芍藥甘草湯有效組分芍甘多苷利膽退黃作用研究

宋 軍， 趙軍寧， 王曉東， 戴 瑛， 鄧治文， 易進海

(四川省中醫藥科學院藥理毒理研究所，國家中醫藥管理局中藥質量生物學評價重點研究室，中藥品質評價與中藥四川省重點實驗室，四川成都 610041)

芍藥甘草湯出自東漢張仲景《傷寒論》太陽病篇，由芍藥、甘草組成。能益陰柔肝，緩急止痛，將其用于治療急慢性肝炎，有較好的療效［1-2］。我們以芍藥甘草湯為基礎方，經提取、分離純化得到芍藥甘草湯有效部位群(簡稱DSM)，含芍藥總苷、甘草酸和總黃酮苷總計54.7%，為治療慢性乙型病毒性肝炎的新型有效的中藥復方有效部位群制劑［3］。先前我們已經報道了DSM能降低CCl4亞急性肝損傷大鼠肝臟白細胞介素和 TNFα含量［4］，對乙型肝炎病毒［5］和實驗性肝纖維化具有顯著抑制作用［6］。本實驗報告DSM對正常大鼠膽汁流量和小鼠異硫氫酸-1-奈酯黃疸模型膽紅素和轉氨酶的影響，探討其利膽退黃作用。

1 材料

JA1003A電子天平(d=1mg)，上海精天電子儀器有限公司。賽多利斯電子天平(d=0.01mg)，德國;UV730半自動生化分析儀，日本島津;TB、1 min膽紅素、ALT、AST檢測試劑盒，四川邁克科技有限公司。SD大鼠，一級合格，由國家醫藥局四川抗菌素工業研究所實驗動物中心提供。DSM批號:010327:褐黃色粉末，由芍藥-甘草(2∶1)組成，采用水提后大孔樹脂純化制備，含芍藥總苷、甘草酸和總黃酮苷總計54.7%。1 g藥粉相當于原生藥15.38 g。

2 方法與結果

2.1 對正常大鼠膽汁流量的影響

2.1.1 方法［7］取SD大鼠50只，按體質量隨機分成5組，每組10只。設正常對照組和陽性對照組(舒膽通0.024 g/kg，相當于臨床每日推薦劑量的12倍)，受試藥物3個劑量組(DSM 88、264、528 mg/kg，分別相當于臨床每日推薦劑量的4、12、24倍)。采用等容積不等濃度藥液十二指腸1次給藥，0.5 mL/100 g體質量。各組實驗前禁食不禁水12 h，實驗時將大鼠以0.6%戊巴比妥鈉0.5 mL/100 g ip麻醉后，仰位固定，沿腹正中線切開約2 cm，開腹找到胃幽門部在十二指腸降部腸系膜中找到白色有韌性的膽管，在其下穿2根絲線，結扎乳頭部，向膽管方向作“v”型切口，插入塑料管，即可見淡黃色膽汁流出，結扎固定塑料管，用刻度試管收集膽汁。手術后用止血鉗夾閉腹壁，以鹽水紗布覆蓋。待穩定20 min后，先收集30 min膽汁，然后各組大鼠分別由十二指腸給予相應的受試藥物，給藥后每30 min收集膽汁一次，共3次，記錄膽汁流量，計算給藥后膽汁流量增加的百分率。

2.1.2 結果 見表1。由表1可見，DSM大劑量組給藥后30、60、90 min膽汁流量和膽汁流量增加率與對照組比較具有差異顯著性(P＜0.05～0.01)，中劑量組給藥后30 min膽汁流量和膽汁流量增加率與對照組比較具有差異顯著性(P＜0.05 ～0.01)，小劑量組給藥后30 min、60 min 膽汁流量增加率與對照組比較具有差異顯著性(P＜0.05)，表明DSM對正常大鼠有增加膽汁流量的作用。

2.2 對異硫氫酸-1-奈酯黃疸模型的影響

2.2.1 方法［8］: 取昆明種小鼠按體質量隨機分成7組。設正常對照組和陽性對照組(甘利欣0.112 5 g/kg，相當于臨床每日推薦劑量的15倍，益肝靈57.75 mg/kg，相當于臨床每日推薦劑量的15倍)，受試藥物3個劑量組(DSM 88、264、528 mg/kg，分別相當于臨床每日推薦劑量的 5、15、30倍)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥，0.1 mL/10 g體質量，每日1次，連續4 d，第3次給藥后2 h以1%異硫氰酸-1-萘酯給小鼠 ig一次，0.1 mL/10 gB.W.，造型后45 h眼球取血，分離血清，測定血清總膽紅素、1 min膽紅素、ALT、AST。

