參芪通脈顆粒對慢性充血性心力衰竭模型大鼠血漿BNP、ET水平影響

汶醫寧，史凡凡，羅文平，李 瑞，王永剛（.陜西中醫藥大學附屬醫院心病科，陜西 咸陽 7000；.陜西中醫藥大學第二附屬醫院，陜西 咸陽 7000）

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參芪通脈顆粒對慢性充血性心力衰竭模型大鼠血漿BNP、ET水平影響

汶醫寧1，史凡凡1，羅文平1，李 瑞1，王永剛2
（1.陜西中醫藥大學附屬醫院心病科，陜西 咸陽 712000；2.陜西中醫藥大學第二附屬醫院，陜西 咸陽 712000）

［摘 要］目的：觀察參芪通脈顆粒對慢性充血性心力衰竭模型大鼠血漿腦鈉肽 （BNP）、內皮素（ET）以及心肌細胞結構的影響。方法：用腹腔注射阿霉素（ADR）法復制慢性充血性心力衰竭（CHF）大鼠模型，采用組織切片、HE染色、光鏡觀察心肌組織病理變化；采用酶聯免疫法測定血漿BNP和ET含量。結果：參芪通脈顆粒組心肌細胞水腫、肥厚較模型組明顯減輕，心肌細胞橫（縱）紋存在；與模型組比較，卡托普利組、參芪通脈顆粒小劑量組、參芪通脈顆粒大劑量組血漿BNP和ET水平明顯降低（P＜0．01或P＜0．05）；與卡托普利組比較，參芪通脈顆粒大劑量組血漿BNP和ET水平無顯著性差異（P＞0．05）。結論：參芪通脈顆粒能抑制CHF大鼠的神經內分泌激活，降低CHF大鼠血漿BNP和ET水平，減少心肌纖維化，修復已損傷的心肌細胞，從而改善心功能，保護衰竭的心臟。

［關鍵詞］參芪通脈顆粒；腦鈉肽（BNP）；內皮素（ET）；實驗研究

2　結 果

心肌組織病理學檢查：光鏡下正常組未見明顯的組織學改變，心肌纖維排列整齊，橫紋清晰，細胞之間連接緊密，細胞核無明顯異型性。但心衰模型組可見肥大的心肌細胞群，細胞排列紊亂﹑斷裂﹑溶解以及不同程度的炎癥細胞浸潤和間質水腫病變表現?？ㄍ衅绽M和參芪通脈顆粒組心肌細胞水腫﹑肥厚較模型組明顯減輕，心肌細胞橫（縱）紋存在，其中E組優于C組，C組優于D組，表明參芪通脈顆?？梢孕迯鸵褤p傷的心肌細胞，保護衰竭的心臟。

各組大鼠血漿BNP和ET含量測定見表1。模型組血漿BNP和ET水平明顯高于正常對照組（P＜0.01），造模成功；與模型組比較，卡托普利組﹑參芪通脈顆粒小劑量組﹑參芪通脈顆粒大劑量組血漿BNP和ET水平明顯降低（P＜0.01或P＜0.05）；與卡托普利組比較，參芪通脈顆粒大劑量組血漿BNP和ET水平無顯著性差異（P＞0.05）。

表1　各組大鼠血漿BNP﹑ET含量測定 （pg/mL，±s）

表1　各組大鼠血漿BNP﹑ET含量測定 （pg/mL，±s）

注：與A組比較，*P＜0.01；與B組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別　n　BNP　ET A組　10　 554.30±27.61　36.88±4.14 B組　10　 1554.89±327.45*　52.14±6.74*C組　10　 654.76±45.43△△　38.67±5.62△△D組　10　 862.76±67.54△　44.05±7.57△E組　10　 614.82±50.22△△　35.65±6.91△△

3　討 論

CHF是各種病因所致心臟疾病的終末階段，隨著基礎和臨床研究的深入，CHF已不再被認為是單純的血流動力學障礙，更重要在于心室重構和神經內分泌細胞因子系統的激活，促使CHF持續發展。

BNP是近年來發現的一種新的利鈉多肽，由心室肌合成與分泌，具有強大的利尿﹑利鈉﹑舒張血管﹑抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統和交感神經系統的作用［3］。心功能障礙能夠激活利鈉肽系統，導致BNP釋放，其增高的程度與心衰的嚴重程度呈正相關［4］。BNP與左心室功能密切相關，其含量與心室體積和心室舒張末期的壓力呈正比，是臨床評價心力衰竭﹑反映心功能級別的一項重要臨床生化指標，對心力衰竭的診斷和治療具有重要意義［5］。

ET是一種極強的縮血管介質，不但直接刺激或激活多種激素和細胞因子，而且參與心血管疾病的病理生理過程；臨床和實驗研究顯示它在誘發和加重心力衰竭的進程中起著重要作用［6］。血漿ET水平升高和心肌ET合成與釋放增加對CHF有重要的致病介質作用，并與CHF病變嚴重程度密切相關。人體CHF研究表明，PET水平顯著升高，直接引起病理生理性血管收縮和心臟增生與肥大。

