補氣通竅方對免疫球蛋白A腎病大鼠腸道菌群及免疫平衡的調節作用研究

中圖分類號R965；R285 文獻標志碼A 文章編號 1001-0408（2025）20-2512-07

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2025.20.05

Study on the regulatory effects of Buqi tongqiao formula on intestinal flora and immune balance in IgA nephropathyrats

XU Jinjiang'， ZHANG Man2，WU Qiuye'，GUI Xiongbin3（1. Graduate School，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 5302O0，China;2.Dept.of Scientific Research，the First Afliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China;3.Dept.of Otorhinolaryngology，the First Afiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China）

ABSTRACTOBJECTIVETo explore theregulatory efectsofBuqi tongqiao formulaonintestinalfloraand immunebalance in immunoglobulinAnephropathy（IgAN）rats basedonthe theoryof“treating different diseases with thesame therapy\".METHODS MaleSDratswererandomlyasigned totheNormal groupandthemodelinggroup.IgANratmodelswereestablishedinthe modelinggroupbyintragastricadministrationofbovineserumalbumin，subcutaneous injectionofcarbontetrachlorideandcastor oilmixture，andtailvein injectionoflipopolysaccharide.Succesfullymodeledratswere thenrandomlydividedintothemodel group（Model group），Buqi tongqiao formula low-dose group（BQTQ-L group），Buqi tongqiao formula high-dose group（BQTQHgroup），and positivecontrol group（BZPgroup），with15rats ineach group.BZPgroupreceived intragastricadministrationof benazepril hydrochloride （ [10mg/kg] ），while BQTQ-L and BQTQ-H groups were given Buqi tongqiao formula at doses of 9.81 and （20 19.62g/kg （calculated as raw herb weight），respectively.The Normal group and the Model group received an equal volume of normalsalineintragastrically，onceaday，for8consecutiveweeks.The24-hoururinarytotalprotein（24hUTP）contentswere

measured at weeks 8，10，12，14 and 16 of the experiment. Afterthe last administration，serumcreatinine（Scr）andblood ureanitrogen（BUN）contentsweredetected. Renal histopathological changes and glomerular IgA immune complex deposition were examined.Additionally，alterations in gut microbiota composition，the proportions of peripheral T helper cell 17（Thl7）and regulatoryTcell（Treg），as well as the

ratioof Th17andTreg（Th17/Treg），were analyzedacrossallgroups.RESULTSCompared withthe Model group，ratsinboth BQTQ-LandBQQ-Hgroupsshowed allviatedmesangialcell hyperplasia，reducedmatrix expansion，anddecreased IgAimmune complex deposition in the glomeruli. The 24h UTP contents （at weeks 14 and 16 in the BQTQ-L group；at weeks 12，14 and 16 intheBQTQ-Hgroup），ScrandBUNcontents，IgA-positiveareafluorescenceintensities，relativeabundancesofFirmicutes， Th17 cell proportions，and Th17/Treg were significantly decreased in both BQTQ-L and BQTQ-H groups （Plt;0.05 ）；while the Chaol，Observedspecies，Shannon，andSimpson（exceptforBQTQ-Hgroup）indexes，therelativeabundancesofBacteroidota， and the proportions of Treg were significantly increased （ ?lt;0.05 ）.Differential microbiota included c_Clostridia（BQTQ-L group vs.Model group）and g Ruminococcus （BQTQ-H group vs.Model group），etc.CONCLUSIONS Buqi tongqiao formula may allviaterenalijuryandexertarenalprotectiveeffectinIgANratsbymodulatingintestinalflorahomeostasisandTh7/reg immune balance.

KEYWORDSBuqitongqiao formula；immunoglobulinAnephropathy；intestinalflora；immune balance；treatingdiferent diseases with the same therapy

免疫球蛋白A腎病（immunoglobulinAnephropathy，IgAN）是以腎小球系膜細胞增生、基質增多，伴IgA或以IgA為主的免疫復合物在系膜區沉積為特征的一類腎小球疾病，以反復發作性血尿、不同程度蛋白尿為主要臨床表現，是全球范圍內常見的原發性腎小球疾病]。IgAN是導致患者終末期腎病的重要原因之一，給其家庭及社會帶來沉重的經濟負擔2。目前，血管緊張素轉化酶抑制劑、皮質類固醇和免疫抑制劑等藥物常被臨床用于緩解IgAN患者的疾病進展，但這類藥物長期使用可能增加患者感染、代謝紊亂的發生風險，且部分患者接受治療后仍會進展為終末期腎病。可見，探尋一種有效、安全的IgAN治療手段十分必要。