表1 DSM對正常大鼠膽汁流量的影響

2.2.2 結果 見表2。由表2可見，DSM高、中劑量組對異硫氫酸-1-奈酯造成的小鼠實驗性黃疸具有顯著降低總膽紅素、1 min膽紅素作用，高劑量組對血清AST具有降低作用，表明DSM對異硫氫酸-1-奈酯黃疸造成的小鼠實驗性黃疸模型有退黃作用。

表2 DSM對異硫氫酸-1-奈酯所致小鼠實驗性黃疸模型的影響 ±s)

表2 DSM對異硫氫酸-1-奈酯所致小鼠實驗性黃疸模型的影響 ±s)

注:與模型組比較(t檢驗或 t’檢驗)，*P ＜0.05;＊＊P ＜0.01。

組別 動物數/只劑量/mg(kg·d)ALT/(IU/L)AST/(IU/L)對照組 11 — 18.1±11.3＊＊ 162.2±43.1*模型組 9 — 133.4±95.2 578.6±299.6 DSM 10 88 ×4 84.9 ±74.6 456.8 ±291.8 DSM 10 264 ×4 69.1 ±48.3 382.4 ±178.4 DSM 10 528 ×4 80.4 ±68.4 278.4 ±135.8*甘利欣 10 110 ×4 73.2 ±55.1 388.6 ±237.0益肝靈 9 60 ×4 98.4 ±55.5 460.2 ±230.6組別 動物數/只劑量/(g/kg)1 min膽紅素/(μmol/L)總膽紅素/(μmol/L)對照組 11 — 2.2±1.5＊＊ 2.2±1.1＊＊9 60 ×4 27.4 ±32.8 34.6 ±41.3模型組 9 — 46.3±36.9 47.1±35.8 DSM 10 88 ×4 29.0 ±35.1 33.4 ±44.4 DSM 10 264 ×4 14.1 ±25.9* 14.8 ±18.4*DSM 10 528 ×4 8.4 ±12.4＊＊ 9.3 ±12.7*甘利欣 10 110 ×4 10.0 ±18.4* 10.9 ±19.2*益肝靈

3 討論

臨床［1］及實驗研究［9］均表明，芍藥甘草湯具有降低轉氨酶、肝臟保護以及改善肝炎癥狀的作用。DSM也具有肝臟保護作用，對CCl4、D-GalN誘發小鼠急性肝損傷、LPS+BCG誘發的小鼠免疫性肝損傷等多種急性肝損傷(另文發表)及CCl4誘發的大鼠慢性肝損傷(肝纖維化)［5］具有明顯對抗作用，并具有抗乙型肝炎病毒作用［6］。

肝損傷時由于肝功能受損，通常出現膽汁分泌、血清膽紅素代謝及轉氨酶異常。本實驗研究表明DSM灌胃給藥可以顯著增加正常大鼠膽汁分泌量，對異硫氫酸-1-奈酯造成的小鼠實驗性黃疸具有顯著的退黃作用，表明本品具有利膽退黃作用，對于慢性乙型病毒肝炎治療具有一定的意義，也為其“柔肝解郁”提供了一定的實驗基礎。

［1］梁炳根，莫尤美.芍藥甘草湯治療148例病毒性肝炎的臨床觀察［J］.上海中醫藥雜志，1989，(6):4-6.

［2］費迎明，陳炳潮.健肝樂顆粒劑治療慢性乙型肝炎的療效觀察［J］.現代中西醫結合雜志，1999，8(7):1078-1079.

［3］易進海，趙軍寧.一種中藥提取物及制備方法和應用 .中國，03117199.0 ［P］.2003-01-20.

［4］宋 軍，趙軍寧，王曉東，等.芍甘多苷對CCl4亞急性肝損傷大鼠肝臟白細胞介素和TNFα含量影響的實驗研究［J］.成都中醫藥大學學報，2007，30(1):23-24.

［5］趙軍寧，宋 軍，王曉東，等.芍藥甘草湯提取物(芍甘多苷)對大鼠CCl4慢性肝損傷(肝纖維化)的作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2009，25(2):8-10.

［6］戴 瑛，趙軍寧，宋 軍，等.芍藥甘草湯有效成分群(芍甘多苷)抗乙型肝炎病毒作用的實驗研究［J］.中藥藥理與臨床，2009，25(3):36-39.

［7］陳 奇主編.中藥藥理研究方法學［M］.北京:人民衛生出版社，1993:444-445.

［8］中華人民共和國衛生部藥政局.新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編［M］.1993:93.

［9］邸 琳，劉新宇，常福紅，等.芍藥甘草湯對小鼠急性肝損傷的保護作用［J］.中藥藥理與臨床，2007，23(6):4-5.