不同補腎類中藥方含藥血清抑制乳腺癌細胞MDA-MB-231間質-上皮轉化的機制研究比較

[關鍵詞]乳腺癌；骨轉移；MDA-MB-231細胞;MC3T3-E1細胞；間質-上皮轉化；補腎類中藥 [中圖分類號]R285.5 [文獻標志碼]A [文章編號]doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.08.006

Comparative study on the mechanisms of inhibiting mesenchymal-epithelial transition in breast cancer MDA-MB-231 cells by drug-containing sera from different kidney-tonifying Chinese medicine formulas

MAO Yun！， DING Zhixun'， FU Ling'，HU Bei'er'， ZHU Shijie2*，CAO Wen1* 1.DepartmentofOncologyndHematologyheScondHospitalofHunanUniversityofhneseedicine，Changshauan 41005，China2.OncologyDeparment WangJngHospitalofhinaAcademyofhineseMedicalSiencesBeiing9China

[Abstract]Objective Toexplore theeffcacydiferencesandmolecularmechanismsof drug-containingsera from Bushenyang Formula（BSYAF）BushenyinFomula （BSYIF），andYin-yang ShuangbuFormula（YYSB）ininterveningmesenchal epithelial transition（METinbreastcancercell.Methods Aco-culturemodelofbreastcancercellsMDA-MB-231andosteoblast precursorcelsMC3T3-E1 wasestablished.Groupsincludedthecontrolgroup，modelgroup，BSYAFgroup，BSYIFgroup，and

YYSBF group.Inthecontrol group，breastcancercelswereculturedalone，whiletheothergroupsadopted theco-culturemodel The culture medium of the control group and the model group was supplemented with 10% normal serum， while that of the BSYAF， BSYIF，and YYSBF groups was supplemented with 10% corresponding drug-containing sera. After 24，48，and 72 hours of drug intervention，theviabiltyofbeastcancercellasdeterminedusingtheCCK-8assandcellmorphologywasoservedough crystalvioletstainingAfter48housofcoulture，themigrationabilityofbreastcancercellsasasessedusingawoundhealing assayandthecellcycleandapoptosisofbreastcancercellseretestedbyflowcometry.After48oursofulture，therelative mRNAexpresssd，iadi443） related protein1（Dk-1）were measuredbyqRT-PCRandWesternblotrespectively.ResultsComparedwiththecontrolgroup，the breast cancer cell viability in the model group increased （ Plt;0.05 ），thetotal cellapoptosisratedecreased （ P lt;0.05）.Cell cycle analysis showed anincrease in the number of cells in the G√M phase （ P lt;0.05）and a decrease in the number of cells in the GMG₁ and S phases P lt;0.05）.TherelativemRNAexpressionlevelsandproteinexpressionamountsofE-cad，N-cad，Cx43，andDkk-lall increased （ P^* O.05）.Comparedwiththemodel group，thecell viabilityandmigrationhealing rateintheBSYAF，BSYIF，andYYSBF groups decreased（ P lt;0.05），while the total cell apoptosis rate increased （ P- lt;0.05）.Cell cycle analysis revealed an increase in the number of cells in the G A（G₁ phase （ P K0.05） and a decrease in the G ?₂^/M phase （ Plt; O.05）.The relative mRNA expression levelsand protein expression amounts of E-cad， N-cad， Cx43， and Dkk-1 decreased （ P lt;0.05）.Conclusion Osteoblast precursor cells MC3T3-E1 promotethesurvivalofbreastcancercellMDA-MB-231throughmesenchymal-epithelialtranstion.Afterinterventionwithkidney tonifyingChinesemedicinesintheco-culturemodel，theviabilityofreastcancercellcanbeeectivelyinhibitedandapoptosis canbepromoted.ThemechanismiselatedtothedowregulationoftheexpresionofkeyproteinsandmRAs （E-cad，C4nd Dkk-1） involved in mesenchymal-epithelial transition.

