我國兒童HLA-DQA1基因多態性與幽門螺桿菌感染關系的Meta分析

張鐵民，張天哲，陳銀蘋，朱紅俐，陳曉青

(　1.唐山鋼鐵集團有限責任公司醫院兒科，河北 唐山 063000； 2.華北理工大學公共衛生學院流行病

與衛生統計學學科,河北 唐山 063000)

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論著

我國兒童HLA-DQA1基因多態性與幽門螺桿菌感染關系的Meta分析

張鐵民1，張天哲2※，陳銀蘋2，朱紅俐1，陳曉青1

(1.唐山鋼鐵集團有限責任公司醫院兒科，河北 唐山 063000； 2.華北理工大學公共衛生學院流行病

與衛生統計學學科,河北 唐山 063000)

摘要：目的采用Meta分析的方法綜合評價中國兒童HLA-DQA1基因多態性與幽門螺桿菌(Hp)感染的關聯性。方法以“幽門螺桿菌”“HLA-DQA1”“基因多態性”“兒童”為檢索詞，從中國生物醫學文獻數據庫(CBMdisc)、清華同方(CNKI)系列數據庫、維普數據庫(VIP)、萬方數據庫、Pubmed和Medline數據庫,全面檢索1995年1月至2015年1月國內外正式刊物上公開發表的有關HLA-DQA1與中國兒童Hp感染的病例對照研究的文獻，應用RevMan 5.0軟件對符合篩選標準的研究以OR值作為效應指標，根據異質性檢驗結果選擇相應模型進行綜合定量分析。結果符合納入標準的共11項病例對照研究,共計 Hp感染組445例和正常對照組317例。對11項研究中涉及較多的HLA-DQA1*0101,0102,0103,0104,0201,0301,0302,0401,0501,0601共10個位點進行了Meta分析。經綜合分析:①HLA-DQA1*0103和HLA-DQA1*0301可能為中國兒童Hp感染的易患性基因OR合并及其95%CI 分別為1.77(1.18,2.64),P=0.005；1.80(1.09,2.98)，P=0.02；②HLA-DQA1*0104和HLA-DQA1*0302位點存在異質性，按民族進行亞組分析，結果為：對于HLA-DQA1*0104，HLA-DQA1*0302位點漢族組間無異質性，而少數民族組仍有異質性，亞組結果顯示，HLA-DQA1*0302可能是我國漢族兒童的保護基因[OR合并及其95%CI為0.50(0.26,0.98),P=0.040]；HLA-DQA1*0104可能是少數民族兒童感染易患基因[OR合并及其95%CI為2.15(2.13,3.77),P=0.007]；③換用模型對其進行敏感性分析顯示，除HLA-DQA1*0104和HLA-DQA1*0301兩位點結論發生改變外，其余位點結論均未發生變化。而剔除小樣本后進行敏感性分析顯示結論均未發生改變。敏感性分析結果表明結果較可靠。結論中國兒童Hp感染可能與HLA-DQA1*0103和HLA-DQA1*0301位點有關聯，未發現其余位點與感染有關。

關鍵詞：幽門螺桿菌感染；人類白細胞抗原Ⅱ；HLA-DQA1；基因多態性；Meta分析

目前研究證實慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、胃腺癌、胃黏膜相關淋巴組織淋巴瘤等胃腸疾病及多種胃腸外疾病的發生、發展與幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染有關[1]。不同人群中的Hp感染率不同，Hp感染后是否致病或所致疾病類型也不盡相同。我國是Hp高感染國家，兒童是Hp感染的高危期，許多研究者認為可能與患者感染的Hp菌株的毒力高低有關,有作者提出患者本身存在對Hp易患或抵抗的免疫遺傳因素,這會影響Hp感染過程，并導致不同的結局[2]。人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)作為一個與疾病關聯最為密切的基因復合體，決定著不同個體發生疾病的易患性。近年來，國內外研究發現[3-5]，HLA-Ⅱ類基因，尤其是HLA-DQ等位基因的型別與Hp感染結局相關，但存在較大的人種與地域差異。隨著分子生物學技術的發展與應用,有關HLA-Ⅱ類抗原中DQA1上各等位基因位點基因型與Hp感染的相關性研究日益增多,但研究結論不盡相同,甚至相反，且多數研究樣本量均較小。因此,有必要采用Meta分析方法進行綜合評價,以明確我國兒童HLA-DQA1基因多態性與Hp感染的關系,旨在提供Hp遺傳易患性的循證醫學證據,以明確Hp與HLAⅡ類基因的關系,為進一步研究Hp基因遺傳易患性提供依據。

