胃癌組織中PTEN、p16的表達變化及意義

孫桂彬，楊景國，李永華，陳 哲，汪 威，韓櫻松

(北京市普仁醫院，北京100062)

腫瘤抑制基因與PTEN具有雙特異性磷酸酶活性，通過誘導細胞周期阻滯和細胞凋亡等抑制腫瘤的發生發展，并能多途徑地抑制腫瘤細胞的浸潤和轉移。p16既是正常細胞周期的有效調控者，又是抑制腫瘤生長的關鍵因子。當p16基因發生突變、缺失時，p16蛋白不能正常表達，使細胞增殖失控而發生癌變。本研究用利用免疫組化法對胃癌組織中的PTEN和p16蛋白進行了檢測，觀察其表達變化并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2000～2008年北京市普仁醫院手術治療的胃癌患者78例，男55例，女23例;中位年齡58歲(29～76歲)。留取手術切除的所有胃癌組織，同時取正常胃黏膜組織21例(取自上述胃癌患者行胃切除的近側斷端胃黏膜，斷端均距癌組織5 cm以上，組織學檢查為正常胃黏膜)。所有病例手術前未接受化療、放療或免疫治療。

1.2 PTEN和p16蛋白的檢測 實驗所用鼠抗人PTEN多克隆抗體和p16單克隆抗體為美國Santa Cruz公司產品。SP染色試劑盒和DAB顯色劑購自北京中杉技術有限公司。標本石蠟包埋后常規4 μm厚連續切片，每份均行HE染色和免疫組化SP染色，光鏡觀察。用已知陽性的胃癌切片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。PTEN 蛋白定位于細胞質，呈淡黃色、棕黃色、棕褐色顆粒;p16蛋白定位于胞質，呈淡黃色、棕黃色、棕褐色顆粒，且其著色強度高于背景非特異性染色。每份切片隨機選取5個高倍視野進行觀察、計數。按細胞染色強度及陽性細胞數占腫瘤細胞總數的百分比計分:細胞無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽性細胞數 ＜5%為0分、5% ～25%為1分、26% ～50%為2分、＞50%為3分。上述兩種評分相乘，乘積0為陰性(－)、1～3為弱陽性(+)、4～5為中度陽性(++)、≥6為強陽性(+++)，+、++、+++判為陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS12.0統計軟件。計數資料比較用χ2檢驗，相關關系分析用Speaman等級相關分析法。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組織中 PTEN和p16蛋白的表達 胃癌組織中 PTEN和p16的蛋白陽性表達率分別為55.13%(43/78)、42.31%(33/78)，正常胃黏膜中分別為 95.24%(20/21)和 90.48%(19/21)，兩種組織中兩個指標的陽性表達率相比，P均＜0.05。

2.2 PTEN和p16蛋白表達與胃癌臨床病理參數的關系 胃癌組織中 PTEN的陽性表達與腫瘤直徑、Borrmann分型、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期有關(P均＜0.05);p16蛋白的陽性表達與腫瘤Borrmann分型、分化程度、淋巴結轉移有關(P均＜0.05)。詳見表1。

2.3 胃癌組織中PTEN和p16蛋白陽性表達的關系 在胃癌組織中PTEN和p16蛋白均呈陽性表達著25例，二者的表達呈正相關(rs=0.585，P＜0.01)。

表1 PTEN和p16蛋白表達與胃癌臨床病理參數的關系

3 討論

近年來的分子生物學研究表明，正常細胞增殖的調控信號大體上可分為促進細胞進入增殖周期并阻止其發生分化的正信號及抑制細胞進入增殖周期并促進其發生分化的負信號兩類。細胞內存在的癌基因和抑癌基因對細胞的生長發育和終末分化就起著這樣的正負調控作用［1］。PTEN基因是具有雙重磷酸酶活性的抑癌基因，定位于人類染色體10q 23.3，全長約200 kb，由9個外顯子和8個內含子組成。PTEN蛋白包括氨基端的磷酸酶結構域、C2結構域和羧基端結構域［2］。起抑癌作用的主要結構域是氨基端結構域，其氨基端磷酸酶區域為主要的功能區，可以提高Caspase-3活性，使細胞周期停滯在G1期，調節細胞生長和凋亡。Stambolic等［3］在缺失PTEN基因的小鼠細胞中導入過表達的PTEN，增加了其對紫外線照射、熱休克、輻射等因素誘導的凋亡敏感性。

