TNF—α在強直性脊柱炎患者血清中的表達水平及臨床意義探討

彭琪彥

摘要：目的 通過檢測強直性脊柱炎（AS）患者血清中TNF-α的表達水平，探討其在AS發(fā)病中的臨床意義。方法 分別測定AS活動期患者、AS非活動期患者及健康人血清TNF-α、CRP、ESR水平。結果 AS活動期患者、AS非活動期患者血清TNF-α水平均顯著高于健康人，其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；AS活動期患者血清TNF-α水平顯著高于AS非活動期患者，其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且TNF-α的表達與CRP呈正相關，與ESR無明顯相關性。結論 TNF-α是與AS發(fā)病相關的細胞因子，可作為AS的實驗室診斷指標以及AS活動期臨床療效的監(jiān)測指標。

關鍵詞：強直性脊柱炎；TNF-α ；酶聯(lián)免疫吸附試驗

The Expression of TNF-α in Patients Serum with Ankylosing Spondylitis and Clinical Significance

PENG Qi-yan

（Department of Clinical Laboratory，Wuhan University of Science and Technology Hospital， Wuhan 430070，Hubei，China）

Abstract：Objective To discuss the clinical significance of TNF-α by detecting the expression of TNF-α in patients with ankylosing spondylitis. Methods The levels of serum TNF-α， CRP， ESR were determined respectively in the AS active patients， the AS inactive patients and the healthy people. Results The contents of TNF-α in the AS active patients and the AS inactive patients were obviously higher compared with healthy people with statistical significanc（P<0.01）；TNF-α in the AS active patients were obviously higher than the AS inactive patients with statistical significanc（P<0.05）；the expression of TNF-αand CRP were positively correlated， but no obvious correlated with ESR. Conclusion The TNF-αis a cytokine associated with the occurrence of the AS， and it can be used as the laboratory diagnosis indicators， as well as the monitoring indicator of clinical curative effect in AS activity.

Key words：Ankylosing spondylitis；TNF-α；Enzyme-linked immunosorbent assay

強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis， AS）是一種慢性進行性炎性疾病，主要累及中軸關節(jié)[1]，其主要癥狀表現(xiàn)為反復發(fā)作的腰痛、腰骶部僵硬、脊柱強直或畸形，該病起病隱匿且病程較長，容易誤診[2]。其具體發(fā)病機制目前仍未明確，可能與遺傳、環(huán)境及免疫因素等有關，且臨床上尚缺乏特異性治療，僅依靠日常鍛煉和一些藥物緩解急性發(fā)作[3]。因此，探討AS發(fā)病機制、早期診斷和及時治療成為研究熱點。腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）是體內(nèi)炎癥反應和一系列病理生理過程的重要遞質(zhì)，有學者認為，TNF-α是AS中介導炎癥反應的重要細胞因子[4]，因此，本研究通過檢測AS患者血清TNF-α水平，探討其在AS病程中的臨床意義，旨在為AS的發(fā)病機制和治療提供實驗依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2015年3月～2016年6月在我院就診的門診及住院AS患者共62例，其中AS活動期患者32例，包括男22例，女10例，年齡20～49歲；AS非活動期患者30例，包括男21例，女9例，年齡21～54歲；62例AS患者中，HLA-B27陽性者59例，HLA-B27陰性者3例；另選取同期健康體檢者40例作為正常對照，其中男28例，女12例，年齡20～55歲。三組受試對象性別構成及年齡比較差異無統(tǒng)計學意義，本研究經(jīng)患者知情同意，該試驗方案已經(jīng)我院倫理委員會批準。

1.2納入標準 根據(jù)1984年美國風濕病學會修訂的紐約診斷標準[5]，確診為AS。病情活動判斷標準為強直性脊柱炎疾病活動指數(shù)（Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index， BASDAI），BASDAI≥4為活動期，BASDAI<4為非活動期[6]。

1.3排除標準 排除妊娠或哺乳期女性、自身免疫性疾病、嚴重肝、腎、心血管疾病、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、骶髂關節(jié)結核、致密性骨炎等。

1.4樣本采集與處理 采樣前所有對象均未進行生物治療、關節(jié)內(nèi)治療及糖皮質(zhì)激素治療。三組對象均于清晨空腹抽取靜脈血各4 ml于兩支無添加劑真空采血管以及血沉管中，分別用于TNF-α、C反應蛋白（CRP）、紅細胞沉降率（ESR）檢測，待血液自行凝固，3000 rpm離心10 min，分離血清，于-70℃低溫冰箱保存待測，ESR無需離心，混勻后直接檢測。

1.5儀器與試劑 使用美國R&D公司TNF-α檢測試劑盒（ELISA法），具體操作過程嚴格遵循實際說明書進行。反應終止后，在Rayto RT-6100酶標分析儀上分別于450 nm和570 nm處測OD值，并根據(jù)標準曲線計算出樣本中TNF-α含量。CRP采用免疫比濁法，在日立7180全自動生化分析儀上檢測；ESR在賽科希德S-100血沉儀上采用魏氏法檢測。

1.6統(tǒng)計學處理 收集所有檢測數(shù)據(jù)，計量數(shù)據(jù)以用x±s表示，采用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理，兩兩比較采用t檢驗，相關性采用Pearson直線相關分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1三組研究對象檢驗結果比較分析 與健康組比較，AS活動期與AS非活動期患者的TNF-α、CRP、ESR明顯升高，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.01）；與AS非活動期組比較，AS活動期患者的TNF-α、CRP、ESR明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2血清中TNF-α的表達與CRP、ESR的相關性分析 AS活動期患者、AS非活動期患者血清中TNF-α含量與CRP（r=0.624，0.612，P<0.05）呈正相關，而與ESR（r=0.125，0.128，P>0.05）無相關性。

