八正散對(duì)慢性尿路感染大鼠的改善作用及機(jī)制研究

中圖分類號(hào)R965 文獻(xiàn)標(biāo)志碼A 文章編號(hào)1001-0408（2025）20-2525-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.20.07

Improvement effects and mechanism of Bazheng powder on chronic urinary tract infection in rats

XI Huirong1，LI Xiaofeng2，JIANG Xiaolei1，LI Jing'，MA Zheng'an1，LI Xixiang1，2（1.Dept.of Pharmacy，Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China;2.Collge of Pharmacy，Gansu University of Chinese Medicine，Lanzhou 730o00，China）

ABSTRACTOBJECTIVETo investigate theimprovement efectsanditsmechanismof Bazheng powderonchronic urinarytract infection（CUTI）inducedbyEscherichiacoli inrats.METHoDs Therats weredivided into normalcontrolgroup，modelgroup， levofloxacin group （45mg/kg ）and Bazheng powder group （4.95g/kg） ，with 10 rats in each group. Except for the normal control group，other groups were administered an intravesical injection of Escherichia coli suspension （1×10⁸cfu/mL ）via the urethra to establish CUTImodel；atthesametime，rats ineach groupwereadministeredthecorresponding medicinal solutionorwaterby gavageonceadayfor4consecutive weks.Afterthelastmedication，bloodroutinetests（whitebloodcellcountandlymphocyte percentage），the levels of serum inflammatory factors [interleukin- 1β （IL-1β），IL-6，IL-8，tumor necrosis factor- α （TNF- α ）]， andimmune indicators[CD4，CD8，secretoryimmunoglobulinA（SIgA）]，renalfunctionindicators[cystatin C（Cys-C），α1- microglobulin（αl-MG），ureaandcreatinine]werealldetermined；thepathologicalchangesinrenalandbladdertisuesinrats were observed. The protein expressons of Toll-like receptor 4（TLR4），nuclear factor- κB 0 NF-κB ），and nucleotide-binding domain leucine-rich repeat and pyrin domain-containing receptor 3（NLRP3）inrat blader tisues were detected.RESULTS Compared with thenormal control group，the levels of IL 1β ，IL-6，IL-8，TNF- α ，CD8，Cys-C，αl-MG，ureaand creatinine in serum，aswell as the protein expressions of TLR4，NF- σ_κB andNLRP3in bladdertissues，were significantly elevated inthemodel group （ Plt;0.05 ）.Conversely，the levels of CD4 and SIgA were significantly decreased Plt;0.05 ）.Pathological changes，such as extensiveinfitrationof inflammatorycels，wereobservedinbothrenalandbladdertisues.Comparedwiththemodelgroup，the above quantitative indicators in the Bazheng powder group were significantly improved （ （Plt;0.05 ），with no obviousinflammatory lesionsobserved ineitherrenal or blader tisues.CONCLUSIONSBazheng powdercan aleviate inflammatoryreactionand

improvetheimmunefunctionof CUTIrats， andits mechanism mayberelatedtotheinhibition ofTLR4/NF- κB/ NLRP3 signaling pathway.

KEYWORDSBazheng powder； chronic urinary tract infection;inflammatory reaction；immune function;Escherichiacoli;TLR4/NF- ?κB， /NLRP3 signaling pathway

尿路感染是臨床常見的泌尿系統(tǒng)感染性疾病，主要是由于細(xì)菌、真菌等病原體在尿路中異常生長(zhǎng)、繁殖，侵犯黏膜或組織，繼而引起的炎癥性疾病。尿路感染根據(jù)病情可分為急性尿路感染和慢性尿路感染（chronicurinarytractinfection，CUTI），其中CUTI主要由急性感染久治不愈所致，病情反復(fù)且病程較長(zhǎng)，若不及時(shí)治療可誘發(fā)膿毒血癥和腎衰竭，甚至危及患者生命安全[]。現(xiàn)代研究表明，大腸埃希菌是CUTI的常見致病菌，約占其致病菌總數(shù)的 70%～90% 3]。目前，臨床治療CUTI的一線藥物為抗菌藥物，但長(zhǎng)期使用易出現(xiàn)細(xì)菌耐藥的現(xiàn)象，而中藥在治療尿路感染方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，可緩解尿路感染癥狀，并降低復(fù)發(fā)率[4。

