逐漸減輕，可散見(jiàn)淡紅色Aβ斑塊。詳見(jiàn)圖2。

2.4各組大鼠VGLUT2、EAAT2的蛋白表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織中VG-LUT2、EAAT2蛋白表達(dá)水平下降 （Plt;0.01） ；與模型組比較，心經(jīng)穴組、心包經(jīng)穴組海馬組織中VGLUT2、EAAT2蛋白表達(dá)水平均上升 （Plt;0.05，Plt;0.01） ；心經(jīng)穴組和心包經(jīng)穴組海馬組織中VGLUT2、EAAT2蛋白表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P50.05） 。詳見(jiàn)表2、圖3。

圖1各組大鼠海馬區(qū)突觸超微結(jié)構(gòu)透射電鏡圖（ ×15 0

Fig.1Transmisson electron microscopy images of synaptic ultrastructure in the hippocampal region of each group of rats （×15） 注：紅色框內(nèi)指示區(qū)域?yàn)橥挥|前后膜區(qū)域。

圖2各組大鼠海馬區(qū)Aβ斑塊狀沉積情況

圖3各組大鼠海馬組織VGLUT2、EAAT2蛋白條帶圖 Fig.3VGLUT2 and EAAT2 protein expression bands in hippocampal tissues among different groups of rats

3討論

突觸作為神經(jīng)元間信息傳遞的核心結(jié)構(gòu)，由突觸前膜與突觸后膜構(gòu)成，是學(xué)習(xí)記憶過(guò)程的細(xì)胞與分子生物學(xué)基礎(chǔ)。研究表明，在AD患者出現(xiàn)顯著臨床癥狀前，突觸功能障礙已然發(fā)生，其病理進(jìn)程伴隨突觸區(qū)域的異常蛋白質(zhì)聚集、突觸數(shù)量減少及突觸可塑性受損，這些改變可能是AD認(rèn)知衰退的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素[12]。

谷氨酸能神經(jīng)傳遞的改變與AD神經(jīng)精神障礙有關(guān)，是引發(fā)神經(jīng)興奮性毒性、導(dǎo)致突觸傳遞失常、影響AD學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知的重要機(jī)制之一[3]。谷氨酸的神經(jīng)毒性作用要求其穩(wěn)態(tài)必須受到嚴(yán)格調(diào)控。VGLUT表達(dá)水平的變化對(duì)谷氨酸突觸傳遞的過(guò)程有重要影響。VGLUT2是谷氨酸能神經(jīng)傳遞的關(guān)鍵突觸前標(biāo)記，負(fù)責(zé)將谷氨酸主動(dòng)包裹到神經(jīng)元突觸前囊泡中，VGLUT2的功能和表達(dá)決定了進(jìn)入囊泡的谷氨酸數(shù)量，并影響突觸前谷氨酸的釋放[4，故其被認(rèn)為是谷氨酸能傳遞受損或過(guò)度活躍的潛在病理或診斷標(biāo)志物[5]。EAAT是谷氨酸循環(huán)正常運(yùn)行的關(guān)鍵，負(fù)責(zé)把細(xì)胞外的谷氨酸攝取到神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中進(jìn)行再攝取、代謝和回收，從而防止興奮性毒性的產(chǎn)生。其中，EAAT2是EAAT中最豐富的亞型，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中約占總谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)活動(dòng)的 95% ，主要存在于星形膠質(zhì)細(xì)胞上，與谷氨酸能神經(jīng)元的活躍突觸接觸[]

