XRCC1基因單核苷酸多態性對胃癌卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感性研究

孫慧，陳錦飛，方岳雨，檀心廣，崔婷允，吉蓮花

(1.南京市浦口區中心醫院腫瘤科，江蘇 南京 211800；2.南京市第一醫院腫瘤科，江蘇 南京 211800)

XRCC1基因單核苷酸多態性對胃癌卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感性研究

孫慧1，陳錦飛2，方岳雨1，檀心廣1，崔婷允1，吉蓮花1

(1.南京市浦口區中心醫院腫瘤科，江蘇 南京 211800；2.南京市第一醫院腫瘤科，江蘇 南京 211800)

目的 探討XRCC1Arg194Trp、Arg399Gln基因單核苷酸多態性對胃癌患者卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感性有無影響。方法選取我院2013年1月至2014年6月經病理確診晚期胃癌患者86例，采用卡培他濱聯合奧沙利鉑化療3個周期后進行臨床療效評價。收集臨床資料和外周血標本，利用TaqMan-MGB探針等位基因分型技術對XRCC1Arg194Trp、Arg399Gln進行基因分型，比較不同基因型患者的聯合化療效果。結果86例患者中52例化療敏感(60.5%)；XRCC1Arg194Trp位點，攜帶Trp(Arg/Trp+Trp/Trp)基因型化療敏感率為70.8%，Arg/Arg基因型化療敏感率為47.4%(P=0.027)；Trp基因型患者中位TTP為9.48個月，Arg/Arg基因型患者中位TTP為7.36個月(P=0.024)；Arg/Arg基因耐藥風險顯著高于Trp基因(OR：2.84，95%CI：0.772～4.313，P=0.031)；XRCC1Arg399/ Arg位點，攜帶Arg/Arg基因化療敏感率為72.5%，Gln(Arg/Gln+Gln/Gln)基因型化療敏感率為42.9%(P=0.007)；Arg/Arg基因中位TTP為10.26個月，Gln基因型中位TTP為8.03個月(P=0.012)；Gln基因耐藥風險顯著高于Arg/ Arg基因(OR：4.62，95%CI：1.637～7.201，P=0.012)。結論XRCC1Arg194Trp、Arg 399Gln基因單核苷酸多態性可能與卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感性有關。

XRCC1基因；單核苷酸多態性；卡培他濱；奧沙利鉑；化療；敏感性

胃癌是我國最常見的消化道腫瘤之一，其發病率占全球40%以上。胃癌發現時多數已是中晚期，雖然可以進行手術干預，但是術后復發率高、易轉移，所以化療仍然是中晚期胃癌最重要的治療手段。卡培他濱聯合奧沙利鉑的化療方案已經被廣泛運用于胃癌治療，在臨床取得較好療效。但是部分患者出現耐藥現象，為最佳化療方案的選擇帶來困惑。有學者提出腫瘤患者對化療藥物耐受可能與自身個體差異有關，尋找到這種差異并以此進行個體化治療可能對提高患者療效有幫助[1]。目前已經發現了多種與腫瘤耐藥反應相關的多態性基因[2]，在藥物運轉、代謝、腫瘤細胞反應等方面發揮作用。X線修復交叉基因1(XRCC1)是DNA修復基因家族的重要成員，在體內單鏈斷裂修復和堿基切除修復過程中扮演核心角色，其多態性表現可以導致不同個體對DNA修復能力不同，從而影響化療藥物尤其是鉑類藥物的耐藥性[3]。因此本研究選擇XRCC1基因Arg194Trp、Arg399Gln位點，以TaqMan-MGB探針法進行基因分型，探討其單核苷酸多態性(SNPs)與卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感性的關系，以期能夠為胃癌患者提供有針對性和可預見性的化療方案找到依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2013年1月至2014年6月收治晚期胃癌患者86例，男性51例，女性35例，年齡29～64歲，中位年齡53歲。所有患者均經過電子胃鏡或者手術病理證實，有可以測量病灶，體力狀況根據美國東部腫瘤協助組評分標準≤2分，預計生存時間＞3個月。患者無心、肝、腎、肺等全身性疾病，心電圖、肝腎功、血常規等檢查均符合化療要求，患者及家屬知曉本研究的目的、過程、意義，并同意參與。

1.2 化療方案及療效評定 采用卡培他濱聯合奧沙利鉑化療方案：奧沙利鉑：130 mg/m2，靜脈滴注2 h，第1天；卡培他濱：1 000 mg/m2，每日早晚各一次，1～14 d；3周為一個周期。化療期間所有患者均給予5-羥色胺受體拮抗劑類止吐藥，不常規預防使用人重組粒細胞集落因子。每周復查血常規兩次，每化療周期前復查肝腎功能、心電圖，保證患者每一周期均符合化療要求。

