血清層粘連蛋白、透明質酸診斷肝纖維化的價值

張新弟++++++李衛娟++++++高婭妮++++++單東風++++++李紹臣

[摘要] 目的 探討血清層粘連蛋白與透明質酸診斷肝纖維化的價值。 方法 選取2015年2月～2017年2月在廊坊市人民醫院確診為慢性乙型肝炎患者120例，其中輕度慢性肝炎患者35例，中度慢性肝炎30例，重度患者25例，肝硬化患者30例，選取同期30例健康體檢者作為正常對照。收集患者和血清，層粘連蛋白采用磁微粒化學發光法檢測，透明質酸用化學發光法檢測，并對患者進行肝臟穿刺病理學檢查，確定其纖維化程度，分析血清層粘連蛋白與透明質酸的水平與肝纖維化程度之間的關系。 結果 輕度肝炎患者的血清層粘連蛋白與正常對照差異無統計學意義（P > 0.05）。中度患者、重度患者、肝硬化患者層粘連蛋白逐漸升高，在肝硬化患者中高達（190.77±38.65）ng/L，且均顯著高于正常對照，差異有統計學意義（P < 0.05）。血清透明質酸水平在所有慢性肝炎患者中的表達均顯著高于正常對照，差異有統計學意義（P < 0.05），輕、中、重度患者、肝硬化患者血清透明質酸水平呈上升趨勢，差異有統計學意義（P < 0.05）。肝硬化S1、S1、S3、S4期患者的層粘連蛋白和透明質酸均呈上升趨勢，與S0期比較，差異有統計學意義（P < 0.05），S1、S1、S3、S3期比較，差異有統計學意義（P < 0.05）。 結論 血清層粘連蛋白及透明質酸可以反映肝組織纖維化程度，具有診斷價值。

[關鍵詞] 層粘連蛋白；透明質酸；肝纖維化；診斷；靈敏性

[中圖分類號] R575.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）08（b）-0111-04

[Abstract] Objective To investigate the diagnosis value of serum laminin and hyaluronic acid in hepatic fibrosis. Methods From February 2015 to February 2017， in People's Hospital of Langfang City， 120 patients diagnosed with chronic hepatitis B were selected， amond them， mild hepatitis patients were 35 cases， moderate hepatitis patients were 30 cases， serious hepatitis patients were 25 cases， liver cirrhosis were 30 cases， and 30 healthy physical examinees were selected as normal control at the same time. The serum of patients and physical examinees were collected， laminin was tested by magnetism particulate， hyaluronic acid was tested by chemiluminiscence， liver tissue of patients were punctured for pathology examination， degree of fibrosis was determined， the relationship between the serum laminin and hyaluronic acid levels with the degree of liver fibrosis was analyzed. Results Laminin of mild hepatitis was compared with normal control， the difference was not statistically significant （P > 0.05）. Laminin of moderate， serious hepatitis and liver cirrhosis patients showed gradually rising， that of liver cirrhosis patients was the highest， it was （190.77±38.65） ng/L， and these were higher than that of normal control， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Serum hyaluronic acid levels of chronic hepatitis patients were higher than that of normal contol， the difference was statistically significant （P < 0.05）， serum hyaluronic acid levels of mild， moderate， serious hepatitis and liver cirrhosis patients showed gradually rising， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The serum hyaluronic acid levels of liver cirrhosis S1， S1， S3， S4 stage showed gradually rising， and these were compared with S0 stage， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion Serum laminin and hyaluronic acid can reflect the degree of liver fibrosis， with diagnostic value.endprint