本研究中， A|3_1-42| 海馬注射導(dǎo)致老年斑沉積增加，考慮細(xì)胞外Aβ過(guò)度沉積會(huì)聚集為具有神經(jīng)毒性的老年斑，也再次驗(yàn)證本次研究AD模型的成功。且A{β_1-42 海馬注射導(dǎo)致了突觸超微結(jié)構(gòu)的改變及谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2、VGLUT2的表達(dá)下降，究其原因可能與 Aβ 寡聚體的神經(jīng)毒性有關(guān)。 Aβ 是導(dǎo)致神經(jīng)退行性病變級(jí)聯(lián)反應(yīng)的初始觸發(fā)器，可造成突觸損傷并影響谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2、VGLUT2的表達(dá)。已有研究發(fā)現(xiàn)，Aβ低聚物通過(guò)多種模式削弱突觸，誘導(dǎo)突觸網(wǎng)絡(luò)異常變化，導(dǎo)致突觸喪失，破壞認(rèn)知功能，造成學(xué)習(xí)和記憶障礙[17]。更有證據(jù)表明， A3_1-42 通常是驅(qū)動(dòng)AD病理改變的主要亞型，會(huì)誘導(dǎo)EAAT2缺失，而上調(diào)EAAT2表達(dá)可以改善其認(rèn)知缺陷[18]。在APP/PS1小鼠中觀察到VGLUT2的表達(dá)明顯降低，造成突觸囊泡中谷氨酸負(fù)荷的減少及谷氨酸能突觸的丟失[19]。與此同時(shí)， Aβ 與囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體VGLUT2在突觸體上存在共定位，AD患者VGLUT2突觸體對(duì) Aβ 的免疫反應(yīng)性高于非AD患者[20]。這些發(fā)現(xiàn)共同表明， Aβ_1-42 可能通過(guò)干擾谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2VGLUT2，加速突觸功能障礙進(jìn)程，靶向EAAT2、VGLUT2或?yàn)锳D 治療提供新策略。

本研究中，電針心經(jīng)心包經(jīng)穴干預(yù)后，大鼠學(xué)習(xí)記憶能力提升， Aβ 斑塊狀沉積減少，突觸超微結(jié)構(gòu)改善，EAAT2、VGLUT2表達(dá)上升。進(jìn)一步證明了電針心經(jīng)/心包經(jīng)穴可能是通過(guò)降低Aβ沉積，調(diào)控谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2、VGLUT2的表達(dá)，改善突觸損傷，提高學(xué)習(xí)記憶能力。研究證實(shí)，針刺能夠改善AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、減少Aβ沉積、調(diào)節(jié)腦內(nèi)突觸形態(tài)結(jié)構(gòu)[21-22]。有關(guān)電針對(duì)抑郁癥模型谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體、谷氨酸受體的作用機(jī)制已被報(bào)道[23]，然而針對(duì)電針干預(yù)AD模型谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的報(bào)道尚且不多，這也是本研究的創(chuàng)新點(diǎn)之一。此外，本研究關(guān)聯(lián)了EAAT2、VGLUT2表達(dá)調(diào)控與電針效應(yīng)，提示谷氨酸能神經(jīng)傳遞可能是電針干預(yù)AD的關(guān)鍵靶點(diǎn)。然而，本研究中EAAT2、VGLUT2的表達(dá)上調(diào)是電針的直接效應(yīng)還是繼發(fā)于Aβ減少，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

流行病學(xué)數(shù)據(jù)表明，我國(guó)AD各年齡組中女性的發(fā)病人數(shù)和發(fā)病率均高于男性[24]，提示性別可能是AD發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)因素之一。其機(jī)制可能與女性激素水平變化相關(guān)，如更年期變化2。考慮雌性大鼠的動(dòng)情周期會(huì)導(dǎo)致內(nèi)源性激素水平周期性波動(dòng)，可能直接影響Aβ沉積、tau蛋白過(guò)度磷酸化、膠質(zhì)細(xì)胞激活等，實(shí)驗(yàn)中需嚴(yán)格控制動(dòng)情周期階段以排除激素波動(dòng)的混雜效應(yīng)2。因此，本研究選用雄性SD大鼠構(gòu)建AD模型，控制可能存在的混雜變量。現(xiàn)有證據(jù)雖未明確本研究中的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體存在性別依賴性，但選用雄性大鼠可最大程度保證組間基線一致性。未來(lái)研究將納入雌性AD模型，結(jié)合雌激素水平監(jiān)測(cè)，深入探討電針干預(yù)是否存在性別差異化的響應(yīng)機(jī)制。

