FCM-DNA分析和SOD檢測在惡性和結核性胸腔積液鑒別診斷中的作用

覃海媚，王榮，王春芳，韋葉生，王茂水，王新鋒，王俊玲，王俊利

（1. 右江民族醫學院附屬醫院生殖遺傳學實驗室，廣西 百色 533000；2. 右江民族醫學院附屬醫院檢驗科，廣西 百色 533000；3. 山東省胸科醫院檢驗科，濟南 250013）

FCM-DNA分析和SOD檢測在惡性和結核性胸腔積液鑒別診斷中的作用

Differential Diagnosis Using FCM-DNA Analysis and SOD in Malignant and Tuberculous Pleural Effusion

覃海媚1，王榮2，王春芳2，韋葉生2，王茂水3，王新鋒3，王俊玲3，王俊利1

（1. 右江民族醫學院附屬醫院生殖遺傳學實驗室，廣西 百色 533000；2. 右江民族醫學院附屬醫院檢驗科，廣西 百色 533000；3. 山東省胸科醫院檢驗科，濟南 250013）

對150例胸腔積液標本利用流式細胞術DNA（FCM-DNA）分析及酶聯免疫吸附法檢測超氧化物歧化酶（SOD）。結果顯示，細胞學、FCM-DNA分析及SOD檢測惡性和結核性胸腔積液的準確度分別為80.7%、88.7%、62.0%，細胞學聯合FCM-DNA分析或SOD檢測的準確度分別為97.3%和92.0%。 FCM-DNA分析和SOD檢測均可作為細胞學的重要輔助手段，細胞學聯合SOD檢查可降低費用。

FCM-DNA分析； 超氧化物歧化酶； 胸腔積液，鑒別

惡性腫瘤和結核病是引起胸腔積液的主要原因，惡性和結核性胸腔積液鑒別診斷是臨床上一個棘手的問題。一直以來，細胞學檢查是鑒別惡性和結核性胸腔積液的重要手段之一，但其靈敏度很低。研究［1-2］發現，流式細胞術DNA（flow cytometry，FCM-DNA）分析鑒別診斷胸腔積液性質的靈敏度和特異度均較高，可作為診斷胸腔積液性質的重要參考。但FCM-DNA分析費用較昂貴，不利于臨床普及。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一種抗氧化酶，催化超氧離子轉化成過氧化物和氧氣，SOD檢測主要應用于缺血、出血性心腦等重要臟器損傷。已有研究［3］表明SOD是鑒別惡性和結核性胸腔積液的重要診斷指標。本研究評價細胞學、FCMDNA分析及SOD檢測3種方法在惡性和結核性胸腔積液中鑒別診斷價值，旨在選出準確度高且經濟實用的聯合診斷指標。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2015年9月至2016年10月右江民族醫學院細胞室檢查的150例胸腔積液標本，其中女70例，男80例，年齡18～80歲，中位年齡56.5歲。150例標本均經過病理學、實驗室檢查、影像學或結合臨床確診，其中惡性胸腔積液70例：肺癌40例，肝癌10例，胃癌6例，胰腺癌5例，賁門癌3例，乳腺癌3例，卵巢癌2例，惡性胸膜間皮瘤1例；結核性胸腔積液80例。

1.2 實驗方法

收集入院24 h內未經治療患者的新鮮胸腔積液（約200 mL），50 mL胸腔積液離心后制成細胞片進行常規巴氏染色用于細胞學檢查，50 mL胸腔積液備用于FCM-DNA分析，100 mL胸腔積液用于SOD檢測。

1.2.1 細胞學檢查：由3位細胞學診斷專家盲法閱片后判定結果。如存在疑惑，再由3位細胞病理學專家會診判定。診斷結果分為2種：（1）見到癌細胞為惡性胸腔積液；（2）未見癌細胞為惡性胸腔積液。

1.2.2 FCM-DNA分析標本制備及檢測：（1）單細胞懸液制備。取50 mL胸腔積液標本1 500 r/min離心5 min，用0.9%的NaCl 洗滌制備好的脫落細胞2次，再用70%乙醇固定4 h。（2）經Flow-Check 校準儀器的光路（HalfCV＜ 2%），再用淋巴細胞質控品（CYTO-TROL）校正儀器，確保質控的結果控制在參考范圍內。（3）標本上機前用PBS緩沖液洗滌3次，使細胞濃度約為1×106/mL，再300目篩網過濾，除去細胞懸液中成團的細胞群，經1 000 r/min 離心5 min，棄去上清液。最后加入碘化丙啶（PI）染液（1 mL/管） 4 ℃下避光30 min。（4）采用流式細胞儀（美國BD公司，FACSCantoⅡ）進行細胞周期分析。用健康人群的外周血淋巴細胞作為DNA中正常二倍體的標準對照，采用Multicycle軟件（Pheonix公司）分析細胞周期時相。以DNA指數（DNA index，DI）表示細胞核DNA含量，即DI=樣品細胞的G0/G1峰均道值/正常淋巴細胞的G0/G1峰均道值。

根據文獻［4］制定FCM診斷瘤細胞標準：（1） 除外正常二倍體 G0/G1峰出現的另一個G0/G1峰作為標準，DI值＞1.10 或＜0.90，且出現相應的G2/M峰。（2） 若在直方圖中僅出現單一的G0/G1峰，則要求在細胞周期中的G2/M＞2.5%；G0/G1峰的變異系數（coefficient of variation，CV）比值超過正常CV比值的平均值2倍的標準差。（3） G0/G1峰出現明顯不對稱。（4） S期＞10%。符合以上任一項即為異倍體。