八正散出自《太平惠民和劑局方》，是治療濕熱淋證的代表方，由瞿麥、篇蓄、車前子等多味中藥組成，具有清熱利濕、通淋止痛的功效，被廣泛用于尿路感染、前列腺炎、膀胱炎等泌尿系統(tǒng)疾病的臨床治療[5-。研究發(fā)現(xiàn)，Toll樣受體4（Toll-likereceptor4，TLR4）/核因子 κB （nuclear factor- κB ，NF- σ_κB ）/核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域富含亮氨酸重復(fù)序列和含熱蛋白結(jié)構(gòu)域受體3（nucleotide-binding domain leucine-rich repeat and pyrin domain-containingreceptor3，NLRP3）信號(hào)通路在尿路感染相關(guān)炎癥反應(yīng)的發(fā)生中具有重要作用[-9。因此，調(diào)控上述信號(hào)通路可能是治療尿路感染的重要策略。基于此，本研究以大腸埃希菌誘導(dǎo)構(gòu)建CUTI大鼠模型，并基于TLR4/NF-kB/NLRP3信號(hào)通路探究八正散對(duì)該模型的改善作用及潛在機(jī)制，以期為八正散治療尿路感染的科學(xué)內(nèi)涵闡釋及CUTI的臨床治療提供參考。

1材料

1.1 主要儀器

PocH-100iV型血細(xì)胞分析儀、KNF-100型尿液分析儀均購(gòu)自希森美康醫(yī)用電子（上海）有限公司；BS-240VET型動(dòng)物生化分析儀購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；CX43型電子顯微鏡購(gòu)自日本Olympus公司；RaytoRT-6100型酶標(biāo)儀購(gòu)自深圳杜雷生命科學(xué)股份有限公司；L-500型臺(tái)式高速離心機(jī)購(gòu)自湘潭湘儀儀器有限公司；HGZF-101-1型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱購(gòu)自上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司。

1.2主要藥品與試劑

八正散組方飲片滑石、川木通、篇蓄、瞿麥、車前子、梔子、大黃、甘草（批號(hào)分別為220901A、22053105、221109、211202、230401、230101、230405、230401）均由甘肅省中醫(yī)院中藥房提供，由甘肅省中醫(yī)院藥學(xué)部李喜香主任中藥師鑒定均為真品。

Luria-Bertani培養(yǎng)基（批號(hào) CM0003 ）購(gòu)自北京雷根生物技術(shù)有限公司；左氧氟沙星片[陽(yáng)性對(duì)照藥，批號(hào)22070109，規(guī)格 0.5g （按 C₁₈H₂₀FN₃O₄ 計(jì)）]購(gòu)自四川海匯藥業(yè)有限公司；尿素、肌酐檢測(cè)試劑盒（批號(hào)分別為

141321008、141123021）均購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；白細(xì)胞介素1β（interleukin- ^{1|β，IL-1β} ）、IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子 ∝ （tumor necrosis factor- ∝ ，TNF- σ?α∝ ）、CD4、CD8、胱抑素C（cystatinC，Cys-C）、分泌型免疫球蛋白A（secretory immunoglobulin A，SIgA）、αl-微球蛋白（ α1 -microglobulin， α1 -MG）試劑盒（批號(hào)分別為E20231024-30206B、E20231024-30219B、E20231024-30221B、E20231024-31063B、E20240109-31696B、E20240109-31697B、E20240109-30230B、E20240109-30624B、E20240109-30142B）均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；鼠抗TLR4單克隆抗體（貨號(hào)66350-1-Ig）購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；兔抗NLRP3、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）單克隆抗體（貨號(hào)分別為ab263899、ab181602）均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；兔抗NF- σ?κB 單克隆抗體（貨號(hào)#8242）購(gòu)自美國(guó)CST公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批號(hào)AS1058）購(gòu)自武漢阿斯本生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本研究所用動(dòng)物為6周齡的SPF級(jí)雌性SD大鼠，共40只，體重 160～180g ，購(gòu)自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（甘）2020-0002。所有大鼠均飼養(yǎng)于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室（室溫 18～22^°C 、相對(duì)濕度45%～55% ）內(nèi)，自由攝食、飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)7d。本研究方案經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查（編號(hào)SY2023-608）。

1.4細(xì)菌

大腸埃希菌（批號(hào)2203311）由商城北納創(chuàng)聯(lián)生物科技有限公司提供。

2 方法

2.1大腸埃希菌菌液配制

將大腸埃希菌接種于 25mL 新鮮Luria-Bertani培養(yǎng)基中，于 37^°C?250r/min 的恒溫培養(yǎng)振蕩器中培養(yǎng) 8h 收集菌液，以 4500r/min 離心 5min ，棄上清液；取細(xì)菌沉淀，用無菌磷酸鹽緩沖液（PBS）稀釋，備用。臨用前，用無菌PBS將菌液密度調(diào)整至 1×10⁸cfu/mL^[10] 。