1資料與方法

1.1資料來源檢索中國生物醫學文獻數據庫(CBMdisc)和重慶維普數據庫(VIP)、萬方數據庫、清華同方(CNKI)、PubMed及MEDLINE數據庫中發表的以中國兒童為研究對象的相關文獻,檢索詞包括：人類白細胞抗原(HLA)，DQA1,基因多態性(gene polymorphism)及幽門螺桿菌感染(Helicobacter pylori infection)，檢索時限為1995年1月至2015年1月。

1.2文獻納入與排除標準納入標準:①國內外發表的有關中國兒童Hp感染與HLA-DQA1基因多態性相關性的研究文獻，語種為漢語和英語；②研究設計類型為病例對照研究；③以 HLA-DQA1基因各多態性位點分布頻數或頻率為研究指標,且數據描述清楚；④研究對象為中國兒童(18歲以下)。排除標準：①無對照組的研究或是綜述性文獻；②所需數據描述不清；③重復發表的文獻，取其一。

1.3文獻篩選及數據提取由兩位研究者按照上述納入和排除標準篩選文獻,意見不一致時通過第三方達成一致。并由兩人獨立對原始文獻數據信息進行提取，包括：①第一作者及發表時間；②民族；③Hp感染診斷方法；④HLA-DQA1基因的檢測方法；⑤是否經過H-W平衡檢驗；⑥研究對象來源(病種)；⑦HLA-DQA1等位基因位點；⑧樣本例數及統計學四格表中的基本數據。

1.4統計學方法采用RevMan 5.0軟件進行Meta分析,按照Meta分析要求整理文獻數據，用EXCEL建立文獻數據信息的電子文檔。以比值比(odds ratio,OR)及95%置信區間(confidence interval,CI)作為Meta分析的綜合效應指標。先對納入研究的文獻進行異質性檢驗，無異質性選擇固定效應模型；如果存在異質性則選擇隨機效應模型，作出森林圖。對存在異質性的研究進行亞組分析，以尋找異質性來源。

1.5敏感性分析敏感性分析是檢查Meta分析結果穩定性的方法。本研究根據選用不同模型和剔除小樣本研究，比較敏感性分析前后OR合并的點值和區間估計的差異，若區間有重疊，變化不大表明結果較可靠。

1.6發表偏倚的評估采用SAS 8.0軟件對lnOR與SE(lnOR)做回歸分析(Egger′s test)可以檢驗倒漏斗圖的對稱性，以回歸直線在Y軸上的截距a及其95%CI為漏斗形圖對稱性的評價指標[6]。

2結果

2.1納入研究的文獻基本情況根據上述的納入和排除標準，經篩選符合要求納入本次Meta分析的文獻有8篇，包括11項研究，均為有關中國兒童HLA-DQA1基因多態性與Hp感染關系的病例對照研究。累計Hp感染陽性者445例，Hp感染陰性者317例。在8篇文獻中,涉及較多的有HLA-DQA1*0101,0102,0103,0104,0201,0301,0302,0401，0501,0601 10個位點。見表1。

Hp：幽門螺桿菌；PCR-SSO:聚合酶鏈反應-序列特異性寡核苷酸探針雜交法；PCR-SSP:聚合酶鏈反應-序列特異性引物法

2.2異質性檢驗除有關DQA1*0104和*0302兩個位點的各研究結果間具有異質性(P=0.004，0.03)，因此采用隨機效應模型，其他位點的各研究結果間不存在異質性，故均采用固定效應模型。見表2。

2.3Meta分析結果Hp感染組與對照組HLA-DQA1等位基因分布頻率Meta分析結果見表2。其中,HLA-DQA1*0103和HLA-DQA1*0301與Hp感染的關聯強度差異有統計學意義(P<0.05)，OR合并及其95%CI分別為1.77(1.18，2.64)和1.80 (1.09，2.98),見圖1，2，未發現其余位點與感染有關。