1.2.3 SOD檢測：將100 mL胸腔積液置于低速離心機1 200 r/min，離心15 min，收集500 μ L上清液于EP管中，立即入-80 ℃中凍存備用，在酶聯免疫吸附試驗設備（美國伯樂化學發光系統）檢測SOD的水平。根據前期研究［5］測定SOD在胸腔積液中的診斷點，以SOD含量＞41 U/L為陽性計數。

1.3 統計學分析

采用 SPSS 17.0軟件進行統計學分析。2組率的比較采用χ2檢驗，P ＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 細胞學和SOD檢測結果

細胞學檢查在惡性和結核性胸腔積液中的準確度為80.7%。經SOD檢測，70例惡性胸腔積液中發現43例陽性，80例結核性胸腔積液中50例為陰性，檢測準確率為62.0%。見表1。

2.2 FCM-DNA分析結果

表1 惡性和結核性胸腔積液細胞學、FCM-DNA及SOD檢測結果

70例惡性胸腔積液細胞發現58例為異倍體，主要為超二倍體。80例結核性胸腔積液細胞發現75例為正常二倍體，其余5例為超二倍體。DNA倍體分析檢測惡性和結核性胸腔積液的準確度為88.7%，見表1、圖1。

2.3 FCM-DNA分析、SOD 檢測聯合細胞學的結果

FCM-DNA分析、SOD檢測與細胞學聯合分析，以2個方法中出現1個實驗呈現陽性即診斷為陽性（+）；以2個方法中出現1個陰性即診斷為陰性（-）。細胞學聯合FCM-DNA分析的準確率為97.3%；細胞學聯合SOD檢測的準確率為92.0%；2者比較差異沒有統計學意義（P ＞ 0.05）。見表2。

3 討論

圖1 胸腔積液脫落細胞 FCM-DNA分析

表2 FCM-DNA分析、SOD 檢測聯合細胞學檢查結果

近年來，邢應如等［6］研究表明，FCM-DNA分析對惡性胸腔積液的診斷具有良好的臨床價值；王應霞等［7］通過研究液基細胞學檢測聯合DNA倍體分析在良惡性胸腹水鑒別診斷中的應用價值，發現2者聯合診斷后可明顯提高惡性胸腹水的陽性診斷率。本實驗通過評價細胞學、FCM-DNA和SOD 3種指標在鑒別診斷惡性和結核性胸腔積液中的應用價值，發現FCM-DNA分析的準確度高，達到88.7%；細胞學聯合FCM-DNA分析的準確度為97.3%，與上述學者的研究結果相符。在結核分枝桿菌的培養物濾液蛋白中，SOD是最大的分泌蛋白之一，秦立龍［8］研究SOD聯合腺苷脫氨酶檢測在結核性胸腔積液中的診斷價值，發現SOD 聯合檢測對早期結核病有較高的診斷應用價值。本研究發現單純SOD檢測的準確度為62.0%，與細胞學檢查聯合的準確度為92.0%，與細胞學聯合FCM-DNA分析的準確度相當，差異沒有統計學意義（P ＞ 0.05）。

綜上所述，細胞學聯合FCM-DNA分析對惡性和結核性胸腔積液鑒別診斷的準確性最好，但費用昂貴，給患者增加負擔。因此，細胞學聯合SOD檢測作為惡性和結核性胸腔積液鑒別診斷方法，準確率高、簡便、費用低、更適用于臨床。當然，后期仍需要進一步證實SOD在胸腔積液的診斷點，從而驗證細胞學聯合SOD檢測指標的準確度。性腫瘤價值的Meta分析［J］. 中國醫科大學學報，2015，44（02）：136-142.

［1］ 胡艷芬，陳龍，荊超，等. 流式細胞術檢測DNA倍體數對鑒別良惡

［2］ 王俊利. DNA倍體分析聯合多項腫瘤標記物測定對良惡性胸腹水的鑒別診斷價值［D］. 廣西醫科大學，2008.

［3］ WANG M，ZHANG Z，WANG X. Superoxide dismutase 2 as a marker to differentiate tuberculous pleural effusions from malignant pleural effusions［J］. Clinics，2014，69（12）：799-803. DOI：10.6061/clinics/2014（12）02.

［4］ 王俊利，農樂根，楊鳳蓮，等. DNA定量分析法聯合癌胚抗原測定在良惡性胸水鑒別診斷中的應用［J］. 廣西醫學，2012，34（1）：29-32.

［5］ WANG XF，WU YH，JIAO J，et al. Diagnostic value of superoxide dismutase in tuberculous and malignant pleural effusions ［J］. Asian Pacific J Cancer Prev，2013，14（2）：821-824.

［6］ 邢應如，胡萬發，楊路寶，等. DNA倍體聯合腫瘤標志物檢測在胸腔積液診斷中的應用［J］. 中國腫瘤外科雜志，2013，5（3）：151-155. DOI：10.3969 /j.issn.1674-4136.2013.03.004.

［7］ 王應霞，張旋，吳瑩瑩，等. 液基細胞學檢測聯合DNA倍體分析在良惡性胸腹水鑒別診斷中的應用［J］. 臨床與實驗病理學雜志，2016，32（10）：1152-1155. DOI：10.13315 /j.cnki.cjcep.2016.10.018.

［8］ 秦立龍. SOD聯合檢測在胸部結核病中的診斷價值［D］. 皖南醫學院，2015.

（編輯 武玉欣）

R52；R730.4

B

0258-4646（2017）10-0946-03

http://kns.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20170927.1457.042.html

10.12007/j.issn.0258‐4646.2017.10.021

百色市科學研究與技術開發計劃（20121603）

覃海媚（1991-），女，碩士研究生.

王俊利，E-mail：13907768146@163.com

2017-01-20

網絡出版時間：2017-09-27 14:57