[Keywords]breastcancer;bonemetastasis;MDA-MB-231cels;MC3T3-E1cels；mesenchymal-epithelialtransition sidney-tonifying Chinese medicines

骨轉移是惡性腫瘤的常見并發癥， 65%～75% 晚期乳腺癌和前列腺癌患者均會發生骨轉移。骨轉移常常伴有疼痛、高鈣血癥、病理性骨折，脊髓壓迫等骨相關事件，嚴重影響患者生活質量[2-3]。目前的治療僅能延緩骨轉移進展，尚缺乏根治性措施，研究骨微環境的變化及分子機制倍受重視。骨轉移早期階段，骨微環境和乳腺癌細胞的相互作用是發生骨轉移的重要原因，其中癌細胞和成骨細胞之間相互調控促進腫瘤細胞的定植、存活和增殖，可加速骨轉移進程[4-6]

成骨細胞通過介導間質-上皮轉化（mesenchy-malepithelialtransition，MET）促進乳腺癌細胞異位存活。骨微環境中乳腺癌細胞優先向成骨細胞周邊遷移，并最終通過異型黏附和縫隙連接進行定植。研究表明，腫瘤轉移過程中存在MET現象，過表達E-鈣黏著蛋白（E-cadherin，E-cad）的腫瘤細胞增殖能力更強，遷移性較低，易于形成轉移灶成骨細胞通過分泌膠原蛋白激活自然殺傷細胞上的白細胞關聯免疫球蛋白樣受體1，抑制自然殺傷細胞的活性，從而保護腫瘤細胞免受免疫殺傷促進骨轉移[10]

腎主骨、生髓，腎中精氣的盛衰直接影響骨細胞的功能及狀況。腎氣不足易造成癌毒侵襲，形成骨轉移瘤，故臨床常采用補腎填精、補腎壯骨、補腎健脾等法防治骨轉移[3]。如左歸丸能打破腫瘤-成骨細胞-破骨細胞的惡性循環抑制乳腺癌骨轉移[12]。吳春宇等[13研究結果顯示，溫腎壯骨方能抑制乳腺癌骨轉移溶骨性惡性循環，降低骨質破壞進程。本研究團隊總結全國名老中醫李佩文教授臨床用藥經驗時發現補腎陽方、補腎陰方、陰陽雙補方對骨轉移的療效具有差異性，其中陰陽雙補方的臨床療效更佳，能有效降低骨轉移患者血清堿性磷酸酶水平，緩解疼痛，改善生活質量[14]。本研究旨在從成骨細胞調控乳腺癌細胞的角度探索骨轉移微環境的變化，以及明確補腎陽方、補腎陰方、陰陽雙補方的療效。

1材料

1.1 細胞及動物

于維通利華動物技術有限公司購入SPF級健康的 SD大鼠40只，體質量 180～200g ，自由攝取水和食物，飼養于中國中醫科學院醫學實驗中心動物房，溫度（ 25±3 ） C ，相對濕度 55%±10%，12h 光暗交替，自由攝食飲水，每周更換2次墊料，實驗操作經中國中醫科學院醫學實驗中心動物倫理委員會審批（倫理批號：LLBH-202311040003）。人源性乳腺癌細胞MDA-MB-231、成骨前體細胞MC3T3-E1（批號：1101HUM-PUMC000014、4201MOU-CCTCC00188）購自國家生物醫學實驗細胞資源庫。

1.2 主要實驗試劑

CCK-8試劑盒（日本同仁化學研究所，批號：7635）；AnnexinV-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒（南京凱基生物科技發展有限公司，批號：KGA2431）;Tran-swell小室（美國Merck millipore公司，批號：3422）;結晶紫（上海碧云天生物技術有限公司，批號：093116170538）;胎牛血清（美國Hyclone公司，批號：SH31441）;Trizol試劑盒、RIPA裂解液、BCA蛋白濃度測定試劑盒、SDS-PAGE轉膜液（上海碧云天生物技術有限公司，批號：P0012、P2234、08645、6587H），E-cad（批號：0874-1-AP）、N-鈣黏著蛋白（N-cadherin，N-cad）（批號：30803-1-AP）縫隙連接蛋白43（Connexin43，Cx43）（批號：15386-1-AP）、Dickkopf 相關蛋白1（Dickkopf-related protein1，Dkk-1）（批號：21112-1-AP）抗體均購自美國Protein-tech公司;青霉素/鏈霉素溶液（雙抗）（美國Hyclone公司，批號：15142243）。

1.3 主要儀器

流式細胞儀（美國BectonDickinson公司，型號：CantoII）;熒光定量PCR儀、電泳儀（美國BIO-RAD公司，型號：CFX384、Mini-Protean）；顯微鏡照相系統（日本Olympus公司，型號：CKX53）;低速離心機（美國Thermo公司，型號：TD5A）；酶標儀（美國Molec-ularDevices公司，型號：SpectraMax）。