由腸道微生物群改變引起的黏膜免疫障礙已被證實是IgAN發病的關鍵誘導因素。研究指出，失調的腸道菌群可通過T細胞依賴性途徑（細胞因子介導）和T細胞非依賴性途徑[Toll樣受體（Toll-likereceptor，TLR）連接]來促進初始B細胞向IgA抗體分泌細胞轉換，從而介導IgAN的發生發展，故靶向調節腸道菌群可能是緩解IgAN的潛在策略。

補氣通竅方是桂雄斌教授治療變應性鼻炎（allergicrhinitis，AR）的經驗方，由黃芪、黨參、甘草、蒼耳子、辛夷、細辛、荊芥、桔梗、魚腦石、升麻、柴胡組方而成。本課題組在前期研究中發現，補氣通竅方可通過調控輔助性T細胞17（Thelpercell17，Th17）與調節性T細胞（regulatoryTcell，Treg）比值（Th17/Treg）來平衡免疫、改善腸道菌群，從而緩解同為免疫性疾病的AR。“異病同治\"是中醫理論辨證施治的重要體現，其核心在于針對不同疾病的相同病機進行治療。研究指出，AR與IgAN均以正虛邪實、臟腑功能失調為基本病機，涉及肺、脾、腎三臟，治以益氣固表、扶正祛邪，與補氣通竅方益氣固表、扶正祛邪的功效相契合[7-8]。可見，該方具有改善IgAN的潛力。基于此，本研究以牛血清白蛋白（bovineserumalbumin，BSA）、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和四氯化碳（ CCl₄ ）聯合誘導構建IgAN大鼠模型，基于“異病同治”

理論評估補氣通竅方對IgAN大鼠的改善作用，并通過觀察腸道菌群及T淋巴細胞亞群的變化來探討該方的潛在作用機制，以期為補氣通竅方“異病同治\"科學內涵的闡釋及其臨床應用提供參考。

1材料

1.1主要儀器

本研究所用主要儀器包括YJX20/1型循環煎藥包裝組合機（北京東華原醫療設備有限責任公司），BS-240VET型全自動生化分析儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司），CytoFLEXS型流式細胞儀（美國BeckmanCoulter公司），BX63型正置熒光顯微鏡（日本Olympus公司），ASP300S型全自動組織脫水機（德國Leica公司），Histostar型組織包埋機、HM355S型病理切片機（美國Thermo FisherScientific公司）， DP360 型全自動封染一體機（深圳市達科為生物技術股份有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

黃芪、黨參、荊芥、柴胡、桔梗、升麻、辛夷飲片均購自廣西仙茱中藥有限公司（批號分別為20240103、20240103、20240601、20240201、20240201、20231101、20240304），蒼耳子、甘草飲片均購自廣西萬寶堂藥業有限公司（批號分別為240304601、240300805），細辛飲片購自四川新荷花中藥飲片股份有限公司（批號為2403101），魚腦石飲片購自四川宏康源藥業有限公司（批號為240301）；上述飲片均由廣西中醫藥大學第一附屬醫院藥房采購，經該院藥學部馬家寶副主任藥師鑒定，均為真品。

鹽酸貝那普利片（陽性對照，批號0000077708，規格10mg 購自浙江華海藥業股份有限公司；BSA、LPS（批號分別為V900933、L2880）均購自美國Sigma-Aldrich公司； CCl₄， 蓖麻油（批號分別為C805332、69006811）均購自國藥集團化學試劑有限公司；血清肌酐（serumcreati-nine，Scr）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）檢測試劑盒（批號分別為10500045700、10500045200）均購自深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒、尿蛋白檢測試劑盒（批號分別為G1120、