2.2 藥液制備

取根據(jù)八正散組方，取滑石、川木通、篇蓄、瞿麥、車前子、梔子、大黃各 g_g 和甘草 6g ，混合，加10倍量水，浸泡 15～20min 后煎煮 45min ，過濾;藥渣再加10倍量水，煎煮 45min ，過濾；合并兩次濾液，濃縮，制成質(zhì)量濃度為 0.78g/mL （以生藥量計(jì)）的八正散藥液，于 -4^°C 下密封保存，備用。

2.3 分組、造模與給藥

將大鼠分為正常對(duì)照組、模型組、左氧氟沙星組（45mg/kg ，劑量根據(jù)臨床等效劑量換算，臨用時(shí)以水為溶劑配制成混懸液）和八正散組（ 4.95g/kg ，劑量參考文獻(xiàn)[11]設(shè)置，且前期少量樣本預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)該劑量作用效果良好），每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠直接經(jīng)尿道向膀胱內(nèi)注射大腸埃希菌菌液構(gòu)建CUTI模型，具體操作如下[12]：大鼠禁水不禁食 12h 后麻醉，將尿道口消毒，插入一次性導(dǎo)尿管（距離尿道口 2～3cm ），用一次性注射器將 1mL 大腸埃希菌菌液 （1×10⁸cfu/mL ）緩慢注人導(dǎo)尿管中，結(jié)扎尿道口 1～2h;1 周后同法注入菌液，次日檢測(cè)各組大鼠尿常規(guī)，當(dāng)造模大鼠尿液中白細(xì)胞數(shù)量較正常對(duì)照組大鼠明顯升高時(shí)，表明造模成功。造模同時(shí)，各藥物組大鼠灌胃相應(yīng)藥液，模型組和正常對(duì)照組大鼠灌胃等體積水，每天1次，連續(xù)4周。造模過程中，模型組和八正散組各有2只大鼠死亡，左氧氟沙星組有1只大鼠死亡，正常對(duì)照組無大鼠死亡，后續(xù)每組納人8只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.4一般情況觀察

給藥期間，觀察各組大鼠一般行為學(xué)表現(xiàn)，包括毛發(fā)、精神狀態(tài)、排尿次數(shù)、尿液顏色、大便性狀等；每周稱量各組大鼠體重，并記錄。

2.5 標(biāo)本采集

末次給藥后，采集各組大鼠眼眶血，血樣置于裝有肝素鈉的一次性抗凝EP管中，用于大鼠血常規(guī)指標(biāo)的檢測(cè)；隨后采集其腹主動(dòng)脈血，血樣于室溫下靜置1h后，以 3000r/min 離心 15min ，分離上層血清，用于大鼠炎癥、免疫、腎功能相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。采血完成后，分離各組大鼠的腎臟和膀胱，將左腎組織和一半的膀胱組織用 4% 多聚甲醛溶液固定，用于蘇木精-伊紅（HE）染色和免疫組化染色；剩余膀胱組織于 -80^°C 下保存，用于相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)。

2.6 血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)

取\"2.5\"項(xiàng)下抗凝全血樣品適量，采用血細(xì)胞分析儀檢測(cè)各組大鼠全血中白細(xì)胞數(shù)量和淋巴細(xì)胞百分比。

2.7血清中炎癥、免疫、腎功能相關(guān)指標(biāo)水平檢測(cè)

取\"2.5\"項(xiàng)下血清樣品適量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書方法操作，采用酶標(biāo)儀檢測(cè)血清中炎癥因子（IL-1β、IL-6、IL-8、TNF- α_?∝ ）、免疫指標(biāo)（CD4、CD8、SIgA）、腎功能指標(biāo)（Cys-C、 α1 -MG）水平。另外，取“2.5\"項(xiàng)下血清樣品適量，采用動(dòng)物生化分析儀檢測(cè)大鼠血清中另兩種腎功能指標(biāo)（尿素和肌酐）水平。

2.8腎臟和膀胱組織的病理學(xué)形態(tài)觀察

取“2.5”項(xiàng)下各組大鼠經(jīng) 4% 多聚甲醛溶液固定的腎臟和膀胱組織適量，經(jīng)石蠟包埋后，切片（厚度5μm ）;取部分切片，經(jīng)二甲苯脫蠟、乙醇梯度脫水后進(jìn)行HE染色，再經(jīng)脫水、封片后，采用顯微鏡觀察其腎臟和膀胱組織的病理學(xué)變化。