2方法

2.1 細胞培養

將MDA-MB-231細胞和MC3T3-E1細胞復蘇，分別加入含 10% 胎牛血清的DMEM Ω_?α∝ -MEM培養液置于 37°C 含 5%CO₂ 孵箱中培養， 48～72h 換液一次，待細胞匯合約 90% 時，用 0.25% 胰蛋白酶消化、傳代。待細胞生長穩定、呈對數期生長時進行實驗。

2.2含藥血清制備

從中國中醫科學院望京醫院購入補腎陽方（淫羊藿、補骨脂、肉苡蓉各 30g ）、補腎陰方（熟地黃、山茱萸、山藥各 30g ）、陰陽雙補方（熟地黃、山茱萸、山藥、淫羊藿、補骨脂、肉從蓉各 _15g 。取SPF級健康的雄性SD大鼠40只，隨機分成對照組、補腎陽方組、補腎陰方組、陰陽雙補方組4個組。根據人與大鼠體表面積折算方法[1計算后，實驗組按生藥量 9.26g/（kg?d） 給予大鼠灌胃，對照組給予同體積生理鹽水灌胃，每天1次，連續灌胃5d，第6天繼續灌胃1次，灌胃后 ¹h 采用 3% 戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈取血，取血前禁食 ^16h ，不禁水。所取全血于室溫下靜置 3h ，于 4^°C 下 3000r/min 離心 15min （離心半徑 8cm ，分離血清，將組內血清混合， 56^°C 水浴箱中滅活 30min ，細胞室內 0.22μm 濾膜過濾分裝， -80°C 冰箱保存備用，根據前期篩選， 10% 的含藥血清為最佳濃度劑量。

2.3 建立細胞模型及分組

取對數生長期的MDA-MB-231細胞和MC3T3-E1細胞進行計數，將細胞懸浮液稀釋至 5×10⁴ 個 ?/mL 建立共培養模型：MDA-MB-231細胞 1mL 并注入24孔板中，采用transwell小室（孔徑 0.4μm 蓋于24孔板上面，小室中接種相同密度及體積MC3T3-E1細胞，使得小室上、下兩面的細胞不直接接觸但允許分泌的蛋白及因子可自由通過小室；對照組中transwell小室上、下兩層均接種 5×10⁴ 個 ?/mL 的MDA-MB-231細胞 1mL ，置于恒溫培養箱中培養，顯微鏡下觀察各組小室上、下層細胞生長情況，定時更換培養基。分為對照組、模型組、補腎陽方組、補腎陰方組、陰陽雙補方組，每組設3個復孔。模型構建 24h 后，補腎陽方組、補腎陰方組、陰陽雙補方組分別在transwell小室下層加入補腎陽方、補腎陰方、陰陽雙補方 10% 的含藥血清 1mL ；對照組和模型組在tran-swell小室下層分別加人 10% DMEM培養液 1mL 。

2.4結晶紫染色觀察細胞形態

分組參照“2.3”，給藥干預 ^48h 后，行結晶紫染色。棄去培養液，并用PBS溶液清洗3遍。在各組中加入 1mL 4% 多聚甲醛，固定 8～10min 。多聚甲醛固定后棄去廢液，PBS清洗 3min ，重復3次，加入0.1% 結晶紫溶液，在室溫下靜置 8min ，用超純水反復清洗多余的結晶紫染料，室溫下晾干，并放置在倒置顯微鏡下觀測并隨機挑選5個視野進行觀測。

2.5 CCK-8法測定細胞活力

分組參照\"2.3”，給藥干預 24，48，72h 后，棄去培養基，加入CCK-8工作液， 培養箱避光孵育 2h ，酶標儀檢測 450nm 波長處各孔OD值。按照以下公式：細胞增殖率 （實驗組OD值-對照組OD值）/對照組OD值 ×100% 。

2.6細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力

分組參照“2.3”，MDA-MB-231細胞接種24孔板中，建立共培養模型后待貼壁生長整個底部時，使用 200μL 槍頭垂直于板面在24孔板中劃出直徑約 1mm 的直線，PBS清洗24孔板以洗去游離細胞，分組加入含藥血清進行培養，在劃痕后的0、24、^48h 分別在顯微鏡下拍照記錄每孔劃痕直徑。

