靈芝孢子粉抗宮頸人乳頭瘤病毒感染作用研究

周永麗　徐成康　尹秋梅　趙云荷

[摘要]目的 探討靈芝孢子粉在宮頸人乳頭瘤病毒（HPV）感染治療中的價(jià)值。方法 采取HPV DNA第二代雜交捕獲實(shí)驗(yàn)（HC-Ⅱ）與陰道鏡及宮頸活組織病理檢查相結(jié)合方法檢測(cè)出HPV感染患者，將2014年3月～2015年3月的100例HPV感染患者隨機(jī)平均分為4組，第一組為靈芝孢子粉組，服用粵微牌靈芝孢子粉3個(gè)月；第二組為干擾素組，用安達(dá)芬栓（重組人干擾素a2b栓）3個(gè)療程；第三組為靈芝孢子粉+干擾素組，同時(shí)服用靈芝孢子粉和外用安達(dá)芬3個(gè)療程；第四組為空白對(duì)照組，不采取任何治療措施，3個(gè)月后觀察HPV感染自然轉(zhuǎn)歸。隨訪(fǎng)3個(gè)月，3個(gè)月用藥不中斷，3個(gè)月后采用同樣方法檢測(cè)這些患者HPV感染情況，并對(duì)4組患者的治療效果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 所有用藥組在用藥3個(gè)月后HPV的DNA拷貝量下降。靈芝孢子粉加干擾素組下降最明顯，其次是單純用靈芝孢子粉組。用藥組在用藥后3個(gè)月細(xì)胞病理學(xué)有改善傾向，炎癥消退明顯。其中也是靈芝孢子粉加干擾素組下降最明顯，其次是單純用靈芝孢子粉組。結(jié)論 靈芝孢子粉對(duì)宮頸人乳頭瘤病毒感染具有治療作用。

[關(guān)鍵詞]靈芝孢子粉；宮頸人乳頭瘤病毒感染；治療；炎癥

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染是引起宮頸癌及其癌前病變的主要原因，在99%的宮頸癌中可以檢測(cè)到HPV的感染，其中涉及到大約15種致癌型HPV。而流行病學(xué)和基礎(chǔ)研究亦證實(shí)高危型人乳頭瘤病毒（high-risk human papillomavirus，HR-HPv）持續(xù)感染是宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（cervicalintraepithelial neoplasia，CIN）和宮頸癌的主要病因。靈芝孢子粉作為目前較佳免疫調(diào)節(jié)劑，可顯著提高人體免疫功能。鑒于目前在臨床上還沒(méi)有有效的抗病毒藥和疫苗，清除病毒束手無(wú)策，只有靠人體自身清除。本研究組在臨床上觀察到因其他疾病使用靈芝孢子粉的患者HPV轉(zhuǎn)陰率較高，故認(rèn)為靈芝孢子粉對(duì)HPV感染具有治療作用。該研究旨在探討靈芝孢子粉治療宮頸HPV感染的臨床療效及價(jià)值。

1.資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年3月～2015年3月于中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科門(mén)診檢測(cè)出HPV高危型感染的100例患者為研究對(duì)象。年齡23～56歲，平均35.4歲。所有患者均有月經(jīng)周期，大致正常；86例已婚，14例未婚，均有性生活史。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）陰道分泌物檢查正常，TCT顯示鱗狀上皮內(nèi)低度病變以下，宮頸高危型HPV感染，陰道鏡檢查及組織病理診斷明確為CIN I級(jí)以下；（2）既往月經(jīng)周期規(guī)律，無(wú)其他影響臨床治療因素；（3）無(wú)藥物過(guò)敏史，無(wú)肝腎功能異常、心肺功能不全、免疫系統(tǒng)疾病。所有研究對(duì)象均對(duì)本研究?jī)?nèi)容知曉并同意，同時(shí)經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過(guò)。

