Hp LC法測定原料藥中埃索美拉唑的含量

董琦鑫朱家俊郁韻秋△唐 超隋 強

(1復旦大學藥學院藥物分析教研室 上海 201203；2上海市醫藥工業研究院化學部 上海 200083)

Hp LC法測定原料藥中埃索美拉唑的含量

董琦鑫1朱家俊1郁韻秋1△唐 超2隋 強2

(1復旦大學藥學院藥物分析教研室 上海 201203；2上海市醫藥工業研究院化學部 上海 200083)

目的建立用于測定原料藥中埃索美拉唑含量的HPLC法。方法采用HPLC法測定,色譜柱：Waters XTerra?MS C8反相柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流動相：V(乙腈)：V(20 mmol/L醋酸銨緩沖液, p H 7.6)=28：72,檢測波長280 nm,柱溫25℃,流速1 mL/min。結果埃索美拉唑濃度在0.01～0.07 mg/mL范圍內與峰面積之間呈現良好的線性關系(r=0.9996),方法回收率為98.49%～101.72%,RSD為0.15%～0.58%。結論本方法簡便快速,能準確檢測原料藥中埃索美拉唑的含量,可作為原料藥質量控制的分析方法。【關鍵詞】 埃索美拉唑； 原料藥； 高效液相色譜(HPLC)； 含量測定

埃索美拉唑是奧美拉唑的純左旋異構體［1］,化學名為5-甲氧基-2-{(S)-［(4-甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基)甲基］亞硫酰基}-1 H-苯并咪唑。它是第一種被發現的光學異構體質子泵抑制劑,與其他質子泵抑制劑一樣,埃索美拉唑通過抑制胃壁細胞的H+/K+-ATP酶來降低胃酸分泌,防止胃酸形成［2］。由于代謝方面的優勢,埃索美拉唑有良好的臨床療效和可預測性,其在AUC值、生物利用度及藥代動力學個體一致性方面均有一定優勢,使藥物到質子泵的傳遞增強并能提供更好的酸控制效果［3］。對于胃食道反流性疾病的患者而言,埃索美拉唑在糜爛性食管炎的維持治療方面有很好的效果和耐受性［4］；同時,它能減少夜間胃灼熱和睡眠障礙,改善患者睡眠質量和工作效率［5］。

目前,基于色譜法的埃索美拉唑分析報道主要是制劑中的藥物測定。?nal等［6］采用高效液相色譜(HPLC)技術對埃索美拉唑片劑進行了檢測；Reddy等［7］以反相HPLC法同時檢測藥物制劑中的埃索美拉唑和萘普生。對于原料藥的測定方法鮮有報道。為此,我們建立了測定原料藥中埃索美拉唑含量的HPLC法,并用于不同批次原料藥的測定。結果表明,該方法快速準確,可用于原料藥中埃索美拉唑的含量測定,為其質量控制提供了手段和依據。

材料和方法

儀器和試劑Hitachi L-2000型高效液相色譜儀。乙腈為色譜純,水為純水(Millipore),其他化學試劑均為分析純。埃索美拉唑對照品(上海醫藥工業研究院),埃索美拉唑原料藥(上海醫藥工業研究院,批號20120906、20121008c、20121121c)。

色譜條件色譜柱：Waters XTerra?MS C8反相柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流動相：V(乙腈)：V (20 mmol/L醋酸銨緩沖液,p H 7.6)=28：72,流速1.0 mL/min,檢測波長280 nm,柱溫25℃,進樣體積20μL。

緩沖溶液配制20 mmol/L醋酸銨緩沖液,用氨水調至p H 11.0。

對照品儲備液精密稱取105℃干燥至恒重的埃索美拉唑對照品10 mg,置于10 m L容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,即得埃索美拉唑對照品儲備液(1 mg/m L)。

空白對照品溶液量取2.5 m L緩沖溶液(p H 11.0)置于50 m L容量瓶中,用純水定容至刻度,搖勻,即得空白對照品溶液。

供試品溶液精密稱取樣品2.5 mg置于50 m L容量瓶中,加入2.5 mL緩沖溶液(p H 11.0),用純水定容至刻度,搖勻,即得供試品溶液。

混標溶液稱取各有關物質約1 mg及樣品約10 mg置于200 m L容量瓶中,加入10 m L緩沖溶液(p H 11.0),用純水定容至刻度,搖勻,即得混標溶液。

結 果

線性關系考察精密量取對照品儲備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 m L分別置于50 m L容量瓶中,加入2.5 m L緩沖溶液(p H 11.0),用純水稀釋至刻度,分別取20μL注入色譜儀,記錄色譜峰面積。以峰面積對進樣濃度作線性回歸,得到線性方程：Y=28319X-42.043(r=0.9996)。結果顯示,埃索美拉唑質量濃度在0.01～0.07 mg/m L范圍內與峰面積之間呈現良好的線性關系。

精密度試驗精密量取對照品儲備液1、2、3 m L分別置于50 m L容量瓶中,加入2.5 m L緩沖溶液(p H 11.0),用純水定容至刻度,制得低(0.02 mg/m L)、中(0.04 mg/m L)、高(0.06 mg/m L)濃度的溶液,分別重復進樣5次,每次進樣20μL,記錄峰面積,計算RSD分別為0.30%、0.078%、0.23%,結果表明精密度良好。

穩定性試驗精密稱取樣品配成溶液,室溫下分別在0、2、6、10、24 h時進樣20μL,紀錄峰面積,計算RSD為0.22%。結果表明樣品溶液在24 h內基本穩定。

重復性試驗取同一批次樣品,精密稱取5份,配制成供試品溶液并測定原料藥中埃索美拉唑的含量,重復進樣5次,埃索美拉唑平均含量為99.18%, RSD為0.20%(n=5)。