2.7流式細胞儀檢測細胞凋亡和周期

分組參照“2.3”，給藥干預 ^48h 后，檢測MDA-MB-231細胞凋亡和周期。細胞凋亡：采用不含EDTA胰酶消化并搜集細胞，PBS洗滌2次， 500μL 的BindingBuffer懸浮細胞， 5μL Annexin ΔV -FITC 混勻后，再加入 5μL Propidium Iodide 混勻，室溫避光反應 10min ，上機檢測。細胞周期：采用不含EDTA胰酶消化并搜集細胞，PBS洗滌細胞2次，調整細胞濃度為 1×10⁶/mL，70% 冷乙醇 500μL 固定 2h，4°C 保存， 100μL RNase A 37^°C 水浴 30min，400μL PI染色混勻， 4‰ 避光 30min ，上機檢測。

2.8Westernblot檢測間質-上皮轉化相關蛋白表 達水平

分組參照“2.3”，給藥干預 ^48h 后，棄掉培養液，PBS漂洗2次，加人 300μL 細胞裂解液RIPA，反復凍融裂解3次，按照BCA-200蛋白定量試劑盒說明書進行蛋白定量，蛋白經SDS-PAGE凝膠電泳分離后，轉移至PVDF膜上用封閉液封閉后，分別加入 1：1000 的各抗體，加入1：10000HRP標記的羊抗兔和羊抗鼠二抗，TBST漂洗后ECL顯色，結果用圖像分析軟件ScionImagebeta4.0分析灰度值。

2.9qRT-PCR檢測間質-上皮轉化相關基因表達水平

分組參照\"2.3”，給藥干預 ^48h 后進行qRT-PCR檢測。提取細胞總RNA：待分組給藥干預 ^48h 后，棄掉培養液，采用RNAisoPlus提取MC3T3-E1總 RNA_c RNA濃度及純度檢測：用RNase-free水調零后，將樣品取 1μL 稀釋50倍在微量核酸儀器上進行測量，記錄A260/A280、260/230值及濃度。選取

A260/A280值 1.8～2.1…260/230 值大于2.0的樣品。逆轉錄反應制備cDNA：按照TaKaRaPrimeScriptTMReagentKit說明書合成cDNA -20^°C 保存備用。PCR擴增cDNA：按照SYBRPremixExTaqTMII說明書添加PCR反應體系，反應條件為 95^°C 預變性 30s ，95 C 變性5s，60 C 退火31s，進行40個循環擴增目的基因，檢測相關基因相對表達水平，合成的引物序列見表1。

表1qRT-PCR的引物序列

Table 1 Primer sequences for qRT-PCR

2.10 統計學分析

運用SPSS27.0軟件進行統計分析，計量結果以 \"形式顯示。若計量資料服從正態分布且方差齊，多組間比較行單因素方差分析，兩兩比較行獨立樣本 χ_t 檢驗;方差不齊時兩兩比較行Dunnett'sT3檢驗，不服從正態分布時采用非參數秩和檢驗，以 Plt; 0.05表示差異有統計學意義。

3結果

3.1各組細胞形態學觀察

對照組MDA-MB-231細胞呈貼壁生長狀態，細胞呈梭形、胞體圓潤透亮，分布均勻；模型組中MDA-MB-231細胞生長速度加快，細胞密度增加。補腎陽方組、補腎陰方組較模型組MDA-MB-231細胞數目減少，細胞間連接減少；陰陽雙補方組MDA-MB-231細胞數目明顯減少更為明顯，細胞間連接減少，胞體皺縮、空隙增加，培養液中可見少量絮狀漂浮的細胞碎片。詳見圖1。

3.2 各組細胞活力比較

與對照組比較，24、48、72h時模型組MDA-

圖1補腎類中藥方影響乳腺癌細胞形態（結晶紫染色， ×200 ） Fig.1Effects of the kidney-tonifying CM formulas on the morphology of breast cancer cells （crystal violet staining， ×200 ）

MB-231細胞活力均明顯升高 （Plt;0.05） 。與模型組比較 ^{24，48，72h} 時補腎陽方組、補腎陰方組、陰陽雙補方組均不同程度抑制乳腺癌細胞活力 （Plt;0.05） 。詳見表2。