2.4亞組分析異質性檢驗顯示，HLA-DQA1*0104和*0302均存在異質性，而且異質性較大，I2分別為67%和58%。為尋找其異質性來源，按照漢族和少數民族進行亞組分析,其結果如下：HLA-DQA1*0104、HLA-DQA1*0302位點，經亞組分析后，各少數民族的研究間仍存在異質性，兩位點有關漢族的各研究間均不存在異質性，見圖3、4。另外，HLA-DQA1*0302位點經亞組分析后，漢族組的OR合并及其95%CI為0.50(0.26，0.98),HLA-DQA1*0104位點，其他少數民族組的OR合并及其95%CI為2.15(1.23，3.77)，差異均有統計學意義(P<0.05)。

2.5敏感性分析①剔除小樣本的2項研究[11,14]后，各位點在剔除小樣本前后，OR合并及其95%CI相近，結論均未發生改變，表明結果較可靠。②換用模型結果表明：通過敏感性分析，除DQA1*0104和DQA1*0301兩位點結論發生改變，其他各位點均未改變，提示結果較穩定。見表3。

2.6發表偏倚的評估除DQA1*0104外，其他DQA1各等位基因的報道結果均未發現發表偏倚，見表4。

表2　感染組和對照組HLA-DQA1等位基因分布頻率Meta分析結果

FEM：固定效應模型；REM：隨機效應模型

圖1　DQA1*0103位點Meta分析森林圖

圖2　DQA1*0301位點Meta分析森林圖

圖3　DQA1*0302位點按民族進行亞組分析的森林圖

圖4　DQA1*0104位點按民族進行亞組分析的森林圖

[OR合并(95%CI)]

表4　用Egger′s法(線性回歸法)分析各位點發表偏倚結果

3討論

Hp是世界上感染率最高的細菌之一，感染者中有>90%的是在兒童期獲得的[15]。根據流行病學調查，Hp感染在不同國家、地區及種族間的檢出率有很大差別[16]。多數研究認為，不僅菌株的毒力強弱、地理環境、經濟狀況等因素影響Hp感染過程，不同人群免疫遺傳因素也與Hp感染有關[17-18]。HLA是迄今所知最復雜的人類遺傳多態性系統，也是機體最重要的遺傳因素，HLA基因的多態性是調控人體特異性免疫應答和決定疾病易患性個體差異的分子基礎，不同HLA基因型的個體對感染性病原體具有不同的易患性和抵抗性。關于HLAⅡ類基因與Hp感染關系的研究早在20世紀90年代就已開始但研究結果間存在明顯差別，并且我國的研究主要以小樣本居多，關于兒童的則相對較少，且結論不盡相同。在國內的研究中發現某些位點與Hp感染有關，但在歐洲卻沒有得出相同的結論，即HLA等位基因系統的免疫遺傳機制不影響Hp感染的發生，或對歐洲人胃腸道消化性疾病的影響不是由于HLAⅡ類基因多態性對Hp感染的易患性不同導致的[19-20]。

因此本研究采用Meta分析的方法,綜合評價中國兒童HLA-DQA1基因多態性與Hp感染的關聯性。結果顯示，DQA1*0103、*0301為易患基因，這與同樣以日本人群為研究對象的報道[21]DQA1*0301等位基因頻率在Hp陽性對照組明顯高于Hp陰性患者的結果一致。本研究在進行Meta分析時，DQA1*0302、*0104兩基因位點結果存在異質性，按照民族進行亞組分析后，漢族兒童間的異質性消失，而少數民族組仍存在，漢族兒童DQA1*0302與Hp的OR合并及其95%CI分別為0.50(0.26，0.98)，提示DQA1*0302可能為漢族的保護基因；在DQA1*0104位點表現是少數民族兒童感染的易患基因，OR合并及其95%CI分別為2.15(1.23,3.77)，說明不同民族是其產生異質性的原因。趙月華[13]對湖南長沙漢族正常人HLA-DQA1基因頻率與其他人群，如上海漢族、昆明彝族、美洲的墨西哥人、歐洲白人進行了比較，提示不同地區、不同種族HLA-DQA1基因分布存在較大的差異，這可能是導致研究結果不一致的主要原因。其次，在Hp感染中，其他免疫因素，如DR,DQ的某些基因座也起了一定的作用。第三，由于HLA基因具有高度多態性，某些HLA等位基因頻率較低,樣本量過小會造成結果不穩定，對結果均有一定影響。因此,有必要擴大樣本量并在多個不同種族、不同人群、不同區域進行深入的研究。另外，與Hp感染有關的其他因素，如環境因素、菌株毒力、社會經濟狀況、宿主行為習慣對研究結果會存在一定影響。

