固相萃取—高效液相色譜法測定植物油中苯并（a）芘的含量

鄧新煜

摘 要：該文建立了一種固相萃取-高效液相色譜法測定植物油中苯并（a）芘含量的方法，樣品經正己烷提取，采用Poly-SeryBAP苯并（a）芘專用SPE小柱凈化，采用C18色譜柱分離，以乙腈/水=90/10（V/V）為流動相，熒光檢測器檢測。結果表明，苯并（a）芘在0.40～40.0μg/L濃度范圍內線性關系良好，相關系數為0.999 9，方法的檢出限為0.1μg/kg。樣品加標回收率為83.2%～93.6%，相對標準偏差在2.8%～4.7%。該方法耗費溶劑少，去油效果佳，靈敏度高，選擇性好，方便快捷，適用于植物油中苯并（a）芘的測定。

關鍵詞：植物油；固相萃取；苯并（a）芘

中圖分類號 R155.58 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2016）01-73-03

Determination of the Benzo（a）Pyrene in Edible oil by Solid Phase Extraction-High Performance Liquid Chromatography

Deng Xinyu

（LiaoNing Institute for Food Control，Shenyang 110015，China）

Abstract：To develop a method for determination of benzo（a）pyrene in vegetable oil by high performance liquid chromatography after solid phase extraction（SPE）.Samples were extracted with hexane，then cleaned-up using Poly-SeryBAP SPE column，and separated on an Xbridge-C18 column using a mobile phase consisting of acetonitrile and water（V/V=90∶10）by gradient elution.Finally the benzo（a）pyrene was detected with FLD. The benzo（a）pyrene showed good linearity in the range of 0.40～40.0μg/L（r=0.999 9）. The recoveries were 83.2%～93.6%，and the RSD was 2.8%～4.7%. The limit of detection was 0.1μg/kg.The method had less solvent consumption and the degreasing effect was good. The method was simple，feasible and accurate and it could be applied to the quantification of benzo（a）pyrene in vegetable oil.

Key words：Vegetable oil；Solid phase extraction；Benzo（a）pyrene

“苯并（a）芘”是一種多環芳香族碳氫化合物，是一種很強的致癌物，在人類基因及其衍生物中，苯并（a）芘的致癌性最強，污染程度也最廣[1-2]。在植物油加工中，苯并（a）芘由于具有強親脂性，經過高溫加熱后極易富集在油脂中，通常含量在1/109～1/1013數量級，但其對油脂品質的危害卻不容忽視[3]，遭受污染的動植物油脂嚴重威脅人類的身體健康。目前，我國對常見食物中苯并（a）芘的限量標準為：肉制品、糧食制品衛生標準為5μg/kg以下，植物油為10μg/kg以下，熏烤動物性食品為5μg/kg以下。

目前，苯并（a）芘的測定方法主要有薄層層析法、熒光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜-質譜聯用法、液相色譜-質譜聯用法[4-11]等。前處理方法也因樣品基質性質的不同而有差異。高效液相色譜法具有操作簡單、定量準確、重現性好等優點，是目前檢測苯并（a）芘最常用的方法。GB/T 22509-2008《動植物油脂中苯并（a）芘含量的測定反相高效液相色譜法》中，采用去活的氧化鋁層析柱進行油脂中苯并（a）芘測定的前處理，使用溶劑多，填充玻璃柱耗時長，方法較繁瑣，而且均勻性差。為此，本文建立了一種固相萃取-高效液相色譜法測定植物油中苯并（a）芘的含量的方法，采用上海安譜科學儀器有限公司開發的Poly-SeryBAP苯并（a）芘專用SPE小柱，克服了國標方法的缺點，方法簡單快速，不需要進行復雜的活度調節和活性測試，整個操作時間不超過1h，耗費溶劑少，去油效果佳，能有效去除油脂等干擾，有較高的回收率和穩定性；能滿足基層實驗室對植物油中苯并（a）芘的測定要求，對準確測定植物油脂中苯并（a）芘的含量，控制食用動植物油脂的質量安全具有重要意義，適用于各種食品基質的檢測。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀（四元泵，自動脫氣裝置，自動進樣器，恒溫箱，熒光檢測器）：美國安捷倫公司生產。

1.1.2 試劑 正己烷、乙腈、二氯甲烷均為色譜純：國藥集團化學試劑有限公司生產；苯并（a）芘標準儲備液（濃度5.05μg/mL，2mL/支）：中國計量科學研究院生產；苯并（a）芘專用固相萃取柱：上海安譜科學儀器有限公司生產。