3.3 各組細胞遷移能力比較

與對照組比較，模型組 ^48h 細胞遷移愈合率增強 （Plt;0.05） 。與模型組比較，補腎陽方組、補腎陰方組、陰陽雙補方組 ^24，48h 細胞遷移愈合率降低（Plt;0.05） 。詳見圖2。

表2各組MDA-MB-231細胞增殖率情況

Table2The proliferation ratesof MDA-MB-231 cells in each group

注：與對照組比較， ^*Plt;0.05 ；與模型組比較， ^#Plt;0.05

圖2補腎類中藥方抑制乳腺癌細胞的遷移情況

Fig.2Inhibitoryeffects of kidney-tonifying CM formulas on the migration of breast cancer cells

注：與對照組比較， ^*Plt;0.05 ;與模型組比較， ^*Plt;0.05 （20

圖3補腎類中藥方促進乳腺癌細胞凋亡

Fig.3Promoting efects of kidney-tonifying CM formulas on the apoptosis of breast cancer cells

3.4各組細胞凋亡率比較

與對照組比較，模型組細胞晚期凋亡率和總凋亡率下降（ （Plt;0.05） ；與模型組比較，干預 ^48h 后補腎陽方組、補腎陰方組、陰陽雙補方組晚期凋亡率和總凋亡率均升高， （Plt;0.05） ，陰陽雙補方組早期凋亡率升高 （Plt;0.05） 。詳見圖3表3。

3.5 各組細胞周期比較

與對照組比較，MDA-MB-231細胞模型組 G₂/ M期增加 （Plt;0.05） ！ G₀/G₁ 期、S期減少 （Plt;0.05） 。與

表3各組乳腺癌細胞凋亡率比較

Table 3Comparison of apoptosis rates in each group of breast cancer cells

注：與對照組比較， ^*Plt;0.05 ；與模型組比較， ^*Plt;0.05

圖4補腎類中藥方阻滯乳腺癌細胞周期

Fig.4Blocking effects of kidney-tonifying CM formulas on the cell cycleof breast cancer cells

模型組比較，補腎陽方組、陰陽雙補方組MDA-MB-231細胞 G₀/G₁ 期均增加（ Plt;0.05 ）， G₂/M 期細胞均降低 Plt;0.05） ；補腎陽方組MDA-MB-231細胞S期升高 （Plt;0.05） ，陰陽雙補方組MDA-MB-231細胞S期降低 （Plt;0.05） ）。詳見圖4、表4。

表4各組乳腺癌細胞周期情況比較

Table 4 Comparison of cell cycle status of breast cancer cells among different groups

注：與對照組比較， ^*Plt;0.05 ；與模型組比較， ^#Plt;0.05， □

3.6各組細胞間質-上皮轉化關鍵蛋白表達水平 比較

與對照組比較，模型組MDA-MB-231細胞的E-cad 、Cx43、Dkk-1 蛋白及MC3T3-E1細胞的 N- cad蛋白表達均升高 （Plt;0.05） 。與模型組比較，補腎陽方組、補腎陰方組、陰陽雙補方組干預 ^48h 后，MDA-MB-231細胞的 _{E-cad，Cx43，Dkk-1} 蛋白及MC3T3-E1細胞表達的 N-cad 蛋白表達均降低（ Plt; 0.05）。詳見圖5。

3.7各組細胞間質-上皮轉化關鍵基因相對表達水 平比較

與對照組比較，模型組MDA-MB-231細胞的_{E-cad，Cx43，Dkk-1} 蛋白，MC3T3-E1細胞的N-cad蛋白表達升高 （Plt;0.05） 。與模型組比較，補腎陽方組、補腎陰方組、陰陽雙補方組干預 ^48h 后MDA-MB-231細胞E-cad、 Cx43 、Dkk-1mRNA表達降低0 Plt;0.05 ，MC3T3-E1細胞N-cadmRNA表達降低（Plt;0.05） 。詳見表5。

表5各組間質-上皮轉化關鍵基因mRNA相對表達水平的影響

Table5Effects on relative mRNA expression levels of key genes in mesenchymal-epithelial transition among different groups