發表偏倚是影響Meta分析結果真實性的重要因素。這種偏倚是客觀存在，其識別可用Egger′s法(線性回歸法)[6]進行檢驗,對lnOR與SE(lnOR)作回歸分析,如回歸直線在Y軸上的截距a的95%CI包含0，提示漏斗圖基本對稱，Meta分析結果受發表偏倚影響較小。

參考文獻

[1]Bjorkholm B,Falk P,Engstrand L,etal.Helicobacter pylori:resurrection of the cancer link[J].J Intern Med,2003,253(2):102-119.

[2]Garza-Gonzalez E,Bosques-Padilla FJ,Perez-Perez GI,etal.Assoeiation of gastriccaneer,HLA-DQA1,and infeetion with Helie-obaeter Pylori CagA+ andVacA+ in a Mexiean population[J].J Gastroenterol,2004,39(12):1138-1142.

[3]Egger M,Davey Smith G,Schneider M.Bias in meta-analysis detected by a simple,graphical test[J].BMJ,1997,315(7109):629-634.

[4]Oksanen AM，Haimila KE，Rautelin HI，etal．Immunogenetic characteristics of patients with autoimmune gastritis[J].World J Gastroenterol,2010,16(3):354-358．

[5]李昭輝,王占民,張聯,等.山東臨朐人群HLA等位基因多態性與幽門螺桿菌感染關系的研究[J].遺傳,2004,26(2):143-146.

[6]Azuma T,Ito S,Sato F,etal.The role of the HLA-DQA1 gene in resistance to atrophic gastritis and gastric adenocarcinoma induced by Helicobacter pylori infection[J].Cancer,1998，82(6):1013-1018.

[7]許春娣,江石湖,陳舜年,等.十二指腸球潰瘍患兒HLA-DQA1等位基因頻率的研究[J].中華消化雜志,1999,19(3):172-174.

[8]許春娣,奚容平,陳舜年,等.幽門螺桿菌感染的患兒人類白細胞抗原DQA1的免疫遺傳學分析[J].中華兒科雜志,2000,38(12):746-749.

[9]戚勤.昆明彝族兒童幽門螺桿菌感染及其HLA-DQA1免疫遺傳學特征分析[D].昆明：昆明醫學院,2005.

[10]黃永坤,戚勤,李海林，等.幽門螺桿菌感染兒童HLA-DQA1免疫遺傳學特征分析[J].臨床兒科雜志,2004,22(10):652-655.

[11]王琳琳,陳亭平,林偉雄，等.羅城漢族、壯族和仫佬族兒童HLA-DQA1多態與幽門螺桿菌感染相關性研究[J].廣西醫學，2004,26(6):778-781.

[12]王美芬.昆明白族兒童幽門螺桿菌感染與HLA-DQA1等位基因相關性的研究[D].昆明：昆明醫學院,2006.

[13]趙月華.長沙漢族兒童HLA-DQA1遺傳變異與幽門螺桿菌易感性關系研究[D].長沙：中南大學,2007.

[14]方佳慧.反復腹痛患兒及其家族成員的幽門螺桿菌感染與HLA-DRB1、DQA1、DQB1等位基因頻率分析[D].昆明：昆明醫科大學,2012.

[15]Torres J,Perez-perez G,Goodman KJ,etal.A comprehensive review of the natural history of Helicobacter pylori infection in children[J].Arch Med Res,2000,31(5):431-469.

[16]中華醫學會消化病學分會.第三次全國幽門螺桿菌感染若干問題共識報告[J].胃腸病學,2008,13(1):42-46.