BC5655）購自北京索萊寶科技有限公司；兔抗鼠IgA多克隆抗體（批號bs-10491R）購自北京博奧森生物技術有限公司;異硫氰酸熒光素（FITC）標記的山羊抗兔IgG二抗（批號33107ES60）購自翌圣生物科技股份有限公司；FITC標記的抗大鼠CD3單克隆抗體（批號561801）購自美國BD公司；別藻藍蛋白（allophycocyanin，APC）/cyanine7標記的抗大鼠CD4抗體、藻紅蛋白（phycoerythrin，PE）標記的抗大鼠CD25抗體、AlexaFluor？647標記的抗大鼠叉頭框蛋白（forkheadboxprotein3，FOXP3）抗體（批號分別為201518、202105、320014）均購自美國Bio-Legend公司；PerCP-eFluor710標記的抗大鼠CD8a抗體、PE-cyanine7標記的抗大鼠白細胞介素17A（interleu-kin-17A，IL-17A）抗體、細胞刺激試劑盒（批號分別為46-0084-82、25-7177-80、00-4975-93）均購自美國ThermoFisherScientific公司。

1.3 實驗動物

SPF級雄性SD大鼠80只，體重 180～200g ，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，動物生產許可證號SCXK（湘）2019-0001。所有大鼠均飼養于SPF級屏障環境（溫度 25^°C ，相對濕度 50%～60% ，每 12h 光照/黑暗循環）內，自由攝食、飲水。本研究方案經過廣西中醫藥大學實驗動物福利倫理委員會審核批準（批準編號DW20240319-060）。

2 方法

2.1 藥液的制備

取黃芪、黨參、甘草、蒼耳子、辛夷、細辛、荊芥、桔梗、魚腦石、升麻、柴胡（質量比 20：12：12：6：10：2：15：10 10：3：9） ，混勻，加12倍量水浸泡 30min ，武火煮沸后轉文火煎煮 60min ，過濾；藥渣再次加12倍量水，同法煎煮，過濾；合并兩次濾液，于 50^°C 左右減壓旋轉蒸發，得質量濃度為 3g/mL （以生藥量計）的濃縮液，于 -20^°C 下保存，備用。

2.2 分組、造模與給藥

取SD大鼠80只，適應性喂養1周后，隨機分為空白組（Normal組，17只）和造模組（63只）。取造模組大鼠，按照相關文獻方法并改進，構建IgAN大鼠模型：灌胃BSA溶液（以水為溶劑） 400mg/kg ，隔天1次，持續8周 + 皮下注射CCl4和蓖麻油混合液（體積比 1：3）0.4mL ，每周1次，持續8周 + 尾靜脈注射LPS[以磷酸鹽緩沖液（PBS）為溶劑] ，于第6、8周各注射1次。于第8周末，隨機選取5只大鼠（Normal組2只，造模組3只）以免疫熒光法驗證，若Normal組大鼠腎小球內未見或少見IgA免疫復合物沉積，而造模組大鼠腎小球內存在大量彌散性IgA免疫復合物沉積，則表明IgAN模型復制成功（具體操作見\"2.7\"項）。

將造模成功的大鼠隨機分為模型組（Model）組、補氣通竅方低劑量組（BQTQ-L組）、補氣通竅方高劑量組（BQTQ-H組）、陽性對照組（BZP組），每組15只。BQTQ-L組、BQTQ-H組大鼠分別灌胃補氣通竅方9.81、19.62g/kg （以生藥量計，以生理鹽水為溶劑；基于“異病同治\"理論，分別以臨床等效劑量及其2倍作為BQTQ-L組、BQTQ-H組的劑量）；BZP組大鼠灌胃鹽酸貝那普利10mg/kg （以生理鹽水為溶劑，劑量參考預實驗及相關文獻[設置）;Normal組和Model組大鼠灌胃等體積生理鹽水；每天1次，連續8周。

2.3 樣本收集

分別于實驗第8、10、12、14、16周末，收集各組大鼠（禁食不禁水）的 24h 尿液，備用。末次給藥后，收集各組大鼠新鮮糞便，于 -80^°C 下保存，備用。上述樣品采集完成后，以腹腔注射 2% 戊巴比妥鈉 3mg/kg 麻醉各組大鼠，經腹主動脈采集血樣，備用；取血后，將大鼠處死，摘取其雙腎，取左側腎臟對半切開后，置于 4% 多聚甲醛溶液中固定，備用。

2.4 尿蛋白含量測定

取“2.3”項下各組6只大鼠各時間點的 24h 尿液，采用尿蛋白試劑盒（比色法）檢測 24h 尿蛋白（24-hoururinetotalprotein， 24h UTP）含量。

2.5 血清Scr、BUN含量測定

取“2.3\"項下各組6只大鼠的血樣，于室溫下靜置2h后，再于 4^°C 下以 3500r/min 離心 15min ，分離上層血清，采用全自動生化分析儀測定各組大鼠血清Scr及BUN含量。

