鴨胚大腸桿菌和肺炎克雷伯菌的分離鑒定與藥敏分析

王苗利 陳靜 李玉杰 徐鴻 曹振山

摘 ?要：2015年4月，濱州市無棣縣某鴨場最近出現鴨胚孵化率下降，死胚率達到30%。實驗室對送檢的3枚鴨胚進行了細菌分離、生化鑒定及藥敏分析。通過對鴨胚的細菌分離純化，得到兩種細菌，均為革蘭氏陰性桿菌;通過對兩種細菌生化鑒定，結果為大腸桿菌和肺炎克雷伯菌;對兩種菌進行藥敏分析，根據藥敏結果對鴨場進行科學用藥，降低濫用藥、過度用藥對鴨場帶來的危害。

關鍵詞：鴨胚;細菌分離;生化鑒定;藥敏分析;大腸桿菌;肺炎克雷伯菌

中圖分類號：S858.325.1 ? ? 文獻標識碼：B ? ? 文章編號：1673-1085（2015）06-0010-03

大腸桿菌病是養鴨場最常見的細菌病之一。大腸桿菌既可以水平傳播，也可以垂直傳播，主要引起鴨的卵黃吸收不全、心包炎、氣囊炎、肝周炎[1]，本菌由于很容易產生耐藥性，實際生產中感染途徑及感染原因不一，臨床治療越來越復雜。

肺炎克雷伯菌廣泛分布于自然界，該菌近年來成為僅次于大腸桿菌的最重要的條件致病菌[2-4]，主要存在于人和動物腸道、呼吸道、泌尿生殖道。肺炎克雷伯菌可在全身各部位發生感染，但最高的發病率在尿路和呼吸道。

近年來，禽病感染發病原因越來越復雜，混合感染越來越常見，再加上抗生素的濫用，細菌的耐藥性越來越強，給臨床診斷帶來了很大的困難。因此，根據實驗室診斷以及科學的藥敏分析，合理的指導用藥治療，成為今后發展的趨勢，相信如果廣大養殖用戶都能科學、合理的用藥，一定會改善抗生素濫用、細菌耐藥性增強的現象，減少抗生素給禽以及人類帶來的危害，更好地應對禽場的疫病防控。

1 ?發病情況

2015年4月份，濱州市無棣縣某鴨場最近出現了鴨胚在孵化過程中死亡情況，經過了解，場內種鴨正常，無明顯癥狀，之前受精卵、孵化率均正常，大約28日出殼;但最近一批鴨胚孵化至24d落盤后，至第26天開始出現死胚。實驗室接到場主送檢的樣本后，立即開展檢驗，并根據檢驗結果指導用藥，得到了良好效果。

2 ?試驗材料與方法

2.1 ?試驗材料 ?科馬嘉顯色培養基，營養瓊脂，革蘭氏染色液，奧林巴斯顯微鏡，梅里埃生化及藥敏儀VITEC2。

2.2 ?試驗方法

2.2.1 ?病料接種 ?無菌操作，將鴨胚表面用酒精和碘酊消毒;從蛋殼氣室一端敲一小孔，用無菌棉棒伸入蛋內至卵黃，沾取病料接種于顯色培養基上，接種完后將平皿倒置放于溫箱中，37℃培養18～24h。

2.2.2 ?細菌染色鏡檢及分離純化 ?挑取顯色平板上培養出的細菌進行革蘭氏染色，染色步驟為：結晶紫溶液染色1.5min后，清水洗凈;革蘭氏碘液酶染1.5min后，清水洗凈;酒精脫色40s后，清水洗凈;最后用復紅溶液染色20s后，清水洗凈。將玻片自然晾干，在目標區域滴加松柏油，100倍油鏡觀察細菌形態。

結合鏡檢結果及培養基培養出的細菌顏色、形態的不同，挑取單菌落，三線劃線法純化到營養瓊脂平板上，將營養瓊脂平板倒置放于溫箱中，37℃培養18～24h。

2.2.3 ?細菌鑒定及藥敏分析 ?將純化的營養平板取出，置于超凈臺內，根據染色鏡檢結果，選擇合適的鑒定、藥敏卡片;無菌操作，分別挑取單菌落接種于3ml 0.45%氯化鈉溶液中，菌懸液濃度控制在0.5～0.63Mc濃度，備裝鑒定卡片;濃度調好后，無菌吸取250μl菌懸液于新的3ml 0.45%氯化鈉溶液中，備裝藥敏卡片;將鑒定卡片和藥敏卡片分別插入制備好的菌懸液中，做好標記，裝載上機，5～18h后讀取結果。

3 ?結果與分析

3.1 ?病料接種培養結果 ?經過溫箱37℃培養18～24h后，取出平板，觀察到平板上長出兩種細菌，分別為紫紅色和藍色的菌落。

3.2 ?細菌染色鏡檢結果 ?經過革蘭氏染色，確定平板上長出的細菌為兩種，均為革蘭氏陰性桿菌。

3.3 ?細菌生化鑒定及藥敏分析 ?生化鑒定結果見表1、表2，根據鏡檢結果，選擇GN革蘭氏陰性桿菌鑒定卡片和GN13革蘭氏陰性桿菌藥敏卡片，制備菌懸液并上機;經過鑒定和藥敏分析，鑒定結果為大腸桿菌和肺炎克雷伯菌，藥敏結果見表3、表4。

由表1可知，生化結果符合大腸桿菌生化譜，置信度極好的鑒定結果，符合率為99%;由表2可知，生化結果符合肺炎克雷伯菌生化譜，置信度極好的鑒定結果，符合率為98%;由表3可知，此大腸桿菌首選藥依次為厄他培南、慶大霉素、妥布霉素，由表4可知，此肺炎克雷伯菌首選藥依次為環丙沙星、左氧氟沙星、厄他培南、慶大霉素。

4 ?討論

結合此次藥敏試驗的結果，以及考慮較小的血藥濃度，建議此鴨場選擇慶大霉素治療，血藥濃度控制在1μg/ml，防止濫用藥、過度用藥，造成微生物生態失衡、耐藥菌株的增加的現象。

另外，大腸桿菌、肺炎克雷伯菌是常見的傳染性病原菌，建議養殖場在日常中注意生物安全的科學管理，舍內、舍外定期消毒，減少病原菌的繁殖;及時清理病死禽及糞便，并做無害化處理;定期對場內鼠類等動物進行滅殺;減少外來獸醫等人員帶來的感染風險;減少與場外禽類的接觸風險。

參考文獻：

[1] ?宋修慶.鴨場大腸桿菌病的危害與防治[J].獸醫導刊，2011（10）：30-31.

[2] ?Ronald A.The ctiology of urinary tract infection：traditional and emerging pathogens[J].Dis Mon，2003，49（2）：71-82.

[3] ?Craven DE.What is healthcarc-associated pneumonia，and how should it be treated？[J].Curr Opin Infect Dis，2006，19（2）：153-160.

[4] ?Gupta A.I lospital-acquired infections in the neonatal intensive care unit-Klebsiella pneumonia[J].Semin Pcrinatol，2002，26（5）：340-345.