1.1.3 樣品 市售食用植物油。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理方法 稱取混勻植物油脂樣品0.5g（精確至0.001g），用5mL正己烷溶解，渦旋混勻器上充分混勻，作為待凈化液。將待凈化液加入經過活化（使用前向固相萃取柱依次加5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化）的固相萃取小柱，然后再用2mL正己烷潤洗樣品瓶，也上樣到柱上；用10mL正己烷淋洗小柱；用5mL二氯甲烷洗脫并收集流出液。將收集液在40℃下氮氣吹干，用1mL乙腈定容，超聲1min，再渦旋混合10s，過0.45μm濾膜，待上機檢測。

1.2.2 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18，5.0μm，250mm×4.6mm；流動相：V（乙腈）∶V（水）=90∶10；流速：1.0mL/min；熒光檢測器：激發波長384nm，發射波長406nm；進樣量：10μL；柱溫：30℃。

1.2.3 標準曲線的繪制 將濃度為5.05μg/mL的苯并（a）芘標準儲備溶液，用甲醇逐級稀釋得101.0ng/mL的標準使用液，分別吸取0.02、0.04、0.20、1.00、2.00mL的標準使用液，用甲醇定容至5mL，依次得到濃度分別為0.40、0.80、4.00、20.00、40.00ng/mL的標準系列。以標準系列濃度為橫坐標，以相對應的峰面積為縱坐標繪制曲線，得苯并（a）芘的HPLC法標準曲線。

1.2.4 精密度和回收率的測定 稱取空白樣品，添加苯并（a）芘標準品進行方法回收率和精密度實驗。樣品中苯并（a）芘的添加量分別為5.0、15.0、25.0μg/kg，每個水平平行測定6次。計算平均值、變異系數及方法回收率。

2 結果與分析

2.1 溶劑的選擇 根據苯并（a）芘的物理性質，本文考察了采用正己烷、乙腈及甲醇作為溶劑溶解同一樣品，結果發現，采用正己烷作為溶劑比采用乙腈、甲醇作溶劑，苯并（a）芘的保留時間提前。表明苯并（a）芘溶解在不同極性的溶劑中，其本身的極性也有所變化，從而引起出峰時間的差異[12]。因此本實驗選用正己烷作為溶劑溶解樣品。

2.2 SPE柱的選擇 考察由于植物油中苯并（a）芘含量一般處于μg/kg級別，中性氧化鋁SPE柱填料量較多，可以處理較多油樣，因此選用中性氧化鋁SPE柱較為合適。與GB/T22509-2008采用的手工裝填中性氧化鋁SPE柱相比，商品化的中性氧化鋁SPE柱避免了人工處理填料和裝填的繁瑣過程，省時省力，同時避免了人工裝填過程的隨機性誤差，因此測定結果更加穩定可靠[13]。本實驗采用商品化的Poly-SeryBAP苯并（a）芘專用SPE小柱，方法操作簡單快速，耗費溶劑少，去油效果佳，能有效去除油脂等干擾，有較高的回收率和穩定性。

2.3 線性范圍和檢出限的測定 以苯并（a）芘濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，采用外標法定量。苯并（a）芘在0.40～40.0μg/L范圍內符合線性關系，回歸方程為y=1.88308x-0.108034，相關系數r=0.999 9，表明其線性關系良好。進空白樣品，以儀器信噪比（S/N）為3計，測得方法的最低檢出濃度為0.1μg/kg。

2.4 回收率和精密度 在陰性樣品中各加入適量的苯并（a）芘標液，按照樣品前處理方法，作3個濃度加標回收試驗，每個濃度作6個平行，結果如表1。由表1可知，加標回收率為83.2%～93.6%，相對標準偏差在2.8%～4.7%，回收率及精密度結果符合食品理化分析的要求。

2.5 實際樣品測定 采用本方法對市場采集的20個油脂樣品進行測定，樣品種類包括：葵花籽油、玉米油、花生油、大豆油等，其中4份檢測出苯并（a）芘組分，但含量均小于10.0μg/kg。

3 結論

本文建立了一種固相萃取-高效液相色譜法測定植物油中苯并（a）芘的含量的方法，樣品用正己烷提取，采用苯并（a）芘專用SPE小柱，方法簡單快速，回收率及精密度均獲得滿意結果，該方法與CB/T22509-2008法比較，縮短了檢測時間、提高了檢測效率，適用于植物油中苯并（a）芘含量的測定。

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（上接74頁）

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