2.6 腎組織病理觀察

取“2.3\"項下各組6只大鼠經 4% 多聚甲醛溶液固定48h 的腎組織，修剪至合適大小后置入組織包埋盒中，依次進行脫水、透明、浸蠟、包埋，以 5μm 厚度進行連續切片，于 45^°C 溫水中攤片 1～2min ，待切片完全展開后用防脫載玻片撈出，于 98^°C 下烤片 20min 后保存，備用。取切片，經常規脫蠟、脫水后，依次用蘇木精 .1% 伊紅溶液染色，再以中性樹膠封片，使用顯微鏡觀察大鼠腎組織形態學改變，并拍照保存。

2.7 腎小球IgA免疫復合物沉積情況檢測

采用免疫熒光法檢測。取“2.3\"項下各組6只大鼠的腎組織適量，按“2.6\"項下方法制備石蠟切片。取切片，經常規脫蠟至水后，加乙二胺四乙酸進行抗原修復，再以 3%BSA 于 37^°C 下封閉1h;滴加IgA一抗（稀釋度為 1：1 000? ，于 4^°C 下避光孵育過夜（ （gt;8h ；以PBS洗滌3次，滴加相應IgG二抗（稀釋度為1：100），于 37^°C 下避光孵育 2h ;以PBS洗滌3次，再以抗熒光淬滅封片液100μL 封片，使用熒光顯微鏡觀察并采集圖像，使用ImageJ軟件分析各組大鼠腎小球內IgA陽性區域（呈綠色熒光）的熒光強度，用以反映IgA免疫復合物的沉積情況。

2.8 腸道菌群檢測

取“2.3\"項下各組6只大鼠的糞便樣本，按照試劑盒說明書，通過吸附柱法純化提取DNA，并擴增其16SrRNA ΔV3+V4 可變區（341F、805R的引物序列分別為5^′ -CCTACGGGNGGCWGCAG- ?3^′?5^′ -GACTACHVGG-GTATCTAATCC- 3^′ ）。取所得PCR產物，構建微生物多樣性測序文庫，采用Illumina平臺進行高通量測序，讀取測序結果，并進行Alpha多樣性分析、Beta多樣性分析、物種組成分析和差異微生物分析。上述測序分析由杭州聯川生物醫藥科技有限公司完成。

其中，Alpha多樣性包括Chao1指數、Observed spe-cies指數、Shannon指數、Simpson指數，可反映樣本腸道菌群的物種豐富度信息；Beta多樣性分析包括主成分分析（principalcomponentanalysis，PCA）、主坐標分析（principalcoordinateanalysis，PCoA），可反映群落間物種組成的差異；物種組成以相對豐度為檢測指標，以相對豐度排前3位的為優勢菌群；通過組間群落差異（lineardiscriminantanalysiseffect size，LEfSe）分析，以線性判別分析（lineardiscriminantanalysis，LDA）效應值（LDA閾值為 3，Plt;0.05 篩選各組大鼠的腸道差異微生物[]。

2.9 外周血免疫平衡指標檢測

取“2.3”項下各組3只大鼠的血樣，進行抗凝處理。取抗凝全血樣本 200μL ，裂解紅細胞；收集細胞，于37°C，5%CO₂ 下培養刺激 ⁴h ；收集細胞，加入含CD4、CD25抗體的混合液（三者體積分別為 2.5，0.5，2.0μL ），于 4^°C 下避光孵育 20min ，進行細胞表面標記；待破膜后，加入含FOXP3、IL-17A抗體的混合液（體積均為2.5μL 進行胞內染色；采用流式細胞儀檢測，FlowJoV10軟件分析各組大鼠全血Th17、Treg比例（Th17以CD4、IL-17A標記，Treg以CD4、CD25、FOXP3標記），并計算Th17/Treg。

2.10 統計學方法

采用SPSS26.0和GraphPadPrism9.5軟件對數據進行統計分析。符合正態分布的計量資料以 表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗；不符合正態分布的計量資料以 M（P_²⁵，P_⁷⁵） 表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗，進一步兩兩比較采用Dunn檢驗。檢驗水準 α=0.05 。