1.3 療效評定 3個周期后進行療效評定。采用國際抗癌聯盟實體腫瘤客觀療效標準[4]：完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩定(SD)、進展(PD)，CR+PR為敏感。

1.4 方法

1.4.1 基因組DNA提取 患者化療前收集2 ml EDTA抗凝血備用。使用全血基因組DNA抽提試劑盒(北京艾德萊生物)提取基因組DNA。分光光度儀測定260/280吸光度值，1.6～2.0之間為樣本合格，-80℃保存備用。

1.4.2 基因分型 采用TaqMan-MGB SNP基因分型試劑盒(ABI，美國)以及TaqMan-MGB Universal PCR試劑盒(ABI，美國)，探針和引物均由美國ABI公司設計合成。PCR反應體系：PCR Master Mix 5μl，40×TaqMan SNPs Genotyping Assay Mix 1μl，基因組DNA(10 ng/μl)1μl，余用dd水補足至10μl。PCR擴增儀(ABI，美國)進行PCR擴增：95℃10 min激活體系內酶，95℃變性15 s，60℃延伸1 min，設定40個循環。使用ABI 7900實時熒光PCR等位基因辨別系統對DNA樣本進行分型，不同等位基因根據各自VIC、FAM不同熒光強度被區分。

1.5 統計學方法 采用SPSS13.0軟件統計包進行數據分析，采用χ2檢驗分析不同基因型與化療效果的關系；采用非條件Logistic回歸分析不同基因型耐藥風險；采用Kaplan-Meier法分析生存曲線；采用COX比例風險模型分析不同基因型與預后關系。所有檢驗均以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 基因型分布 86例胃癌患者中，攜帶XRCC1Arg194Trp基因型患者44例(51.2%)，Arg194Arg38例(44.2%)，Trp194Trp 4例(4.6%)；攜帶XRCC1Arg 399Gln基因型患者28例(32.6%)，Arg399Arg 51例(59.3%)，Gln399Gln 7例(8.1%)。分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡規律，差異無統計學意義(P＞0.05)。表明研究對象具有群體代表性。XRCC1基因表型與患者臨床病理參數關系見表1。

表1 XRCC1基因表型與患者臨床病理參數關系（例）

2.2 XRCC1Arg194Trp基因型與化療敏感性關系 86例患者中對卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感患者52例(60.5%)。由于Trp194Trp較少，將Arg194Trp+ Trp194Trp合并分析。結果顯示攜帶Trp(Arg/Trp+Trp/ Trp)基因型患者化療敏感率為70.8%，攜帶Arg/Arg基因型患者化療敏感率為47.4%，而在攜帶Arg/Arg基因型患者中化療不敏感率高于Trp基因型，差異有統計學意義(χ2=4.885，P=0.027)。Logistic回歸分析發現，Arg/Arg基因型耐藥風險明顯高于Trp基因型，OR：2.84，95%CI：0.772～4.313，差異有統計學意義(P= 0.031)。194Trp基因可能是胃癌患者卡培他濱聯合奧沙利鉑化療的獲益基因，見表2。

表2 XRCC1Arg194Trp與化療敏感性

2.3 XRCC1Arg399Gln基因型與化療敏感性關系 因為Gln399Gln所占比例少，故將Arg399Gln+ Gln399Gln合并分析。結果顯示51例攜帶Arg/Arg基因型患者中，化療敏感率可達到72.5%，攜帶Gln(Arg/ Gln+Gln/Gln)基因型患者化療敏感率為42.9%，攜帶Gln基因型患者化療不敏感率要高于Arg/Arg基因，差異有統計學意義(χ2=7.655，P=0.007)。Logistic回歸分析發現，Gln(Arg/Gln+Gln/Gln)基因型耐藥風險明顯高于Arg/Arg基因型，OR：4.62，95%CI：1.637～7.201，差異有統計學意義(P=0.012)。399Arg/Arg基因可能是卡培他濱聯合奧沙利鉑化療的獲益基因，見表3。

表3 XRCC1Arg399Gln與化療敏感性

2.4 XRCC1多態性與中位疾病進展時間(TTP)的關系 TTP為治療開始到腫瘤進展的時間。XRCC1Arg194Trp攜帶Trp基因型患者中位TTP為9.48個月(95%CI：6.022～10.514)，攜帶Arg/Arg基因型患者中位TTP為7.36個月(95%CI：5.275～8.436)，差異有統計學意義(χ2=4.096，P=0.024)。同時COX比例風險模型分析顯示XRCC1Arg194Trp基因多態性與TTP顯著相關，RR：3.261，95%CI：0.799～5.382，P=0.021。生存曲線見圖1。XRCC1Arg399Gln攜帶Arg/Arg基因型患者中位TTP為10.26個月(95%CI：6.148～11.502)，攜帶Gln基因型患者中位TTP為8.03個月(95%CI：4.657～9.483)，χ2=4.925，P=0.012。同時COX比例風險模型分析顯示XRCC1Arg194Trp基因多態性與TTP顯著相關，RR:4.597，95%CI：0.834～5.971，P= 0.009，生存曲線見圖1。