注：與對照組比較， ^*Plt;0.05 ；與模型組比較， ^*Plt;0.05 □

4討論

中醫藥防治乳腺癌骨轉移確有療效，能夠早期預防骨轉移的發生，延緩骨轉移進展，改善患者生活質量]。中醫藥對骨轉移的調節作用呈多靶點、多途徑的特點，前期研究發現淫羊藿-肉從蓉可以通過干預間隙連接、黏附連結等方式影響乳腺癌細胞、成骨細胞的存活、分化和成熟等，并對E-cad、N-cad、Dkk-1等基因及其表達的蛋白具有調節作用[18]。

圖5補腎類中藥方對間質-上皮轉化關鍵蛋白的影響

Fig.5Effectsofkidney-tonifyingCMformulasonkeyproteinsinmesenchymal-epithelial transition 注：與對照組比較， ^*Plt;0.05 ；與模型組比較， ^#Plt;0.05， □

骨微環境中成骨細胞誘導乳腺癌細胞MET轉化，促進癌細胞的定植和存活[]。在骨轉移早期階段，原發灶癌細胞由上皮表型轉化為間充質表型賦予腫瘤轉移和侵襲能力[20]。癌細胞定植于骨微環境后，成骨細胞誘導癌細胞MET轉化以促進異位存活，表現在E-cad Cx43 、N-cad等蛋白的表達變化[21-22]。乳腺癌微轉移灶優先分布于成骨細胞周圍，而成骨細胞的數量隨著腫瘤負荷的增加而減少[23]；成骨細胞促進乳腺癌細胞在小鼠骨生態位中定植，成骨細胞表達N-cad和癌細胞表達E-cad通過異型連接的方式促進癌細胞在局部的黏附、存活。研究表明，E-cad缺失減弱遠處器官轉移灶向外生長的能力，乳腺癌微轉移數量減少15倍。近年研究表明，成骨細胞下調雌激素受體水平加速癌細胞定植于骨，誘導癌細胞高表達E-cad形成MET轉化，并賦予骨轉移中癌細胞再次轉移至其他臟器的能力[24-25]。Cx43 在MET過程中具有重要作用，KAZAN等2發現過表達 Cx43 能上調E-cad的表達，癌細胞和成骨細胞接觸區域有較強的 Cx43 表達，成骨細胞通過Cx43 使 Ca²⁺ 定向流入細胞內促進癌細胞定植。此外，研究發現具有溶骨性骨轉移特征的乳腺癌細胞和肺癌細胞均高表達Dkk-1，當敲除Dkk-1后能夠加速成骨細胞的成熟[27]。本研究建立MDA-MB-231細胞和MC3T3-E1細胞共培養模型，結果顯示成骨細胞促進乳腺癌細胞存活、減少細胞凋亡，MDA-MB-231細胞 G₂/M 期細胞增多， G₀/G₁ 期、S期細胞減少，促進E-cad、N-cad Cx43 和Dkk-1蛋白和mR-NA相對表達水平。

本研究中陰陽雙補方由淫羊藿、補骨脂、肉從蓉、熟地黃、山茱萸、山藥等六味藥組成，而補腎陽方包含淫羊藿、補骨脂和肉灰蓉，補腎陰方包含熟地黃、山茱萸和山藥。補腎類中藥能抑制乳腺癌細胞活性、促進凋亡，如陰陽雙補方抑制癌細胞活力，阻滯癌細胞在 G（G₁ 期，而S期 ?_?G₂/M 期細胞比例降低，能夠降低 和 Cx43 蛋白和mRNA表達，表明補腎類中藥對乳腺癌癌細胞的MET轉化具有抑制作用，而不同補腎類方防治骨轉移療效具有一定的差異性。WU等28采用溫腎壯骨方含藥血清干預成骨細胞和破骨細胞后，能阻止Jagged1蛋白/Notch通路之間的信號串擾，延緩乳腺癌骨轉移進展。陳雪珍等2探討補腎活血方干預骨轉移病灶，結果表明補腎活血方通過抑制磷酸肌醇3-激酶蛋白激酶B信號通路削弱破骨細胞的活性和癌細胞發生轉移的能力來治療乳腺癌骨轉移。

綜上，本研究探討成骨細胞促進乳腺癌細胞存活的機制及補腎類中藥的干預作用，結果表明乳腺癌細胞MDA-MB-231和成骨前提細胞MC3T3-E1共培養通過MET轉化促進腫瘤細胞存活；補腎類中藥抑制乳腺癌細胞活力、促進凋亡，機制可能與降低 E-cad，N-cad，Dkk-1，Cx43 蛋白和mRNA表達相關。

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