3結果

3.1補氣通竅方對IgAN大鼠 24h UTP含量的影響

與Normal組相比，Model組大鼠第8、10、12、14、16周的 24h UTP含量均顯著升高（ （Plt;0.05） 。與Model組相比，各藥物組大鼠 24h UTP含量均有所降低，其中BZP組和BQTQ-H組大鼠第12、14、16周以及BQTQ-L組大鼠第14、16周的 24h UTP含量均顯著降低 （Plt; 0.05）。結果見表1。

表1補氣通竅方對IgAN大鼠 UTP含量的影響

a：與Normal組相比， Plt;0.05;b： 與Model組相比， Plt;0.05

3.2補氣通竅方對IgAN大鼠血清Scr、BUN含量的影響

與Normal組相比，Model組大鼠血清Scr、BUN含量 均顯著升高 （Plt;0.05） ；與Model組相比，各藥物組大鼠 血清Scr、BUN含量均顯著降低 （Plt;0.05 。結果 見表2。

表2補氣通竅方對IgAN大鼠血清Scr、BUN含量的影響

a：與Normal組相比， Plt;0.05 ;b：與Model組相比， Plt;0.05

3.3補氣通竅方對IgAN大鼠腎組織病理損傷及IgA免疫復合物沉積的影響

HE染色結果顯示，Normal組大鼠腎小球結構正常，細胞及基質均勻分布，未見明顯異常；腎小管上皮細胞圓潤、飽滿，結構完整，未見萎縮或擴張；腎間質未見明顯增生或炎癥細胞浸潤。與Normal組相比，Model組大鼠的腎小球系膜區出現明顯的系膜細胞增生和基質增多；腎間質中可見大量炎癥細胞浸潤，伴腎小管萎縮、管腔狹窄閉縮。與Model組相比，各藥物組大鼠腎小球系膜細胞增生和基質增生均有所減輕，腎小球形態基本正常；腎小管擴張程度減輕，炎癥細胞浸潤有不同程度減少，未見明顯腎小管萎縮或壞死。免疫熒光染色結果顯示，與Normal組 （13.84±2.34） 組相比，Model組大鼠腎小球系膜區、毛細血管壁IgA陽性區域的熒光強度（ 55.31±6.68 顯著升高 （Plt;0.05） 。與Model組相比，BZP組、BQTQ-L組、BQTQ-H組大鼠腎小球內IgA陽性區域有所縮小，其熒光強度 （30.73±3.70，44.30±3.55 、36.94±4.83? 均顯著降低（ （Plt;0.05） 。結果見圖1。

3.4補氣通竅方對IgAN大鼠腸道菌群的影響

3.4.1補氣通竅方對腸道菌群Alpha多樣性的影響

與Normal組相比，Model組大鼠的Chao1指數顯著降低 （Plt;0.05 ）。與Model組相比，各藥物組大鼠的Chaol指數、Observedspecies指數、Shannon指數（BZP組除外）、Simpson指數（BZP組、BQTQ-H組除外）均顯著升高 ?Plt;0.05 ）。結果見表3。

表3補氣通竅方對IgAN大鼠腸道菌群AIpha多樣性的影響 [M（P_²⁵，P_⁷⁵），n=6]

a：與Normal組相比， Plt;0.05：0 與Model組相比， Plt;0.05， 0

3.4.2補氣通竅方對腸道菌群Beta多樣性的影響

Model組與Normal組、BZP組、BQTQ-L組、BQTQ-H組有所偏離，表明組間微生物組成結構有所差異；此外，BZP組、BQTQ-L組、BQTQ-H組與Normal組有所重疊，提示各藥物組大鼠的腸道微生物組成結構與Normal組較為相似。結果見圖2。

3.4.3補氣通竅方對腸道菌群物種組成的影響

在門水平（圖3A）上，3種優勢菌群分別為厚壁菌門Firmicutes、擬桿菌門Bacteroidota、放線菌門Actinobacte-riota。與Normal組相比，Model組大鼠厚壁菌門的相對豐度有所升高 （Pgt;0.05 ），而擬桿菌門的相對豐度顯著降低（ Plt;0.05 ；與Model組相比，各藥物組厚壁菌門的相對豐度均顯著降低，而擬桿菌門的相對豐度均顯著升高 （Plt;0.05） ；各組大鼠放線菌門的相對豐度相比，差異均無統計學意義 （Pgt;0.05） 。在屬水平（圖3B）上，3種優勢菌群分別為乳桿菌屬Lactobacillus、嗜黏液乳桿菌屬Ligilactobacillus單球菌屬Monoglobus;各組大鼠上述菌群相對豐度相比，差異均無統計學意義 （Pgt;0.05 。