準確度試驗精密量取對照品儲備液1.5、2.5、3.5m L分別置于50 m L容量瓶中,加入2.5 m L緩沖溶液(p H 11.0),用純水定容至刻度,制得低(0.03 mg/m L)、中(0.05 mg/m L)、高(0.07 mg/ m L)濃度樣品各3份,按上述色譜條件測定,得到方法回收率(表1)。

樣品含量精密稱取3批原料藥樣品,配制成供試品溶液,分別取20μL注入液相色譜儀,記錄埃索美拉唑峰面積,外標法計算含量。3批樣品中埃索美拉唑含量分別是98.49%、98.54%和99.18%。

討 論

檢測波長的選擇取對照品及有關物質適量,分別加甲醇使其溶解,并稀釋成適當濃度,經紫外光譜掃描測定,所有物質在280 nm處均有最大吸收,因此本研究中選擇280 nm作為檢測波長。

流動相的選擇和優化埃索美拉唑在酸性條件下容易降解［8］,而在堿性條件下很穩定,因此我們選擇將流動相的水相調為堿性。然而流動相過堿性會對色譜柱壽命產生較大影響,經過數次試驗后,最終將流動相水相醋酸銨緩沖液的p H值確定為7.6。為了使埃索美拉唑和有關物質達到基線分離,我們考察了不同流動相比例下的色譜分離度。當乙腈與醋酸銨緩沖液比例為28∶72時,主峰與最近的雜質峰的分離度為2.3(圖1),而保留時間僅為6.62 min,分離效果好,分析時間短,因此我們將流動相比例確定為V(乙腈)∶V(20 mmol/L醋酸銨緩沖液,p H 7.6)=28∶72。在此色譜條件下得到埃索美拉唑對照品、空白對照品、埃索美拉唑原料藥樣品溶液的色譜圖(圖2)。理論塔板數＞3000,與相鄰峰的分離度＞1.5。

配樣溶劑和峰形優化由于埃索美拉唑為弱堿性化合物,所以在當前色譜條件下,埃索美拉唑的色譜峰明顯拖尾,對稱因子差。提高流動相堿性可以使堿性化合物的解離完全被抑制,從而使峰形得到改善,但是堿性條件下色譜柱的耐用性降低,使用壽命受到顯著影響。為了解決這一問題,我們在配制樣品溶液時加入少量p H為11的強堿性醋酸銨緩沖液,加強了局部堿性。結果證明進樣后峰形得到了明顯改善,對稱性良好。

［1］ Cotton H,Elebring T,Larsson M,et al.Asymmetric synthesis of Esomeprazole［J］.Tetrahedron：Asymmetry, 2000,11(18)：3819-3825.

［2］ Thitiphuree S,Talley NJ.Esomeprazole,a new proton pump inhibitor：pharmacological characteristics and clinical efficacy［J］.Int J Clin Pract,2000,54(8)：537-541.

［3］ Tonini M,Vigneri S,Savarino V,et al.Clinical pharmacology and safety profile of esomeprazole,the first enantiomerically pure proton pump inhibitor［J］.Digest Liver Dis,2001,33(7)：600-606.

［4］ Vakil NB,Shaker R,Johnson DA,et al.The new proton pump inhibitor esomeprazole is effective as a maintenance therapy in GERD patients with healed erosive oesophagitis：a 6-month,randomized,double-blind, placebo-controlled study of efficacy and safety［J］. Aliment Pharmacol Ther,2001,15(7)：927-935.

［5］ Johnson DA,Orr WC,Crawley JA,et al.Effect of esomeprazole on nighttime heartburn and sleep quality in patients with GERD：a randomized,placebo-controlled trial［J］.Am J Gastroenterol,2005,100(9)：1914-1922.

［6］ ?nal A,?ztunc A.Development and validation of HPLC method for the determination of esomeprazole in tablets［J］.J Food Drug Anal,2006,14(1)：12-18.

［7］ Reddy PS,Sait S,Vasudevmurthy G,et al.Stability indicating simultaneous estimation of assay method for naproxen and esomeprazole in pharmaceutical formulations by RP-HPLC［J］.Der Pharma Chemica, 2011,3(6)：553-564.

［8］ DellaGreca M,Iesce MR,Previtera L,et al.Degradation of lansoprazole and omeprazole in the aquatic environment［J］.Chemosphere,2006,63(7)：1087-1093.

Content determination of esomeprazole in bulk drug by Hp LC

DONG Qi-xin1,ZHU Jia-jun1,YU Yun-qiu1△,TANG Chao2,SUI Qiang2
(1Department of Pharmaceutical Analysis,School of Pharmacy,Fudan University,Shanghai 201203,China；
2Department of Chemistry,Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry,Shanghai 200083,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of esomeprazole in bulk drug.MethodsHPLC was applied to determine the test drug with Waters XTerra?MS C8column (150 mm×4.6 mm,3.5μm).The mobile phase was V(acetonitrile)：V(20 mmol/L,ammonium acetate,p H 7.6)=28：72,the measurement wavelength was 280 nm,the column temperature was 25℃and flow rate was 1 m L/min.ResultsThe linear range was 0.01-0.07 mg/m L(r= 0.9996).The method recovery rate and RSD was 98.49%-101.72%and 0.15%-0.58%, respectively.ConclusionsThis method is simple,fast,and can be accurately used for the determination of esomeprazole in bulk drug.Therefore,it can be used as an effective quality control method for esomeprazole bulk drug.

esomeprazole； bulk drug； HPLC； content determination

R 917

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2014.01.021

2013-01-31；編輯：王蔚)

△Corresponding author E-mail：yqyu@shmu.edu.cn