2.9 膀胱組織中TLR4、NF- κ_κB NLRP3蛋白表達(dá)水平檢測(cè)

采用免疫組化法進(jìn)行檢測(cè)。取“2.8”項(xiàng)下各組大鼠（每組3只）的膀胱組織切片，經(jīng)脫蠟至水和抗原修復(fù)、阻斷后，加入TLR4、NF- κB 、NLRP3一抗（稀釋度均為1：

100），于 4^°C 下孵育過夜;加人相應(yīng)二抗（稀釋度為1：100），于室溫下孵育 20min ；以二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，經(jīng)蘇木精復(fù)染、分化、返藍(lán)、封片后，采用顯微鏡觀察并拍照。采用ImageJ軟件測(cè)定每個(gè)視野下各蛋白陽(yáng)性染色（呈棕色）的平均光密度值，以表示相應(yīng)蛋白的表達(dá)水平。

采用Westernblot法進(jìn)行檢測(cè)。取“2.5\"項(xiàng)下各組大鼠（每組3只）凍存的膀胱組織適量，加入RIPA裂解液裂解、勻漿，提取總蛋白，再以BCA法測(cè)定蛋白濃度。蛋白經(jīng)變性處理后，進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜和封閉，加入TLR4、NF- σ_κB NLRP3、GAPDH一抗（稀釋度均為1：1000），于 4^°C 下孵育過夜；加入相應(yīng)二抗（稀釋度為1：1000），于常溫下孵育1h；經(jīng)化學(xué)發(fā)光試劑顯色后，置于凝膠成像系統(tǒng)中成像。采用ImageJ軟件分析各蛋白的條帶灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白（GAPDH）的灰度值比值表示目的蛋白的表達(dá)水平。

2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。滿足正態(tài)分布的計(jì)量資料以 表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05 。

3 結(jié)果

3.1八正散對(duì)CUTI大鼠一般情況的影響

正常對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)良好，活動(dòng)敏捷，毛發(fā)光亮，排尿次數(shù)和尿液顏色均正常；模型組大鼠精神萎靡，動(dòng)作遲緩，毛發(fā)豎立、光澤性差，排尿次數(shù)明顯增加，尿液顏色發(fā)黃，大便呈稀便狀；左氧氟沙星組和八正散組大鼠精神狀態(tài)較好，排尿次數(shù)、尿液顏色和糞便狀態(tài)整體向好。實(shí)驗(yàn)期間，各組大鼠體重呈正常增長(zhǎng)趨勢(shì)，且各組間體重差異不大。

3.2 八正散對(duì)CUTI大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠全血中白細(xì)胞數(shù)量顯著升高（ （Plt;0.05 ），而淋巴細(xì)胞百分比的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Pgt;0.05 ；與模型組比較，左氧氟沙星組和八正散組大鼠全血中白細(xì)胞數(shù)量、淋巴細(xì)胞百分比雖有一定變化，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Pgt;0.05 。結(jié)果見表1。

表1各組大鼠血常規(guī)指標(biāo)比較

a：與正常對(duì)照組比較， Plt;0.05：6 與模型組比較， ?Plt;0.05 。

3.3八正散對(duì)CUTI大鼠血清中炎癥、免疫、腎功能相關(guān)指標(biāo)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF- α?α∝ 、CD8、Cys-C、 α1 -MG、尿素、肌酐水平均顯著升高 （Plt;0.05） ），CD4、SIgA水平均顯著降低（ Plt;

0.05）;與模型組比較，左氧氟沙星組和八正散組大鼠血清中上述指標(biāo)水平均顯著逆轉(zhuǎn) （Plt;0.05） 。結(jié)果見表2～ 表4。

表2各組大鼠血清中炎癥因子水平比較 pg/mL）

a：與正常對(duì)照組比較， Plt;0.05：6 ：與模型組比較， Plt;0.05

表3各組大鼠血清中免疫相關(guān)指標(biāo)水平比較 n=8 ）

a：與正常對(duì)照組比較， Plt;0.05 ；b：與模型組比較， Plt;0.05

表4各組大鼠血清中腎功能相關(guān)指標(biāo)水平比較 n=8 ）

a：與正常對(duì)照組比較， .Plt;0.05：6 與模型組比較， Plt;0.05，

3.4八正散對(duì)CUTI大鼠腎臟和膀胱組織病理學(xué)形態(tài)的影響

腎臟組織HE染色結(jié)果（圖1）顯示，正常對(duì)照組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰，腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)邊界清晰；模型組大鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性、壞死，可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和炎癥灶，且存在腎小球萎縮現(xiàn)象；左氧氟沙星組和八正散組大鼠腎臟無明顯炎癥性病變，可見正常的腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)、腎盂、腎盞等結(jié)構(gòu)。