3.4.4補氣通竅方對腸道差異微生物的影響

LEfSe分析結果顯示，相較于Normal組，Model組的20種差異微生物包括g_Clostridia_UCG-014_unclassi-fied、o_Clostridia_UCG-014、f_Clostridia_UCG-014_un-classified、s_Clostridia_UCG-014_unclassified等；與Model組相比，BZP組的18種差異微生物包括f_Streptococca-ceae、g_Streptococcus、s_Monoglobus_unclassified等，BQTQ-L組的22種差異微生物包括c_Clostridia、o_Os-cillospirales、o_Bacteroidales等，BQTQ-H組的14種差異微生物包括g_Ruminococcus s Ruminococcus_unclassi-fied、f_Lachnospiraceae等（限于篇幅，相關結果可掃描本文首頁二維碼查看“增強出版\"板塊中的附圖1）。

圖2補氣通竅方對IgAN大鼠腸道菌群Beta多樣性的影響

3.5補氣通竅方對IgAN大鼠外周血免疫指標的影響

與Normal組相比，Model組大鼠外周血Th17比例、Th17/Treg均顯著升高，Treg比例顯著降低 （Plt;0.05 。與Model組相比，各藥物組大鼠外周血Th17比例、Th17/Treg均顯著降低，Treg比例均顯著升高 （Plt;0.05 。結果見表4（限于篇幅，相關流式圖可掃描本文首頁二維碼查看“增強出版”板塊中的附圖2）。

4討論

中醫學并無“IgAN\"這一病名，但可據其臨床表現劃為“水腫”“尿血”“尿濁\"等范疇，若病情加重還可將其劃入“癃閉\"“關格”\"虛勞\"等范疇[2。該癥病機責之于正虛邪盛，其中關鍵病因在于濕熱濁邪，侵襲肺脾胃，繼而損及腎臟，與肺、脾、腎功能失調相關[13]。AR是一種由IgE介導的慢性鼻部炎癥性疾病，屬“鼻軌\"范疇，多由臟腑虛損、正氣虧虛所致，其中脾腎虛弱、肺氣不足、衛表不固為發病之關鍵[14。由此可見，二者的發病過程均與肺脾腎臟腑功能失調密切相關，有“異病同治”之基礎

補氣通竅方是由黃芪、黨參等11味中藥組方而成的經驗方，可用于AR的治療。方中，黃芪可補脾益氣、固表升陽，為君藥；黨參可健脾益肺，以助黃芪益氣扶正；佐以細辛引藥入腎，驅散腎中風寒；荊芥、桔梗、魚腦石可清熱解毒，散結排濁；升麻、柴胡可升陽舉陷，助黃芪、黨參固護中氣；蒼耳子、辛夷可祛風除濕通絡；佐以甘草調和諸藥；諸藥合用，共奏益氣固表、扶正祛邪之功。

本研究從“異病同治\"理論出發，通過構建IgAN大鼠模型探析補氣通竅方對IgAN的干預效果，結果顯示，與模型組相比，補氣通竅方降低了IgAN大鼠血清Scr、BUN含量。本研究還通過檢測 24h UTP含量來評估了補氣通竅方對IgAN大鼠疾病進展的影響，結果顯示，自第12周起，高劑量的補氣通竅方可有效減少大鼠尿蛋白的漏出；第14、16周，各劑量組大鼠 24h UTP含量均顯著低于Model組，進一步證實了補氣通竅方對IgAN的改善作用。病理損傷改善是評估IgAN治療效果的另一項重要指標，本研究的HE染色結果顯示，補氣通竅方各劑量組大鼠的腎小球系膜細胞增生和基質增生均有所減輕，腎小管萎縮和擴張程度均有所降低，炎癥細胞浸潤明顯改善，表明該方能顯著緩解IgAN引起的腎臟病理損傷。研究指出，IgA免疫復合物可通過激活補體系統來引發炎癥反應和細胞外基質沉積，進而導致腎小球硬化和腎功能衰竭。本研究的免疫熒光實驗結果顯示，補氣通竅方可顯著減少IgAN大鼠腎小球內的IgA免疫復合物沉積，從而減輕腎臟的免疫損傷、延緩疾病進展。

