解郁方對抑郁模型小鼠腦內單胺類神經遞質及單胺氧化酶含量的影響

解郁方對抑郁模型小鼠腦內單胺類神經遞質及單胺氧化酶含量的影響

韓珍1，賀弋2

(1.首都醫科大學附屬北京佑安醫院生物醫學信息中心，北京 100069;2.寧夏醫科大學生理學教研室，寧夏 銀川 750004)

摘要：目的研究解郁方抗抑郁作用的機理。方法采用酶聯免疫檢測試劑盒測定小鼠腦組織中單胺類神經遞質含量；分光光度計法檢測小鼠腦組織中單胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)活性，來研究解郁方抗抑郁作用的機制。結果解郁方Ⅰ和Ⅱ(12.00、6.00 g·kg-1)組均可顯著升高小鼠腦內去甲腎上腺素、5-羥色胺、多巴胺(分別為P<0.01,P<0.05)，解郁方Ⅰ和Ⅱ組可顯著降低MAO活性(分別為P<0.01,P<0.05)。結論解郁方可能是通過抑制MAO活性,使突觸間隙的單胺類神經遞質含量升高,而起到抗抑郁作用。

關鍵詞：抑郁癥；解郁方；利血平模型；單胺類神經遞質；單胺氧化酶；作用機理

基金項目：寧夏自然科學

作者簡介：韓珍，女，博士研究生，研究方向：細胞生物學、肝纖維化的逆轉、睡眠生理和抗抑郁研究，E-mail:yanyiziloulan@sina.com

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A

The effects of Jieyufang on the content of monoamine neurotransmitter and

monoamine oxidase in the brain of depressive model mouse

HANZhen1，HEYi2

(1.CenterofBiomedicalInformation,BeijingYouanHospital，CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China；

2.PhysiologyDepartmentofNingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750004,China)

Abstract：ObjectiveTo study the mechanism of antidepressant effect of Jieyufang.MethodsTo study the possible mechanism,the following methods had been carried out:the content of monoamine neurotransmitter was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA);The content of monoamine oxidase in the mouse brain was determined by spectrophotometry.ResultsIn the Jieyufang groupⅠ,Ⅱ the content of 5-HT,DA and NE in the brain increased significantly (P<0.01,P<0.05);The content of MAO in the brain decreased significantly(P<0.01,P<0.05).ConclusionThe mechanism of antidepressant may be associated with decrease the activity of MAO,increase the concentration of 5-HT,NE,DA in the brain.

Key words:Depression;Jieyufang；Reserpine model mouse；Monoamine neurotransmitter；Monoamine oxidase;Mechanism of action

抑郁癥(depression)是臨床最常見的精神疾患之一，隨著人們生活工作節奏的加快,抑郁癥的發病率日趨增加。國際衛生組織預測2020年抑郁癥將成為全球第2位威脅人類健康、增加經濟負擔的疾患[1]。目前研究認為腦內單胺遞質的功能紊亂與抑郁癥的多種癥狀有關,增加單胺遞質水平是減輕抑郁癥的重要途徑之一[2~4]。利血平模型作為一種有效的抑郁模型，已被廣泛應用于抑郁癥的基礎研究和各種治療方法的篩選[5]。本實驗通過利血平模型，研究解郁方對小鼠單胺類神經遞質及單胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)含量的影響。

1材料

1.1動物健康ICR小鼠，雌、雄各半(體重18~22 g)，寧夏醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(寧)2005-0001，在實驗室常規條件下飼養，自然晝夜，所有實驗在白天進行。

1.2藥物及試劑解郁方(由白芍、郁金、萱草花等藥物組成 )，臨床用量為0.6 g·(kg·d)-1(成人體重按60 kg計算)，由寧夏醫學院中藥教研室鑒定，化學教研室煎制，貯存于4 ℃冰箱中備用；嗎氯貝胺(批號：071105，上海信誼百路達藥業有限公司)；利血平(批號：x070302，上海復旦復華藥業有限公司)；5-羥色胺酶聯免疫檢測試劑盒(批號：20071109)；去甲腎上腺素酶聯免疫檢測試劑盒(批號：20071109)；多巴胺酶聯免疫檢測試劑盒(批號：20071109)；均為ADL公司產品；單胺氧化酶檢測試劑盒(批號：20071112)；蛋白定量測定試劑盒(批號：20071114)，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3儀器550型酶標儀(BIO公司)。1575型洗板機(BIO公司)；DMS200型紫外可見分光光度計(美國Varian公司)；VXH-3微型旋渦混合器(BIO公司生產)；XK24-1060007型電熱恒溫培養箱(上海躍進醫療器械廠)；MM-1型微型混合器(BIO公司生產)；TG328A型分析天平(上海天平儀器廠)；LXJ-IIB型離心機(上海安亭科學儀器廠)；5 mL玻璃勻漿器。

2方法

2.1分組及給藥小鼠按性別、體重隨機分為正常對照組、模型組、陽性藥物組和解郁方組。正常對照組：給予蒸餾水；模型組：利血平(0.004 g·kg-1)；陽性藥物組：嗎氯貝胺(0.04 g·kg-1)；解郁方組：分為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組 (12.00、6.00、3.00 g·kg-1)。每組10只小鼠，灌胃給藥，嗎氯貝胺組每天2 次，其余組每天1次，連續21 d。