1.2HPV檢測(cè)方法

HPV DNA第二代雜交捕獲實(shí)驗(yàn)（hvbrid capture-2，HC-Ⅱ）與陰道鏡檢查及宮頸活組織病理檢查相結(jié)合方法，首先對(duì)慢性宮頸炎級(jí)宮頸糜爛患者進(jìn)行HC-Ⅱ篩查，對(duì)結(jié)果示HPV感染陽(yáng)性患者進(jìn)行陰道鏡檢查，對(duì)碘試驗(yàn)陰性區(qū)或可疑病變部位取活檢送病理檢查，病理檢查結(jié)果是宮頸癌前病變（CIN）者則納出本研究，建議手術(shù)治療，結(jié)果僅為HPV病毒感染患者納入研究。檢測(cè)所需試劑盒：digene hybrid capture 2（HC2）high-risk HPV DNAtest（96測(cè)試/盒）。臨床判定標(biāo)準(zhǔn)：≥1.0pg/mL（相當(dāng)于5000拷貝/反應(yīng)）。

1.3藥物選擇

靈芝孢子粉選用由中國(guó)科學(xué)院微生物研究所研制的粵微牌靈芝孢子粉（廣東省粵微食用菌技術(shù)有限公司，G20050249），每天6包沖服，一個(gè)月為一療程，持續(xù)用3個(gè)療程；干擾素選擇安徽安科生物工程（集團(tuán)）股份有限公司生產(chǎn)的安達(dá)芬栓（重組人干擾素a2b栓），每次一枚塞陰道后穹窿，隔日一次，10次為一療程，持續(xù)用3個(gè)療程。

1.4研究分組及方法

采取HPV DNA第二代雜交捕獲實(shí)驗(yàn)（hybrid capture-2，HC-Ⅱ）與陰道鏡及宮頸活組織病理檢查相結(jié)合方法檢測(cè)出HPV感染患者，將100例HPV感染患者隨機(jī)平均分為4組，第一組為靈芝孢子粉組，服用粵微牌靈芝孢子粉3個(gè)月；第二組為干擾素組，用安達(dá)芬栓（重組人干擾素a2b栓）3個(gè)療程；第三組為靈芝孢子粉+干擾素組，同時(shí)服用靈芝孢子粉和外用安達(dá)芬3個(gè)療程；第四組為空白對(duì)照組，不采取任何治療措施，3個(gè)月后觀察HPV感染自然轉(zhuǎn)歸。隨訪(fǎng)3個(gè)月，3個(gè)月中用藥不中斷，3個(gè)月后采用同樣方法檢測(cè)這些患者HPV感染情況，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析4組患者治療效果有無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。治療效果判定標(biāo)準(zhǔn)參照《臨床疾病診斷依據(jù)治愈好轉(zhuǎn)標(biāo)準(zhǔn)》。在HPV DNA載量層面：痊愈，HC2<1pg/mL；顯效，HC2下降>60%；有效，HC2下降>30%；無(wú)效，HC2下降<30%或上升。在宮頸細(xì)胞學(xué)層面：痊愈，未發(fā)現(xiàn)非典型增生；顯效，異型增生細(xì)胞或挖空細(xì)胞減少2/3以上；有效，異型增生細(xì)胞或挖空細(xì)胞減少1/3到2/3；無(wú)效，無(wú)明顯改變。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行，組間比較采用t檢驗(yàn)及LSD和SNK分析。計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用x2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1用藥前各組HC2比較

考察用藥前各組HC2，與空白對(duì)照組相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.2用藥后各組HC2比較

考察用藥后各組HC2，與空白對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見(jiàn)表2。同時(shí)可以看出，在總有效率方面，靈芝孢子粉+干擾素組顯著高于常規(guī)療法干擾素組（x2=1.47，P<0.05）為最高，靈芝孢子粉組次之，其次是干擾素組。