IgAN發病機制復雜，腸道菌群失調與Th17/Treg免疫失衡在IgAN的發生過程中具有協同作用，二者可通過復雜的免疫調節網絡來共同促進疾病的進展[]。IgA免疫復合物在腎小球系膜中的沉積是IgAN的顯著標志，當腸道菌群失調時，致病菌或其代謝產物可通過破壞腸道屏障而侵入循環系統，激活腸道黏膜的異常免疫反應，致使 CD4⁺ T細胞失調[5]。Th17和Treg均來源于CD4⁺ T細胞，腸道黏膜的異常免疫反應可進一步成為Th17/Treg免疫失衡的驅動因素：其中，Th17的過度分化可介導炎癥反應，加重中性粒細胞和巨噬細胞的浸潤，促進腎小球系膜細胞增生及纖維化；而Treg則通過分泌IL-10和表達細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4來抑制免疫反應，從而阻止 CD4⁺ T淋巴細胞向Th17分化[1]。IgAN患者通常表現出Th17比例升高、Treg數量減少；此外，IgAN模型小鼠也同樣表現出Th17/Treg比例失衡及Th17極化，表明Th17/Treg免疫失衡可能參與了IgAN的發生發展[17-18]

為深入探索補氣通竅方干預IgAN的潛在機制，本研究進一步通過16SrRNA測序和流式細胞術探討了該方對IgAN大鼠腸道菌群及外周血Th17/Treg免疫平衡的影響。結果顯示，IgAN大鼠腸道菌群物種豐富度、均勻度均有所降低，且其物種組成與Normal組大鼠具有明顯差異；經補氣通竅方干預后，大鼠的腸道菌群物種豐富度、均勻度均明顯改善，補氣通竅方各劑量組大鼠腸道菌群物種組成與Normal組大鼠較為相似，提示該方對IgAN大鼠的腸道菌群穩態有一定的正向調控作用，進而影響IgAN的病理進程。在門水平上，補氣通竅方各劑量組大鼠厚壁菌門的相對豐度均較Model組顯著降低，擬桿菌門的相對豐度均較Model組顯著升高。研究指出，擬桿菌門是腸道微生物群中的關鍵生產者，能夠將不可消化的碳水化合物分解成短鏈脂肪酸（Short-chainfattyacids，SCFAs），而IgAN大鼠體內擬桿菌門相對豐度的降低可能導致SCFAs等有益代謝產物減少，從而抑制Treg細胞的活化[]。進一步的流式細胞術檢測結果證實了這一可能，即IgAN大鼠外周血中Th17比例、Th17/Treg均較Normal組顯著升高，Treg比例則較Normal組顯著降低；而補氣通竅方可顯著逆轉上述免疫平衡指標的改變。

在IgAN發生發展中，Th17的異常活化可促進炎癥因子的分泌，加劇腎臟的免疫病理損傷，同時Treg的減少則無法有效遏制這種異常免疫反應[20。本課題組前期研究結果顯示，補氣通竅方可通過調控AR大鼠Th17/Treg平衡來緩解炎癥損傷，從而減輕鼻黏膜的炎癥反應，緩解鼻部癥狀。本研究結果顯示，補氣通竅方可顯著降低IgAN大鼠外周血Th17比例和Treg/Th17，顯著升高Treg比例，減少腎小球IgA免疫復合物的沉積，從而發揮腎臟保護作用。這種對Th17/Treg免疫平衡的調節機制使得補氣通竅方能夠同時治療AR和IgAN，進而實現\"異病同治”。

綜上所述，補氣通竅方能夠有效改善IgAN大鼠腎功能，降低腎小球中IgA免疫復合物的沉積，減輕腎組織病理損傷，調節腸道菌群物種組成及豐富度，維持Th17/Treg免疫平衡，即該方可能通過調控腸道菌群穩態和Th17/Treg免疫平衡來發揮對IgAN大鼠的腎臟保護作用；其中該方對Th17/Treg免疫平衡的調節可能是補氣通竅方“異病同治\"的科學內涵。然而，本研究也存在一定的局限性，如尚未進一步評估補氣通竅方對IgAN大鼠腸道屏障功能的影響，其具體分子機制仍需進一步探討。

參考文獻

[1] GLEESONPJ，O'SHAUGHNESSYMM，BARRATTJ. IgAnephropathy inadults：treatment standard[J].Nephrol DialTransplant，2023，38（11）：2464-2473.