[17]Duquesnoy RJ.A structurally based approach to determine HLA compatibility at the humoral immune level[J].Hum Immunol,2006,67(11):847-862.

[18]Ando T,Goto Y,Ishiguro K,etal.The interaction of host genetic factors and Helicobacter pylori infection[J].Inflammopharmacology,2007,15(1):10-14.

[19]Kunstmann E,Hardt C,Treitz H,etal.In the European population HLA-classⅡ genes are not associated with Helicobacter pylori infection[J].Eur J Gastroenterol Hepatol，2002,14(1):49-53.

[20]Santolaria S,Barrios Y,Benito R,etal.Helicobacter pylori and immunogenetic factors of the host:relevance of the HLADQA1*0102 and*0301 alleles in peptic ulcer[J].Gastroenterol Hepatol,2001,24(3):117-121.

[21]Azuma T,Konishi J,Tanaka Y,etal.Contribution of HLA-DQA1 gene to host′s response against Helicobacter pylori[J].Lancet,1994,343(8896):542-543.

Meta-analysis on Relationship between HLA-DQA1 Gene Polymorphism and Helicobacter Pylori Infection in Chinese ChildrenZHANGTie-min1，ZHANGTian-zhe2,CHENYin-ping2,ZHUHong-li1，CHENXiao-qing1. (1.DepartmentofPediatric,HospitalofTangshanSteelCompany,Tangshan063000,China;2.DivisionofEpidemiologyandHealthStatistics,SchoolofPublicHealth,NorthChinaUniversityofScienceandTechnology,Tangshan063000,China)

Abstract:ObjectiveTo assess the associations of HLA-DQA1 gene polymorphism with Helicobacter pylori(Hp) infection in Chinese children through meta-analysis.MethodsArticles published from 1995 to 2015 on the relationship between HLA-DQA1 gene polymorphism and Helicobacter pylori infection were searched from CBMdisc,CNKI database,VIP database,Wanfang database,Pubmed and Medline,using the searching terms of “Helicobacter pylori”“HLA-DQA1”“gene polymorphism”“children”,etc.The results were quantitatively analyzed by RevMan 5.0 software,the pooled odds ratio(OR) were calculated by choosing fixed effect model or random effect mode,according to the result of Heterogeneity test.ResultsA total of 445 children with Helicobacter pylori infection and 317 uninfected healthy controls were included from 11 studies.Meta-analysis were conducted in the following gene loci：HLA-DQA1*0101,0102,0103,0104,0201,0301,0302,0401,0501,0601.After comprehensive analysis:①HLA-DQA1 *0103 and HLA-DQA1*0301 alleles were the risk factors of Hp infection,the values of pooled odds ratio were 1.77(95%CI 1.18-2.64,P=0.005)and 1.80(95%CI 1.09-2.98,P=0.02)respectively.②Subgroup-analysis:the results of subgroup analyses based on nationality showed:for HLA-DQA1*0104 and HLA-DQA1*0302 no heterogeneity was observed in Han nationality group，but not in minority group as to HLA-DQA1*0302.In addition，statistical difference was found after subgroup analyses in the Han nationality group.HLA-DQA1*0302 alleles were the protection factors against Hp infection,and the values of pooled odds ratio were 0.50(95%CI 0.26-0.98,P=0.04).HLA-DQA1*0104 alleles were the susceptible factors against helicobacter pylori infection in the minorities,and the values of pooled odds ratio were 2.15(95%CI 2.13-3.77,P=0.007).③Sensitivity analysis：almost all the conclusions were not changed except for the DQA1*0104 and DQA1*0301 when changing statistical model,while sensitivity analysis did not change the conclusions after removing the small sample,showing that the results were reliable.ConclusionThe occurrence of Hp infection is associated with the gene polymorphism of HLA-DQA1*0103，*0301 in Chinese children,while no correlations with other loci are observed.

Key words:Helicobacter pylori infection; Human leukocyte antigenⅡ; HLA-DQA1; Gene polymorphism; Meta-analysis

收稿日期：2015-06-01修回日期：2015-08-24編輯：伊姍

基金項目：唐山市科學技術研究與發展指導項目(111302092a；12130294b)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.20.042

中圖分類號：R573

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)20-3759-05