膀胱組織HE染色結(jié)果（圖2）顯示，正常對(duì)照組大鼠膀胱組織結(jié)構(gòu)清晰，黏膜層結(jié)構(gòu)完整、表面光滑，無明顯病理學(xué)變化；模型組大鼠膀胱上皮細(xì)胞明顯增厚、薄厚不均，固有層可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；左氧氟沙星組和八正散組大鼠膀胱上皮細(xì)胞正常，無明顯炎癥性病變。

3.5八正散對(duì)CUTI大鼠膀胱組織中TLR4、NF- κ_κB 、NLRP3蛋白表達(dá)的影響

免疫組化法結(jié)果（圖3、表5）顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠膀胱組織中TLR4、NF- κB 、NLRP3蛋白陽(yáng)性染色的平均光密度值均顯著升高（ （Plt;0.05 ；與模型組比較，左氧氟沙星組和八正散組大鼠膀胱組織中上述蛋白陽(yáng)性染色的平均光密度值均顯著降低 （Plt;0.05） ）°

Westernblot法結(jié)果（圖4、表6）顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠膀胱組織中TLR4、NF- κB 、NLRP3蛋白的表達(dá)水平均顯著升高 （Plt;0.05 ）;與模型組比較，左氧氟沙星組和八正散組大鼠膀胱組織中上述蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（ ?Plt;0.05 ）。

4討論

流行病學(xué)調(diào)查顯示，尿路感染在全球范圍內(nèi)造成了巨大的健康和經(jīng)濟(jì)損失，約 25% 有尿路感染病史的人群會(huì)進(jìn)展為慢性感染[13]。尿路感染屬中醫(yī)學(xué)\"淋證\"范疇，與下焦?jié)駸崽N(yùn)結(jié)、膀胱氣化不利有關(guān)，宜以清熱、利水、通淋為主要治則[14]。其動(dòng)物模型建立方法多樣，傳統(tǒng)的有單側(cè)輸尿管半結(jié)扎 ?⁺ 膀胱內(nèi)注射細(xì)菌 夾閉尿道口[15]、下腹部切開注射大腸埃希菌 + 夾閉尿道口[等，但上述方法易導(dǎo)致動(dòng)物死亡，造模成功率低。因此，本研究采用直接經(jīng)尿道向膀胱內(nèi)注射大腸埃希菌菌液的方法構(gòu)建CUTI模型，以探討八正散的作用及機(jī)制。

紅色箭頭：腎小球萎縮；黑色箭頭：炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

圖1各組大鼠腎臟組織病理學(xué)變化的顯微圖（HE染色）

黑色箭頭：上皮細(xì)胞增厚；紅色箭頭：固有層炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

圖2各組大鼠膀胱組織病理學(xué)變化的顯微圖（HE染色）

圖3各組大鼠膀胱組織中TLR4、NF- ??κB 、NLRP3蛋白表達(dá)的免疫組化顯微圖

表5各組大鼠膀胱組織中TLR4、NF- ??κB NLRP3蛋白陽(yáng)性染色的平均光密度值比較 ）

a：與正常對(duì)照組比較， Plt;0.05：6 與模型組比較， Plt;0.05 O

圖4大鼠膀胱組織中TLR4、NF- κ_κB NLRP3蛋白表達(dá)的電泳圖

表6大鼠膀胱組織中TLR4、NF- ??κB 、NLRP3蛋白表達(dá)水平比較 0

a：與正常對(duì)照組比較， Plt;0.05：0 ：與模型組比較， Plt;0.05， 0

尿路感染主要發(fā)生在尿道，但感染控制不及時(shí)會(huì)導(dǎo)致炎癥蔓延，引發(fā)逆行感染，進(jìn)而侵襲腎臟。Cys-C是評(píng)估腎功能的重要指標(biāo)，主要反映腎小球的濾過功能α1-MG是一種糖蛋白，經(jīng)腎小球?yàn)V過，到達(dá)腎小管后被重吸收和分解；當(dāng)血液中α1-MG水平出現(xiàn)異常，則提示腎臟發(fā)生損傷[18]。本研究結(jié)果顯示，造模后，模型大鼠血清中尿素、肌酐、Cys-C、 α1 -MG水平均較正常大鼠顯著升高，腎臟和膀胱組織均可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；經(jīng)八正散干預(yù)后，模型大鼠上述定量分析指標(biāo)均顯著逆轉(zhuǎn)，病理學(xué)改變明顯好轉(zhuǎn)，提示八正散對(duì)大鼠CUTI具有明顯的改善作用。