3討論

強直性脊柱炎是復雜的多基因遺傳病，多種輔助性T淋巴細胞及細胞因子參與其發(fā)病[7]，現(xiàn)已明確的診斷指標是人類白細胞抗原B27（HLA-B27），調(diào)查顯示，HLA-B27陽性者患AS的幾率是HLA-B27陰性者的200-300倍[8]，但在少數(shù)AS患者HLA-B27仍呈陰性，因此對于AS發(fā)病機制的探討，依然是廣大學者的研究熱點。

細胞因子是一類由免疫細胞和非免疫細胞合成和分泌的低分子量可溶性蛋白，具有免疫調(diào)節(jié)功能。有研究表明，不同自身免疫性疾病患者體內(nèi)，細胞因子表達異常，各種細胞因子在疾病中互相聯(lián)系，共同作用，形成十分復雜的細胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)[9]， TNF-α是由單核細胞和巨噬細胞所產(chǎn)生的一種小分子多肽，通過結合其相應受體發(fā)揮生物學作用。適量TNF-α可以調(diào)節(jié)適應性免疫、殺傷靶細胞、誘導細胞凋亡，對機體起保護作用，而過量表達則會對機體造成損傷。研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α也是一種重要的炎癥因子，當機體受到感染、損傷等刺激后，體內(nèi)的TNF-α能激活中性粒細胞，改變血管內(nèi)皮細胞通透性，調(diào)節(jié)其他組織代謝活性[10]。TNF-α也可以作用于纖維母細胞和骨細胞，與關節(jié)僵硬有關[11]，而AS正是以慢性炎癥和異常骨化為病理特點的一類自身免疫性疾病。

本研究通過采用酶聯(lián)免疫吸附試驗，檢測不同病程AS患者血清TNF-α的含量，并與常見的指標CRP、ESR做一個相關性分析，結果發(fā)現(xiàn)，與健康組相比，AS患者的TNF-α、CRP、ESR均有增高，且AS活動期患者高于AS非活動期患者，說明TNF-α參與了AS活動期的炎癥反應；AS患者TNF-α的表達與CRP呈正相關，而與ESR無相關性。而且，62例AS患者中，有3例HLA-B27陰性患者，但其TNF-α有不同程度的增高。由此可以推測TNF-α在AS發(fā)病中扮演著重要作用，而且有動物實驗證實，TNF-α轉基因鼠可產(chǎn)生自發(fā)性關節(jié)炎，而抗TNF-α單克隆抗體可以抑制其發(fā)病[9]。

綜上所述，AS患者血清TNF-α升高，表明TNF-α可能參與了AS發(fā)病過程，且通過TNF-α水平可以對AS病程活動度進行評價，但TNF-α具體作用機制尚待進一步研究，本研究擬通過檢測AS患者血TNF-α的含量，為揭示其在AS發(fā)病機制中的作用提供新思路，也為以細胞因子靶向治療提供實驗依據(jù)。

參考文獻：

[1]Piga M，Chessa E， Ibba V，et al. Biologics-induced autoimmunerenal disorders in chronic inflammatory rheumatic diseases：Systematic literature review and analysis of a monocentric cohort[J].Autoimmun Rev，2014，13（8）：873.

[2]Ravinsky RA， Ouellet JA， Brodt ED， et al.Vertebral Osteotomies in Ankylosing Spondylitis-Comparison of Outcomes Following Closing Wedge Osteotomy versus Opening Wedge Osteotomy： A Systematic Review[J]. Evid Based Spine Care J，2013，4（1）：18.

[3]張靜，何其瑞，金玉林，等.流式細胞術檢測HLA-B27對輔助診斷AS作用的評估[J].中國實用醫(yī)藥，2015，10（11）：17.

[4]黃建武，黃建華，黃影.腫瘤壞死因子-α在強直性脊柱炎活動期患者中的表達[J].中醫(yī)正骨，2013，25（11）：22.

[5]van de Logt F，Day AS. S100A2：a noninvasive marker of inflammation in inflammatory bowel disease[J]. J Dig Dis， 2013，14（2）：62.

[6]Oktayoglu P， Em S. Tahtasiz M， et al. Elevated serum levels of high mobility group box protein 1 （HMGB1） in patients with ankylosing spondylitis and its association with disease activity and quality of life [J].Rheumatol Int，2013，33（5）：1327.

[7]Zhang L， Li YG， Li YH， et al. Increased frequencies of Th22 cells as well as Th17 cells in the peripheral blood of patients with ankylosing spondylitis and rheumatoid arthritis [J].PloS One，2012，7（4）：e31000.

[8]劉歡，楊曉平，楊曉凌.S100A12 在強直性脊柱炎患者血清中的表達和臨床意義[J].中國實驗診斷學，2015，19（3）：466.

[9]張璐，鄒紅云.強直性脊柱炎患者TNF-α表達水平測定分析[J].中國實驗診斷學，2014，18（4）：591.

[10]郭堯.啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài)與炎癥細胞TNF-α分泌關系及調(diào)控因素研究[D].華中科技大學.

[11] Selmi C. Diagnosis and classification of autoimmune uveitis[J].Autoimmun Rev，2014，13 （4-5）：591.

編輯/申磊