圖1 XRCC1基因表型與TTP關系

3 討 論

隨著分子生物學技術取得長足進步，我們可以對胃癌病因、發病機制、治療效果及預后影響因素進行分子層面的研究。人體細胞中某些基因結構和功能異常可能與胃癌發生、發展、轉歸有密切關系。DNA修復能力維系基因組的穩定，因此維持高效穩定的DNA修復系統對基因準確表達、細胞功能穩態有非常重要的意義。在人體內，主要包括錯配修復、堿基切除修復、核苷酸切除修復等DNA修復系統[4-5]。XRCC1是最早被分離出來的影響細胞對輻射敏感性的哺乳動物基因，在單鏈斷裂修復和堿基切除修復過程中發揮重要作用。XRCC1位于19q13.2～13.3，可以編碼633個氨基酸組成的蛋白質作為腳手架蛋白與DNA連接酶Ⅲ、聚合酶β、多聚ADP核糖聚合酶形成復合物，參與到DNA的修復。其遺傳突變尤其是單核苷酸多態性與腫瘤發生有密切關系[6]。目前對XRCC1基因多態性的研究主要集中在3個位點：第6外顯因子C26304T (Arg194Trp)、第9外顯因子G27466A(Arg280His)和第10外顯子G28152A(Arg399Gln)，這些編碼區的多態性表現可能會干擾蛋白質合成，改變基因修復能力，影響腫瘤的易感性和腫瘤細胞生物學行為[7]。XRCC1 SNPs被認為與多種腫瘤的含鉑類化療方案療效及預后相關[8]。Miao等[9]研究證實XRCC1Arg194Trp基因多態性表現可能會導致患者化療耐藥發生和增加死亡風險。Han等[10]研究發現XRCC1Arg399Gln基因多態性可能會影響非小細胞肺癌對順鉑化療的敏感性，其含有Arg/Gln和Arg/Arg基因型患者的中位生存時間明顯延長。本研究通過基因分型技術對86例晚期胃癌患者XRCC1第194、399位點基因表型進行分析，發現基因多態性可能會影響卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感性。

卡培他濱(Capecitabine)是一種新型口服氟尿嘧啶前體藥物，在腫瘤組織中經腫瘤相關性血管因子—胸腺磷酸化酶催化轉化為5-氟尿嘧啶(5-FU)；奧沙利鉑(Oxaliplatin，L-OHP)是第3代鉑類抗腫瘤藥，主要是通過與腫瘤細胞DNA結合形成鉑-DNA加合物，導致鏈內或鏈間交聯而引起DNA損傷，以達到殺死腫瘤細胞的目的。卡培他濱聯合奧沙利鉑的化療方案已經被廣泛運用于胃癌治療，并且在臨床取得較好療效，在一些國家和地區已經成為針對胃癌的一線化療用藥[11-12]。但是在治療過程中仍然有部分患者出現耐藥現象，這可能與XRCC1基因SNPs有關。本研究選取XRCC1第194、399位點為研究對象，對基因SNPs與化療敏感性關系進行探討。在XRCC1Arg194Trp基因表型分析中發現，攜帶Trp(Arg/Trp+Trp/Trp)基因型患者對卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感率為70.8%，顯著高于攜帶Arg/Arg純合子基因型患者的47.4%，P=0.027，Trp基因型耐藥風險也更低(OR：2.84，95%CI：0.772～4.313，P=0.031)。194Trp基因表型可能是胃癌患者應對此化療方案的受益基因。在預后的分析中，攜帶Trp基因型患者中位TTP為9.48個月，而攜帶Arg/Arg純合子基因型患者為7.36個月，P=0.024，與化療敏感性結果相符合。本研究結果表明XRCC1Arg194Trp基因SNPs對胃癌患者采取卡培他濱聯合奧沙利鉑化療方案敏感性有影響，Trp基因型患者具有較好療效和預后。