《素問(wèn)·宣明五氣篇》曰：“心藏神，肺藏魄，肝藏魂，脾藏意，腎藏志。\"《圣濟(jì)總錄纂要·心健忘論》云：“健忘之病，本于心虛，血?dú)馑ド伲窕杵福手緞?dòng)亂而多忘也。\"故而心主神明，與癡呆這種神明疾病密切相關(guān)。《靈樞·經(jīng)脈》曰：“心手少陰之脈，起于心中，出屬心系…\"“心主手厥陰心包絡(luò)之脈，起于胸中，出屬心包絡(luò)\"此二經(jīng)均與心系相屬絡(luò)。心經(jīng)、心包經(jīng)通過(guò)目系、督脈、膀胱經(jīng)、足陽(yáng)明經(jīng)和經(jīng)別等多種方式實(shí)現(xiàn)心腦相連2。由此，心經(jīng)、心包經(jīng)直接或間接入腦，為經(jīng)絡(luò)辨證及選經(jīng)取穴奠定了基礎(chǔ)，是電針心經(jīng)/心包經(jīng)穴針刺起效的關(guān)鍵。且本課題組前期通過(guò)比較健康人電針心經(jīng)穴與心包經(jīng)穴時(shí)激活腦區(qū)的功能連接變化差異，發(fā)現(xiàn)電針心經(jīng)、心包經(jīng)穴廣泛激活的腦區(qū)主要與精神、神志、智力等密切相關(guān)2。以上研究結(jié)果均為臨床上選用心經(jīng)穴與心包經(jīng)穴治療AD提供了重要的客觀依據(jù)。本研究首次系統(tǒng)的比較了電針心經(jīng)/心包經(jīng)對(duì)AD的改善效果，為針灸治療AD的穴位選擇提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，盡管兩組無(wú)顯著差異，可能提示兩經(jīng)在AD治療中存在功能重疊，需進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，電針心經(jīng)/心包經(jīng)穴可以改善AD模型大鼠行為表現(xiàn)，揭示了其通過(guò)調(diào)控谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2、VGLUT2改善AD的潛力，為針灸治療AD提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]GAUGLER J，JAMESB，JOHNSON T，et al.2O16 Alzheimer'sdisease factsand figures[J].Alzheimer'samp;Dementia， 2O16，12（4）：459-509.

[2]蘇琴，郭敏芳，孟濤，等.線粒體自噬及其在阿爾茨海默病發(fā)病過(guò)程中作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2025，45（13）：

[3] HORAK M，BARACKOVA P，LANGORE E， et al. The extra-cellular domains of GluN subunitsplay an essential roleinprocessing NMDA receptors in the ER[J]. Frontiers in Neuro-science，2021，15：603715.

[4] KEC， SHAN S T，F(xiàn)ANG C，et al.A review on characteristicsof experimental research on acupuncture treatment for Alzheimer'sdisease： Study design[J]. Evidence-Based Complementary andAlternative Medicine，2022，2022（1）： 8243704.

[5] KEC，SHAN S T， YU JL，et al. Acupuncture for patientswith Alzheimer's disease： An evidence map of randomized con-trolled trials，systematic reviews，and meta-analysis[J]. Journal ofAlzheimer's Disease，2024，102（4）：924-942.

[6] KE C， SHAN S，TANY，et al. Signaling pathways in the treat-ment of Alzheimer's disease with acupuncture：A narrative re-view[J] Acupuncture in Medicine，2024，42（4）：216-230.

[7]吳國(guó)慶，汪子棟，唐銀杉，等.李志剛教授運(yùn)用\"通督啟神\"針?lè)ㄖ委熒窠?jīng)退行性疾病的經(jīng)驗(yàn)[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2024，44（3）： 440-444.

[8]柯超，曹洋，夏葉婉，等.淺析不同針?lè)ㄖ委煱柶澓Ｄ〉难芯窟M(jìn)展[J]湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，42（2）：337-342.

[9]美國(guó)國(guó)家研究委員會(huì).實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南[M].8版．中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)，譯.北京：科學(xué)出版社，2021.

[10]柯超，單生濤，譚艷，等.基于蛋白質(zhì)組學(xué)探討電針心經(jīng)穴對(duì)阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及作用機(jī)制[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2024，31（6）：73-79.

[11] 中國(guó)針灸學(xué)會(huì).實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用穴位名稱與定位第2部分：大鼠[J].針刺研究，2021，46（4）：351-352.