[Key words] Laminin； Hyaluronic acid； Liver fibrosis； Diagnosis； Sensitivity

肝纖維化是多種慢性肝病的終末發展階段，在消化內科中較為常見臨床較為常見，對患者身體能產生較大影響，也是多種慢性肝病的終末發展階段，嚴重常見病因有酒精肝、慢性乙型肝炎、脂肪肝等[1]。由于脂肪肝和酒精肝的發病率在我國呈上升趨勢，同時我國慢性乙型肝炎患者基數較大，故肝纖維化在的發病率也一直居高不下。肝纖維化若未及時處理及治療，則最終可發展為肝硬化，故對肝纖維化的早期診斷和早期治療具有重大的臨床意義。目前臨床上常用Ⅲ型膠原、透明質酸、層粘連蛋白、Ⅳ型膠原等作為檢測肝纖維化程度的指標[2]。層粘連蛋白是細胞基底膜中特殊的非膠原性結構蛋白，和肝纖維化程度及門靜脈的壓力有較大聯系[3]。透明質酸是細胞外基質的主要成分，可較為精確地反映肝組織內已有的纖維組織含量及肝細胞受損程度程度[4]。本研究對慢性乙型肝炎患者進行血液內層粘連蛋白及透明質酸量的檢測，同時檢測患者肝組織纖維化程度，進行兩者的比較分析，探索其中聯系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年2月～2017年2月在廊坊市人民醫院（以下簡稱“我院”）確診為慢性乙型肝炎患者120例，其中男67例，女53例，年齡16～72歲，平均（38.23±12.68）歲。所有病例均符合最新全國傳染并及寄生蟲學術會議修訂方案的慢性乙型肝炎的診斷標準[5]。根據入院時病理學檢測結果，120例患者中為輕度慢性肝炎患者35例，中度慢性肝炎30例，重度患者25例，肝硬化患者組30例。同時選取30例無任肝病及相關疾病的患者為正常對照。所有患者均排除與纖維化相關的疾病。

1.2 方法

1.2.1 血清學檢測

利用磁微粒化學發光法檢測患者血清中層粘連蛋白及用化學發光法檢測透明質酸的含量，相關試劑盒由博奧賽斯公司提供，所有操作步驟嚴格遵守試劑盒的說明書內容進行。

1.2.2 病理學檢查及肝纖維化分期

所有患者抽取靜脈血后，告知患者肝組織穿刺相關的流程及事后注意事項。患者平躺于手術臺，先進行穿刺部位的消毒鋪巾，在B超指引下快速對肝組織進行穿刺，應避開重要血管和神經。所取標本取出后立即置于多聚甲醛固定，統一送至我院病理科進行病理學的檢測。

肝纖維化分期[6]，S0期：無纖維化；S1期：匯管區和匯管區周圍有纖維化及局限性的小纖維瘢痕，范圍較小，不足以影響肝小葉結構及功能；S2期：肝小葉內可見多條纖維間隔形成，但小葉大致結構仍保留；S3期：小葉內有大量纖維間隔，小葉結構紊亂，部分患者可出現門脈高壓，食管靜脈曲張，但尚無肝硬化；S4期：早期肝硬化，但和經典的肝硬化仍有區別，后者纖維間隔包繞于假小葉，環繞假小葉成平行排列。

1.3 觀察指標

統計慢性乙型肝炎患者及正常對照血清層粘連蛋白及透明質酸濃度，同時記錄患者肝組織的纖維化程度（S0、S1、S2、S3、S4）。

1.4 統計學方法

采用統計軟件SPSS 18.0對數據進行分析，正態分布計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組患者血清層粘連蛋白及透明質酸水平的比較

結果顯示，輕度肝炎患者的血清層粘連蛋白與正常對照差異無統計學意義（P > 0.05）。中度患者、重度患者、肝硬化患者層粘連蛋白逐漸升高，且均顯著高于正常對照，差異有統計學意義（P < 0.05）。血清透明質酸水平在所有慢性肝炎患者中的表達均顯著高于正常對照，差異有統計學意義（P < 0.05），輕、中、重度患者、肝硬化患者濃度且血清透明質酸水平呈上升趨勢，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 肝纖維化分期與層粘連蛋白及透明質酸之間的關系

由表2結果顯示，層粘連蛋白及透明質酸在血清中的含量隨著肝組織纖維化程度加深而上升，經病理學檢查，120例慢性肝炎患者中肝纖維化分期S0期的患者35例，其層粘連蛋白及透明質酸均在正常水平。S1期患者33例，S2期30例，S3期26例，S4期26例，S1～S4期的患者層粘連蛋白和透明質酸均呈上升趨勢，與S0期比較，差異有統計學意義（P < 0.05），同時組間相比，差異有統計學意義（P < 0.05）。