XRCC1Arg399Gln基因多態性被證實與非小細胞肺癌[13]、急性淋巴細胞白血病[14]等惡性腫瘤對以順鉑為基礎的化療方案耐藥相關。Xu等[15]對大樣本量胃癌患者XRCC1基因多態性與順鉑化療效果進行Meta分析，發現Arg399Gln基因多態性是腫瘤無進展生存期和存活率的預見性標志物，但是不同基因型對化療敏感性存在什么樣的影響還爭議較大，結果得不到統一。本研究結果顯示，XRCC1Arg399Gln攜帶Arg/Arg基因型患者化療敏感率可達到72.5%，而攜帶Gln (Arg/Gln+Gln/Gln)基因型患者化療敏感率為42.9%，P=0.007，Arg/Arg基因型耐藥風險更低(OR：4.62，95% CI：1.637～7.201，P=0.012)。399Arg/Arg基因型可能是胃癌患者對卡培他濱聯合奧沙利鉑化療的受益基因。在以TTP為指標的預后分析中，攜帶Arg/Arg純合子基因型患者中位TTP顯著高于Gln基因型患者的中位TTP。與Liu等[16]的報道類似，其研究結果顯示攜帶Arg/Arg或者Arg/Gln基因型的胃癌患者可能會對以奧沙利鉑為基礎的化療方案獲益。

Wang等[17]對105例以鉑類為基礎化療的進展期肺癌患者進行基因SNPs檢測，發現XRCC1 194Trp (Arg/Trp+Trp/Trp)基因型化療敏感性顯著高于Arg/ Arg基因型；XRCC1 399Arg/Arg基因型患者化療效果好于Gln(Arg/Gln+Gln/Gln)基因型，后者的化療失敗風險是前者的3.7倍。本研究在對胃癌患者XRCC1 194、399位點SNPs與卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感性的分析中得到了相同的結果，XRCC1 194Trp、399Arg/Arg基因型可能是該化療方案的獲益基因，有較好的預后。

綜上所述，胃癌患者XRCC1Arg194Trp、Arg399Gln基因多態性可能與卡培他濱聯合奧沙利鉑化療敏感性有關，對患者化療用藥前進行基因分析，根據基因表型預測個體對藥物的敏感性，并以此為依據來選擇和優化個體化療方案，可能會提高臨床治療的針對性和可預見性，使得患者從化療中獲益。

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Effect of single nucleotide polymorphism of XRCC1 gene on the sensitivity of capecitabine combined with oxaliplatin as first line chemotherapy in gastric cancer patients.

SUN Hui1,CHEN Jin-fei2,FANG Yue-yu1,TAN Xin-guang1,CUI Ting-yun1,JI Lian-hua1.1.Department of Oncology,Nanjing Pukou Central Hospital,Nanjing 211800 Jiangsu,CHINA;2.Department of Oncology,Nanjing First People's Hospital,Nanjing 211800,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the effect of single nucleotide polymorphism of XRCC1Arg194Trp and Arg399Gln genes on the sensitivity of capecitabine combined with oxaliplatin as first line chemotherapy in patients with gastric cancer.MethodsEighty-six patients pathologically confirmed as advanced gastric cancer in our hospital from Jan.2013 to Jun.2014 were enrolled in the study,which were all treated with capecitabine combined with oxaliplatin chemotherapy.The clinical effects were evaluated after 3 cycles of treatment.The clinical data and peripheral blood samples were collected,and genotyping of XRCC1Arg194Trp and Arg399Gln were performed by using TaqMan-MGB probe.Then the effects of treatment were compared between different genotypes.ResultsAmong the 86 patients,52 (60.5%)were sensitive to chemotherapy.At XRCC1Arg194Trp locus,the patients carrying Trp(Arg/Trp+Trp/Trp)genotype had the sensitivity to chemotherapy of 70.8%,and the patients carrying Arg/Arg genotype had the sensitivity of 47.4%,P=0.027.The median time to progression(TTP)was 9.48 months for patients with Trp genotype and 7.36 months for those with Arg/Arg genotype,P=0.024.The risk of drug resistance for Arg/Arg genotype was significantly higher than that of Trp genotype(OR:2.84,95%CI:0.772～4.313,P=0.031).At XRCC1Arg399/Arg locus,the patients carrying Arg/Arg genotype had the sensitivity of 72.5%,and the patients carrying Gln(Arg/Gln+Gln/Gln)genotype had the sensitivity to chemotherapy of 42.9%,P=0.007.The median TTP was 10.26 months for patients with Arg/Arg genotype and 8.03 months for those with Gln genotype,P=0.012.The risk of drug resistance for Gln genotype was significantly higher than that of Arg/Arg genotype(OR:4.62,95%CI:1.637～7.201,P=0.012).ConclusionSingle nucleotide polymorphism of XRCC1Arg194Trp,Arg399Gln gene maybe associated with the sensitivity of capecitabine combined with oxaliplatin chemotherapy.

XRCC1 gene;Single nucleotide polymorphism;Capecitabine;Oxaliplatin;Chemotherapy;Sensitivity

R735.2

A

1003—6350（2016）04—0526—05

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.04.004

2015-09-12)

江蘇省南京市醫學科技發展項目(編號：YKK14183)

孫慧。E-mail：sunhui20150909@sina.com