阿霉素大鼠CHF模型與人的心肌病CHF相似，是臨床研究心肌病型心力衰竭較理想的模型，適合研究衰竭心臟心肌超微結構改變﹑神經內分泌異常及血流動力血變化［7］。

參芪通脈顆粒是多年臨床總結的經驗方，由人參﹑黃芪﹑附子﹑丹參等組成，具有益氣溫陽﹑活血利水功效。研究表明以人參﹑附子﹑丹參等為代表的益氣﹑溫陽﹑活血中藥長期應用均具有明顯抑制神經內分泌的作用［8］。藥理研究證明人參皂苷對心血管的作用與強心甙相似，可強心，增強心肌收縮力，增加心輸出量，減少心肌損傷，促進心肌細胞修復，提高心肌耐缺氧能力，同時可降低血黏度改善血流動力學［9-10］。人參皂苷還能增加底物水平磷酸化，促進三磷酸腺苷磷酸肌酸合成［11］。附子中去甲烏頭堿也有顯著強心作用，同時還具有增加冠狀動脈血流和擴張外周血管的作用。黃芪可以使CHF患者的血管緊張素Ⅱ﹑內皮素等下降［12］。

實驗結果表明參芪通脈顆粒能抑制CHF大鼠的神經內分泌激活，降低CHF大鼠血漿BNP和ET水平，減少心肌纖維化，修復已損傷的心肌細胞，從而改善心功能，保護衰竭的心臟。

［參考文獻］

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藥物與試劑：參芪通脈顆粒（1g干浸膏粉相當于13.5g生藥）由陜西省中藥基礎與新藥研究重點實驗室提供。使用時加蒸餾水配制成不同藥物濃度供實驗應用。鹽酸阿霉素（ADR）（西山普德藥業有限公司生產，批號20120603）﹑卡托普利（廣東邦民制藥有限公司生產，批號0901121），均用蒸餾水稀釋成0.2mg/mL，滅菌后備用。腦鈉肽（BNP）試劑盒由北京尚柏生物制劑公司提供，內皮素（ET）試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供。

實驗動物：Wistar大鼠50只，體重250～300g，雌雄各半，由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK（陜）2012-003。動物按性別分籠飼養于有空調的實驗動物室內，室溫（22±4）℃，相對濕度60%～80%。自由飲水和喂標準顆粒飼料。

實驗儀器：全自動生化分析儀（Olympus AU 600型，日本）；全自動血細胞分析儀（Sysmax XT-1800，日本）；全自動血凝分析儀（AMAX-200型，德國）；MSE-25型高速冷凍離心機（上海安亭科學儀器廠）；全自動圖像分析系統（德國Leica公司）；LEICA DmLA顯微鏡（德國Leica公司）。

實驗方法：參照模型制作［2］，將注射用ADR粉針用滅菌注射用水5mL溶解，9mL/L生理鹽水稀釋配成每lmL生理鹽水含藥0.8mg溶液，第1～3周按3mg/kg劑量給模型組和用藥組大鼠進行腹腔注射，第4～6周按2mg/kg劑量進行腹腔注射，每周1次；正常對照組大鼠注射等量的生理鹽水，每周1次。連續注射給藥6周。

動物分組及給藥：動物基礎飼料適應性喂養1周后，隨機分為對照組（A組） ，模型組（B組），卡托普利組（C組），參芪通脈顆粒小劑量組（D組），參芪通脈顆粒大劑量組（E組），每組10只，分籠飼養。C組給予卡托普利6.25mg/kg灌胃；D組和E組分別給予參芪通脈顆粒小劑量0.8g/kg﹑大劑量1.6g/kg灌胃，用藥劑量分別按動物體表面積換算。A組給予等量的蒸餾水灌胃，日1次，自由飲食。連續治療30天。

指標檢測：末次給藥24h后，用頸椎脫臼法處死大鼠，剖胸取出心臟，洗凈后取部分左心室組織，10%甲醛固定，常規石蠟包埋，組織切片，HE染色，光鏡觀察心肌組織病理變化。取血，分離血漿，采用酶聯免疫法測定BNP和ET含量（參照BALP試劑盒說明操作）。

［中圖分類號］R255.214.161

［文獻標識碼］B

［文章編號］1004-2814（2016）05-0496-03

［基金項目］陜西省教育廳科學研究計劃項目（編號2014JK1190）
充血性心力衰竭（CHF）是各種心血管疾病終末階段，病死率高，存活率低［1］。近年來，大量的臨床和實驗研究表明中藥治療心衰不僅可以強心﹑利尿﹑擴血管以緩解癥狀而治標，還可以干預神經內分泌過度激活﹑抑制心室重構以治本。參芪通脈顆粒具有益氣溫陽﹑活血利水，是臨床治療CHF的經驗方。本實驗旨在制造CHF動物模型，從細胞因子水平探討參芪通脈顆粒對實驗性CHF大鼠的作用機制，為臨床CHF的綜合治療提供理論和實驗依據。
1材料與方法

［收稿日期］2016-01-20