3 討論

肝纖維化臨床較為常見，分析其發病機制可見，肝星狀細胞的激活可作為肝纖維化的發生發展的中心環節，已經被激活的肝星狀細胞，能夠開始分泌并釋放出部分細胞因子，較為常見的因子類型包括血小板源性生長因子、腫瘤壞死因子、結締組織生長因子等，此類因子能夠使得細胞外基質在肝內過度沉積，從而導致肝纖維化的出現。對患者身體危害較大，也是多種慢性肝病的終末發展階段，嚴重常見病因有酒精肝、慢性乙型肝炎、脂肪肝等。由于脂肪肝和酒精肝的發病率在我國呈上升趨勢，同時我國慢性乙型肝炎患者基數較大，故肝纖維化在的發病率也一直居高不下。肝纖維化若未及時處理及治療，則最終可發展為肝硬化，故對肝纖維化的早期診斷和早期治療具有重大的臨床意義[7]。目前臨床上常用Ⅲ型膠原、透明質酸、層粘連蛋白、Ⅳ型膠原等作為檢測肝纖維化程度的指標。原因是在發生肝纖維化的過程中，細胞外基質的代謝產物通常可釋放進入到血中，此時部分的代謝產物能夠作為肝纖維化的血清標志物，而透明質酸、層粘連蛋白以及Ⅳ型膠原幾乎覆蓋了細胞外基質中的各類成分。

目前臨床上檢測肝纖維化程度的最佳辦法即肝組織穿刺后送做病理學檢重，但是由于其具有創傷性大，手術花費及檢測費用較高，故未能被大多數的患者所接受。同時在肝組織穿刺檢測時，操作者的不熟練及個人操作和觀察的個性化等因素，檢測結果往往具有較大的個體差異性，增加了實驗和臨床檢測的誤差[8-9]。細胞外基質的某些成分的表達會隨著肝臟組織纖維化程度的加深而增加，達到細胞的限定值后，會由細胞釋放進入血液中，故在臨床上可通過對血清中特殊物質進行檢查來推測肝組織纖維化程度[10-11]。血清層粘連蛋白作為一種用于判斷早期肝纖維化的敏感指標，是和肝纖維化程度及門靜脈的壓力有較大聯系的一種細胞基底膜中特殊非膠原性結構蛋白，參與了肝纖維化以及肝竇毛細血管化的形成，在肝纖維化的患者中血清層粘連蛋白還可與Ⅳ型膠原蛋白聯合形成肝基底膜的形成纖維的間隔，在肝竇毛細血管化中起重要作用[12-13]。而透明質酸是由蛋白和糖胺聚糖共同構成的糖蛋白，可由間質細胞合成，并能夠在肝內皮細胞中得到有效的降解，在細胞外基質中廣泛存在，在肝內皮細胞中吸收降解[14-15]。當肝臟組織嚴重纖維化時，內皮細胞則不能進行正常的生理活動，對透明質酸的降解能力也隨之下降，故在外周血中可觀察到其濃度的增加，肝臟損傷程度也會明顯升高，此時則會發生一系列的肝纖維化、肝臟炎性改變等變化，所以外周血中透明質酸的檢測可作為評估和診斷肝纖維化的指標之一[16-17]。endprint

在本研究中隨著肝炎程度的加重，患者血清層粘連蛋白及透明質酸的水平逐漸升高，但輕度肝炎患者層粘連蛋白無顯著改變。層粘連蛋白是細胞基底膜中的結構性蛋白，故在肝組織的早期纖維化中，基底膜細胞還未受到損害，處于正常生理結構，故其血清水平無明顯改變。所有慢性肝炎患者的血清透明質酸水平都顯著高于正常對照的患者，差異有統計學意義（P < 0.05），且呈上升趨勢。層粘連蛋白及透明質酸在血清中的含量都隨著肝組織纖維化程度加深而上升，且組間比較其差異有統計學意義（P < 0.05）。結果提示，當肝臟的功能發生障礙時，血管內皮細胞同時也對于血清透明質酸的分解能力發生較大的障礙，這就使得血清中透明質酸呈現出明顯的病理性堆積的情況[18-20]，因此，可以推測認為血清透明質酸與肝纖維化發生發展的密切程度越高，通過對該物質的濃度進行檢測與觀察，則能夠用來監測并判斷肝纖維化的嚴重程度[21]。

綜上所述，血清層粘連蛋白及透明質酸均能較為靈敏地反映患者肝臟組織纖維化程度及分期，具有一定的診斷價值，且透明質酸的濃度在肝纖維化早期便可表現出變化，診斷價值高，可提供早期預防和治療的根據。但在本研究中，所涉及的診斷指標及樣本量也較少，在后期研究中，應增加樣本量，減少實驗偏倚。

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