[2] SANI A，MOVALLEDK，KAMANAJ A，et al. Interventions for decreasing the risk of recurrent IgA nephropathy： asystematic reviewand meta-analysis[J].Transpl Immunol，2023，80：101878.

[3] ELKAROUIK，FERVENZAFC，DEVRIESEAS. TreatmentofIgA nephropathy：a rapidly evolving field[J]. JAmSocNephrol，2024，35（1）：103-116.

[4] HE JW，ZHOU XJ，LV J C，et al. Perspectives on how mucosal immune responses，infections and gut microbiome shape IgA nephropathy and future therapies[J]. Theranostics，2020，10（25）：11462-11478.

[5]ZHUYF，HE HD，SUNWQ，et al. IgA nephropathy：gut microbiome regulates theproductionof hypoglycosilated IgA1via the TLR4 signaling pathway[J].Nephrol Dial Transplant，2024，39（10）：1624-1641.

[6]彭林峰，馮家茹，王明剛，等.補氣通竅方調控Treg/Th17 平衡緩解變應性鼻炎大鼠鼻黏膜炎性損傷的機制[J] .中 華中醫藥雜志，2022，37（3）：1648-1651.

[7］劉莉莉，劉大新，劉錦峰，等.中醫藥臨床優勢病種探討： 變應性鼻炎[J].中國實驗方劑學雜志，2023，29（2）： 203-211.

[8] 何鳴宇，張守琳，鄒迪.基于黏膜免疫探討中醫三焦論治 IgA腎病[J].中華中醫藥學刊，2023，41（7）：140-144.

[9] 陸慧瑜，張巧玲，蔣小云，等.IgA腎病大鼠模型的建立 [J].中國誤診學雜志，2011，6（6）：1264-1267.

[10]JIN H，PIAO S G，JIN J Z，et al. Synergistic effects of leflunomide and benazepril in streptozotocin-induced diabetic nephropathy[J]. Nephron Exp Nephrol，2014，126 （3）：148-156.

[11]WANG C C，CAI X Q，LIN S F， et al. Hydroxychloroquine ameliorates immune functionality and intestinal flora disorders of IgA nephropathy by inhibitionof C1GALT1/Cosmc pathway[J]. Immunopharmacol Immunotoxicol，2024，46（2）：218-228.

[12]張艷玥，張栩銘，周嘉寶，等.基于“肺與大腸相表里”探 討IgA腎病的機制與治療[J].中華中醫藥學刊，2025，43 （1）：77-80，273.

[13]趙潔，孟立鋒，莫超，等.基于“咽腎相關”理論防治IgA 腎病的研究進展[J].世界科學技術-中醫藥現代化， 2020，22（4）：1148-1152.

[14]范逸品，曲嵩霖，張華敏，等.曹洪欣分型辨治變應性鼻 炎經驗[J].中醫雜志，2024，65（23）：2404-2407，2426.

[15] BARRATT J. Mucosal targeting in IgA nephropathy targeting the gut associated lymphoid tissue[J]. Nephrology （Carlton），2024，29（Suppl.2） ：34-36.

[16]YUAN X L，QING JB，ZHI W Q，et al. Gut and respiratory microbiota landscapes in IgA nephropathy： a crosssectional study[J]. Ren Fail，2024，46（2）：2399749.

[17]INAMO J，KANEKO Y，KIKUCHI J，et al. High serum IgA and activated Th17 and Treg predict the efficacy of abatacept in patients with early，seropositive rheumatoid arthritis[J]. Clin Rheumatol，2021，40（9） ：3615-3626.

[18]HU XY，FENG JT，ZHOU QL，et al. Respiratory syncytial virus exacerbates kidney damages in IgA nephropathy mice via the C5a-C5aR1 axis orchestrating Th17 cell responses[J]. Front Cell Infect Microbiol，2019，9 ： 151.

[19]YANG S Q，HUANG J T，TAN W J，et al. Xiaoyankangjuntabletalleviatesdextran sulfate sodium-induced colitis in mice by regulating gut microbiota and JAK2/STAT3 pathway[J]. Nat Prod Bioprospect，2024，14（1） ：44.

[20]BAVIKAR P，DIGHE T， WAKHARE P，et al. Role of Tlymphocytes in kidney disease[J]. Cureus，2021，13（10） ： e19153.