3.討論

人乳頭瘤病毒感染是引起宮頸癌及其癌前病變的主要原因，在約99%的宮頸癌中可以檢測(cè)到HPV的感染，其中涉及到致癌型HPV大約15種。而流行病學(xué)和基礎(chǔ)研究亦充分證實(shí)高危型人乳頭瘤病毒持續(xù)感染是宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸癌的主要病因。以往對(duì)于宮頸癌的預(yù)防主要是靠細(xì)胞學(xué)普查及治療癌前病變，后來(lái)隨著HPV與宮頸癌關(guān)系的確定，HPV篩查在臨床被采用。HPV篩查的目的主要是確定重點(diǎn)預(yù)防對(duì)象，在預(yù)防宮頸癌過(guò)程中，預(yù)防及治療HPV感染極其重要，對(duì)早期HPV感染者進(jìn)行干預(yù)，在提高遠(yuǎn)期防治HPV的致瘤性和腫瘤形成方面具有積極的意義。目前已經(jīng)有預(yù)防HPV感染的疫苗，然而效果如何尚難確定。患者被檢查出HPV感染后非常擔(dān)憂(yōu)，急切希望清除此病毒，然而對(duì)HPV感染的治療尚無(wú)良策，臨床醫(yī)生也只能表現(xiàn)出無(wú)奈。尋找有效控制HPV感染的方法是目前預(yù)防宮頸癌的重要任務(wù)。現(xiàn)在對(duì)HPV感染的治療尚無(wú)特效方法，HPV治療性疫苗還在研究。75%女性在一生中都有可能感染HPV，但是大多數(shù)可以自身清除，一般情況平均感染時(shí)間8個(gè)月。除了部分高危型HPV可導(dǎo)致宮頸持續(xù)感染，多數(shù)HPV病毒可逐漸通過(guò)機(jī)體自身免疫系統(tǒng)被清除，不發(fā)展為浸潤(rùn)癌。研究表明，CIN的發(fā)生與高危型HPV載量有關(guān)，CIN發(fā)生危險(xiǎn)度與病毒承載量成正比，因此早期診斷和治療宮頸高危型HPV持續(xù)感染對(duì)預(yù)防宮頸浸潤(rùn)癌的發(fā)生至關(guān)重要。

以往多采用物理方法，如冷凍、激光、微波、電灼、聚焦超聲及LEEP刀等。也有采用干擾素及中藥局部使用。應(yīng)用較多的是局部使用保婦康栓，保婦康是純中藥制劑，主要成份有莪術(shù)油、冰片等，具有活血、清熱、化瘀、止痛的作用。干擾素作為一種廣譜抗病毒藥物能抑制病毒RNA的復(fù)制，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，同時(shí)還能誘導(dǎo)內(nèi)源性干擾素的產(chǎn)生，提高機(jī)體免疫能力。還有學(xué)者局部使用苦參軟膏、雄黃及聚甲酚磺醛也有一定效果。全身使用的藥主要是中藥，也有一定效果。但以上這些治療遠(yuǎn)未達(dá)到滿(mǎn)意效果，治療后復(fù)發(fā)率高。如何控制宮頸高危型HPV持續(xù)感染成為當(dāng)前需要迫切解決的難題。尋找其它更有效及長(zhǎng)效的方法是本課題組的研究方向。

受皰疹治療的啟發(fā)，本研究組發(fā)現(xiàn)靈芝孢子粉除了可以治療腫瘤外，對(duì)病毒感染性疾病也有很好效果，實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)應(yīng)用靈芝孢子粉的患者感冒發(fā)生率很低。由此可以認(rèn)為靈芝孢子粉應(yīng)該可以治療HPV的感染，試用后發(fā)現(xiàn)結(jié)果與預(yù)想的一致。

靈芝孢子粉是靈芝散發(fā)出來(lái)的孢子體，藥理研究已發(fā)現(xiàn)，靈芝孢子粉對(duì)脾細(xì)胞分泌IL-2具有促進(jìn)作用，并能明顯促進(jìn)脾細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與增殖，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用。提示靈芝孢子粉可以通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體免疫力來(lái)抵御或清除病毒感染。

在研究靈芝孢子粉治療皰疹的機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)靈芝孢子中含有至少兩類(lèi)抗病毒物質(zhì)，一類(lèi)是水溶性物質(zhì)，另一類(lèi)是甲醇溶性物質(zhì)。已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)水溶性物質(zhì)具有特別的抑制單純皰疹病毒HSV-1和HSV-2的活性，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，從靈芝孢子中得到的4種抗皰疹病毒物質(zhì)是蛋白結(jié)合多糖，其中酸I生蛋白結(jié)合多糖（APBP）顯示了最強(qiáng)的抗皰疹病毒的活性。

在本研究中發(fā)現(xiàn)口服靈芝孢子粉加局部使用干擾素效果最明顯，也許是兩種藥物通過(guò)不同的機(jī)理起到協(xié)同治療作用。在本研究還發(fā)現(xiàn)單純的靈芝孢子粉口服治療效果優(yōu)于單純的外用干擾素。因此在治療HPV感染中，口服靈芝孢子粉可作為治療措施之一，最好與干擾素聯(lián)合使用。由于本研究時(shí)間為3個(gè)月，遠(yuǎn)期效應(yīng)還有待進(jìn)一步研究。