2.2造模參見拮抗利血平實驗[6]，末次給藥1 h后，腹腔注射利血平0.004 g·kg-1。

2.3標本采集實驗結束后，實驗動物斷頭處死，迅速在冰臺上剝離全腦，去小腦后平均分為左右兩份(左側腦組織供測單胺遞質用，右側腦組織供測MAO用)，分別稱重，按300~400 mg腦組織加入1 mL預冷的PBS溶液，玻璃勻漿器冰上勻漿，4 ℃離心3 000 rpm 15 min，取上清液，-20 ℃冷凍保存待測。

3結果

3.1小鼠腦內單胺類神經遞質測定結果結果見表1。

表1　小鼠腦內單胺類神經遞質測定結果 ± s)

注:與正常組比較，△△P<0.01；與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01

3.2小鼠腦內MAO測定結果結果見表2。

珠江水運：新時代賦予新使命，新使命要求海事人有新擔當。隨著共建“平安西江”行動持續推進，無論是從社會治理方面，還是綠色環保、服務大灣區建設方面，都對“平安西江”行動提出了更高的要求。請問廣東海事局將如何牽頭，繼續開展行動？

4討論

抑郁癥是一種以情感病態變化為主的精神障礙疾病，患者情緒紊亂，甚至具有自殺傾向，被中醫列為“郁癥”范疇，其病理機制為氣機失調，內氣及血，導致肝氣郁結，心神失養。在治療方面歷代醫家多主張治郁先治氣，調氣先治肝。解郁方是由白芍、郁金、萱草花等中藥組成。該方具有疏肝解郁安寐的功效，白芍藥直入肝經，柔肝疏肝以益其匱乏之氣，自然血生而火熄；郁金行氣化瘀、清心解郁、醒腦開竅；萱草花，又名金針菜，根據《本草綱目》記載，其具有“寬胸膈，安五臟，安寐解郁，清熱養心”的作用。

表2　小鼠腦內MAO測定結果

注:與正常組比較，△△P<0.01；與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01

雖然抑郁癥的病理生理機制尚不清楚，但抑郁癥的單胺遞質學說已經得到了普遍的認同，查閱文獻目前國內的中藥開發的藥效學實驗多以該學說為理論指導。1965年， Schildkraut和Bunney提出抑郁癥的中樞5-羥色胺(5-HT)和去甲腎上腺素能(NE)改變的假說，認為抑郁癥發病機制可能與中樞神經突觸所釋放的神經遞質5-HT或NE的減少有關。研究證明，5-HT耗竭劑能使抑郁癥狀加劇，且5-HT降低程度與癥狀嚴重程度呈正比[7]。NE參與學習、記憶、睡眠、焦慮以及獎賞系統的功能，在抑郁癥病人中，以上功能均有不同程度的紊亂。躁狂癥與NE的升高有關，抑郁癥則與N的缺乏有關[8]。資料顯示減少DA水平的藥物，如利舍平可導致抑郁心境，而一些增加DA的藥物如苯丙胺可產生興奮。條件回避實驗和強化訓練實驗表明，腦內DA含量的增加可使動物產生興奮，增強行為動機[9]。增加大腦單胺類神經遞質水平是減輕抑郁癥的重要途徑之一。目前研究較多的5-HT和NE重吸收抑制劑或者選擇性5-HT或NE重吸收抑制劑阻斷5-HT能神經末梢和NE能神經末梢對5-HT和NE的重攝取，使它們在突觸間隙濃度升高,使病情得到改善[10,11]。本實驗結果顯示嗎氯貝胺組及解郁方高、中劑量組腦組織中單胺類神經遞質均顯著高于模型組(分別為P<0.01,P<0.01,P<0.05)。

MAO是胺類代謝的主要酶類，一般認為MAO抑制劑具有抗抑郁、抗焦慮作用[12]。在前期的研究中已發現其具有一定的抗抑郁作用[13,14]。MAO活性升高，單胺類神經遞質分解代謝加強，突觸間隙單胺類神經遞質的含量降低，這與人類抑郁癥的“單胺遞質假說”相符合。從早期的三環類抗抑郁藥到近年選擇性5-HT重吸收抑制劑等，都基于影響單胺類神經遞質，提高突觸間隙神經遞質濃度[4，15]。作為傳統的MAO抑制劑嗎氯貝胺的抗抑郁作用主要通過抑制體內MAO，從而減少對5-HT、NE與DA的降解，提高其在突觸間隙的濃度，達到治療抑郁癥的目的。本實驗結果顯示嗎氯貝胺組及解郁方高、中劑量組腦組織MAO均顯著低于模型組(分別為P<0.01、P<0.01、P<0.05)。

綜上所述，解郁方高劑量組可以明顯改善抑郁小鼠腦內單胺類遞質含量、降低MAO活性，提示解郁方的抗抑郁作用可能與阻斷單胺類遞質的重攝取和降低MAO活性，增加突觸間隙5-HT、DA、NE含量有關。對解郁方抗抑郁的作用機理,需要繼續深入研究。

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