Yang等［4］檢測了胃癌組織及鄰近正常胃黏膜組織、腸化生、不典型增生組織中的PTEN蛋白，結果顯示，正常胃黏膜組織及腸化生組織中PTEN蛋白表達的陽性率明顯高于不典型增生及胃癌組織。Sato等［5］發現，PTEN蛋白表達高低與胃癌的病理分級及預后有關，預后越差，惡性程度越高，PTEN蛋白表達水平越低。本研究結果顯示，PTEN在正常胃黏膜中的陽性表達率高于胃癌組織中的陽性表達率。提示PTEN蛋白失表達參與胃癌的發生有關，可作為胃癌發生的監測指標之一。本研究結果還顯示，組織分化程度高、惡性程度低者，PTEN蛋白表達的陽性率高;而PTEN蛋白失表達或弱陽性表達則多見于組織分化程度低、惡性程度高者。這可能與PTEN基因的失活導致其磷酸酶活性喪失，間接激活了絲裂原活化蛋白激酶信號通路有關［6］。此外，本研究還發現，PTEN蛋白的表達隨胃癌浸潤深度增加、淋巴結轉移及臨床分期的進展而降低，說明PTEN蛋白失表達在胃癌的增殖、浸潤、轉移等過程中起到了促進作用。郭強等［7］研究認為，PTEN蛋白表達的缺失，導致癌細胞對凋亡信號的敏感性降低，致使腫瘤的生長速度增快。本研究結果顯示，PTEN蛋白的表達與腫瘤的大小也有相關性。

本研究結果顯示，胃癌組織中p16蛋白的陽性表達率明顯低于正常胃組織，在高、中分化胃癌中陽性表達率明顯高于低、未分化胃癌，說明p16蛋白的表達缺失與胃癌浸潤有關。p16蛋白在胃癌中表達率降低，提示p16基因表達缺失與胃癌發生、發展有關，同時證明 p16為腫瘤抑制基因，與劉飛等［8］研究結果一致。胃癌組織中PTEN和p16蛋白的陽性表達呈正相關。有關PTEN和p16相互作用的分子機制有待進一步深入研究。

［1］Tominaga O，Nita ME，Nagama H，et al.Expressions of cel cycle regulators in human colorectal cancer cel lines［J］.Jpn J Cancer Res，1997，88(9):855-860.

［2］Waite KA，Eng C.Protean PTEN:form and function［J］.Am J Hum Genet，2002，70(4):829-844.

［3］Stambolic V，Suzuki A，Pompa JL，et al.Negative regulation of PKB/AKT dependent cell survival by the tumor suppressor PTEN［J］.Cell，1998，95(1):29-39.

［4］Yang L，Kuang LQ，Zheng HC，et al.PTEN encoding product:a marker for tumorigenesis and progression of gastric carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2003，9(1):35-39.

［5］Sato K，Tamura G，Tsuchiya T，et al.Analysis of genetic and epigenetic alteratens of the PTEN gene in gastric cancer［J］.Virchows Arch，2002，440(2):160-165.

［6］Gu J，Tamura M，Yamada KM.Tumor suppressor PTEN inhibits integrin and growth factor-mediated mitogen-activated-protein(MAP)kinase signaling pathways［J］.Cell Biol，1998，143(5):1375-383.

［7］郭強，孫曉霞，許亮.抑癌基因PTEN的表達與胃癌生物學行為及預后的關系［J］.中國誤診學雜志，2004，4(11):1776-1778.

［8］劉飛，章翔，曹衛東，等.p16與PCNA表達與腦膠質瘤分級的相關性及意義［J］.第四軍醫大學學報，1999，20(7):597-599.