[12]PEI YA，DAVIESJ，ZHANG M，etal.The role ofsynapticdysfunction in Alzheimer's disease[J]. Journal of Alzheimer'sDis-ease， 2020， 76（1）： 49-62.

[13] 黃麗琴，張兆輝．阿爾茨海默病中的谷氨酸代謝[J].中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2022，25（12）：1569-1575.

[14] WALLEN-MACKENZIE A，NORDENANKAR K， FEJGIN K， etal.Restricted cortical and amygdaloid removal of vesicular glu-tamate transporter 2 in preadolescent mice impacts dopaminer-gicactivityand neuronal circuitry of higher brain function[J].The Journal of Neuroscience，2009，29（7）： 2238-251.

[15] PIETRANCOSTA N，DJIBO M，DAUMAS S， et al. Molecular，structural，functional，and pharmacological sitesfor vesicularglutamate transporter regulation[J].Molecular Neurobiology，2020，JI＼I）： JIIU-JITL.

[16] KOVERMANN P， ENGELS M， MuLLER F， et al. Celllar physi-ology and pathophysiology of EAAT anion channels[J].Frontiersin Cellular Neuroscience，2022，15：815279.

[17] DURAKOGLUGIL M S， WASSER C R， WONG C H， et al. Relinregulatesneuronal excitabilitythrough striatal-enriched proteintyrosine phosphatase （STEP61） and calcium permeable AMPARsinanNMDAR-dependent manner[J].The Journal ofNeuro-science，2021，41（35）： 7340-7349.

[18] WOOD O W， YEUNG JH， KWAKOWSKY A. Is EAAT2 apotential therapeutic intervention target for Alzheimer's disease？[J].Neural Regeneration Research， 2023，18（8）： 1721-1722.

[19]FAN S J，LI L， XIAN XH， etal.Ceftriaxone regulates gluta-mateproduction and vesicular assembly in presynaptic termi-nals through GLT-1 inAPP/PS1 mice[J]. Neurobiology of Learningand Memory，2021，183：107480.

[20] SOKOLOW S， LUU S H， NANDY K， et al. Preferential accu-mulation of amyloid-beta in presynaptic glutamatergic terminals（VGluT1 and VGluT2） in Alzheimer's disease cortex[J].Neurobiology of Disease，2012，45（1）：381-387.

[21]林瑤，趙百孝.基于突觸可塑性的針灸防治阿爾茨海默病的研究進(jìn)展[J].世界中醫(yī)藥，2023，18（6）：877-881.

[22] 羅泳茵，單曉倩，宋京京，等.基于神經(jīng)元細(xì)胞周期重啟探討針灸防治阿爾茨海默病的機(jī)制[J].針刺研究，2024，49（11）：1205-1212.

[23]姜默琳，盧偉.針灸通過(guò)谷氨酸/γ-氨基丁酸系統(tǒng)治療抑郁癥機(jī)制研究進(jìn)展[J]．精神醫(yī)學(xué)雜志，2022，35（3）：231-235.

[24] 王剛，齊金蕾，劉馨雅，等．中國(guó)阿爾茨海默病報(bào)告 2024[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐，2024，23（3）：219-256.

[25] UDEH-MOMOH C，WATERMEYER T， Female Brain Health andEndocrine Research consortium. Female specific risk factors forthedevelopment of Alzheimer'sdisease neuropathologyandcognitive impairment： Call for a precision medicine approach[J].AgeingResearch Reviews，2021，71：101459.

[26] 林小琦，趙新靜，吳亞雙，等．阿爾茨海默病性別差異機(jī)制研究進(jìn)展[J].實(shí)用老年醫(yī)學(xué)，2025，39（4）：420-425.

[27]殷寶，馬興莎，張亞.心經(jīng)、心包經(jīng)與心腦相關(guān)理論探討分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2017，17（A2）：191-192.

[28]石文英，李平，婁必丹，等．觀察電針健康受試者不同經(jīng)穴對(duì)Resting-state fMRI腦功能連接的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2017，35（12）： 3029-3032.

（本文編輯匡靜之）