在病原體刺激下，泌尿系統(tǒng)可能出現(xiàn)劇烈的炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生包括TNF- α_?αααα_?βαα 、IL-6、IL-8、IL-1β在內(nèi)的多種促炎因子，這些炎癥因子能夠引起細(xì)胞組織損傷，同時(shí)可反作用于相關(guān)信號(hào)通路，從而導(dǎo)致更多炎癥因子產(chǎn)生，加劇炎癥反應(yīng)[9]。本研究結(jié)果顯示，造模后，模型大鼠血清中TNF- σ?α∝ IL-6、IL-8和IL-1β水平均較正常大鼠顯著升高；經(jīng)八正散干預(yù)后，模型大鼠血清中上述炎癥因子水平均顯著降低，提示八正散可通過降低炎癥因子水平來改善大鼠CUTI。

SIgA由尿道黏膜細(xì)胞分泌，可防止細(xì)菌黏附于泌尿上皮細(xì)胞，其水平增加可增強(qiáng)尿道對(duì)病原體的抵抗能力[2]。T淋巴細(xì)胞亞群與機(jī)體免疫功能有關(guān)，CD4、CD8是T淋巴細(xì)胞亞群的2個(gè)標(biāo)志糖蛋白，CD4能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，而CD8則可殺傷被病原體感染的靶細(xì)胞2。本研究結(jié)果顯示，造模后，模型大鼠血清中CD8水平較正常大鼠顯著升高，SIgA、CD4水平均顯著降低；經(jīng)八正散干預(yù)后，模型大鼠血清中CD8水平顯著降低，SIgA、CD4水平均顯著升高，提示八正散還可通過調(diào)節(jié)宿主免疫系統(tǒng)來發(fā)揮改善大鼠CUTI的作用。

TLR4/NF- κB， NLRP3信號(hào)通路是機(jī)體炎癥反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵調(diào)控通路，活化的TLR4可激活NF- κB 蛋白的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)下游效應(yīng)分子的功能，進(jìn)而促進(jìn)NLRP3炎癥小體的表達(dá)[22]。相關(guān)研究指出，當(dāng)機(jī)體受到病原體侵襲時(shí)，TLR4/NF-kB/NLRP3信號(hào)通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)將被觸發(fā)，在一定程度上損傷機(jī)體免疫功能，導(dǎo)致機(jī)體特異性抗體產(chǎn)生不足，無法及時(shí)、充分地清除病原體，進(jìn)而加重機(jī)體感染[23]。同時(shí)，NLRP3介導(dǎo)的IL-1β過量釋放可誘發(fā)膀胱壁纖維化及排尿功能障礙，造成機(jī)體反復(fù)感染，從而導(dǎo)致尿路感染慢性化[24。本研究結(jié)果顯示，造模后，模型大鼠膀胱組織中TLR4、NF- κB NLRP3蛋白的表達(dá)水平均較正常大鼠顯著升高；經(jīng)八正散干預(yù)后，大鼠膀胱組織中上述蛋白的表達(dá)水平均顯著降低，提示八正散對(duì)大鼠CUTI癥狀的改善作用可能與調(diào)控TLR4/NF- ?κB/ NLRP3信號(hào)通路有關(guān)。

綜上所述，八正散可減輕CUTI大鼠炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)其免疫功能，上述作用可能與抑制TLR4/NF- ?κ_κB NLRP3信號(hào)通路有關(guān)。然而，本研究尚未明確其干預(yù)效應(yīng)是否依賴于該信號(hào)通路，后續(xù)本課題組將繼續(xù)深人探討八正散抗CUTI的具體機(jī)制，并通過特異性通路抑制劑進(jìn)行通路阻斷實(shí)驗(yàn)，觀察在TLR4/NF- ?κB/ NLRP3信號(hào)通路功能受抑情況下八正散的藥效作用，從而為相關(guān)研究提供科學(xué)依據(jù)。

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