醋酸纖維薄膜電泳法分離蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)材料比較

武 洋，李顏敏

（1.甘肅醫(yī)學(xué)院，甘肅 平?jīng)?744000；2.南方醫(yī)科大學(xué)，廣東 廣州 510515）

醋酸纖維薄膜電泳法分離蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)材料比較

武 洋1，李顏敏2

（1.甘肅醫(yī)學(xué)院，甘肅 平?jīng)?744000；2.南方醫(yī)科大學(xué)，廣東 廣州 510515）

在醫(yī)學(xué)院校，醋酸纖維薄膜電泳實(shí)驗(yàn)以其分離速度快、區(qū)帶清晰、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，深受教師的歡迎，很多學(xué)校都有此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。但人血清存在致病風(fēng)險(xiǎn)，近年來，醫(yī)學(xué)院校因?qū)W生操作失誤等原因，造成學(xué)生感染疾病的事件屢見不鮮，本實(shí)驗(yàn)選擇兔血清和雞蛋卵蛋白兩種實(shí)驗(yàn)材料，與人血清做出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。最終認(rèn)為兔血清作為實(shí)驗(yàn)材料更接近人血清做出的結(jié)果，并具有一定的安全性，因此，兔血清是本實(shí)驗(yàn)較為理想的實(shí)驗(yàn)材料。但如果是藥學(xué)等專業(yè)，只學(xué)習(xí)電泳技術(shù)，雞蛋卵蛋白比較好制備，也是一個(gè)較好的實(shí)驗(yàn)材料。

醋酸纖維薄膜電泳法；蛋白質(zhì)；實(shí)驗(yàn)材料

醋酸纖維薄膜電泳可將人血清蛋白分為：清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白5條區(qū)帶，固定染色之后，可看到清晰的色帶，還可用光密度計(jì)掃描進(jìn)行定量測定，計(jì)算出各種蛋白的構(gòu)成百分比。

由于試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)血清做出的效果不好，不能清晰地看到5條區(qū)帶，因此，該實(shí)驗(yàn)必須采用人血清。眾所周知，人血清存在致病風(fēng)險(xiǎn)，近年來，醫(yī)學(xué)院校因?qū)W生操作失誤等原因，造成學(xué)生感染疾病的事件屢見不鮮，因此，選擇一種能與人血清做出實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近又較為安全的材料，是醫(yī)學(xué)院校教師較為關(guān)注的一個(gè)問題。

本實(shí)驗(yàn)選擇了兔血清和雞蛋卵蛋白兩種實(shí)驗(yàn)材料，與人血清做出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，現(xiàn)介紹如下。

1 實(shí)驗(yàn)流程

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

DYY－6C型電泳儀、DYCP－388型電泳槽（北京市六一儀器廠）、乙酸纖維素薄膜（2×8 cm，厚度約100 μm，臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠），鉛筆，尺子，燒杯，濾紙，鑷子。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

巴比妥－巴比妥鈉緩沖液（pH8.6，離子強(qiáng)度 0.06）；偶氮胭脂紅染液（偶氮胭脂紅B0.75 g，加甲醇50 ml、醋酸 10 ml、加蒸餾水40 ml混勻）；漂洗液（乙醇45 ml、冰乙酸5 ml、蒸餾水50 ml，混勻）；透明液（石蠟）。

1.3 實(shí)驗(yàn)材料

人血清、兔血清、雞蛋清（1倍蒸餾水稀釋）。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

本實(shí)驗(yàn)參照了韓昌洪[1]、薛莉珠[2]和北京大學(xué)生物系生物化學(xué)教研室[3]的實(shí)驗(yàn)方法。

將浸泡了20分鐘的乙酸纖維素薄膜在粗糙面一端1.5 cm處畫上點(diǎn)樣線，將3種樣品分別點(diǎn)在3個(gè)薄膜的點(diǎn)樣線上，倒置于紗布做成的鹽橋上，點(diǎn)樣端至于負(fù)極，并與鹽橋有一定距離，待平衡好后，接通電源，電壓選擇150 V，時(shí)間為50分鐘。

電泳結(jié)束后，關(guān)閉電源，取出薄膜，在染色液中浸泡5分鐘，取出用漂洗液洗至背景無色，再用蒸餾水浸泡。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3種樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。

圖1 3種材料電泳圖譜

從圖1中可以看出，應(yīng)用醋酸纖維膜電泳法可將人和兔血清蛋白質(zhì)分為5條區(qū)帶，從正極到負(fù)極依次為清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和 γ-球蛋白[4-5]。經(jīng)過漂洗、透明后以雞蛋清作為材料的薄膜上呈現(xiàn)清晰的5～6條區(qū)帶，由正極起依次為清蛋白、T1-球蛋白、T2-球蛋白、U1-球蛋白、U2-球蛋白、V-球蛋白[6]。

3 結(jié)語

通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，兔血清作為實(shí)驗(yàn)材料更接近人血清做出的結(jié)果，而且兔子是醫(yī)學(xué)院校常用動(dòng)物，比較常見，具有一定的安全性，因此，兔血清是本實(shí)驗(yàn)較為理想的實(shí)驗(yàn)材料。但如果是藥學(xué)等專業(yè)，只學(xué)習(xí)電泳技術(shù)，雞蛋卵蛋白比較好制備。

[1]韓昌洪．生物化學(xué)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2005．

[2]薛莉珠．生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1998．

[3]北京大學(xué)生物系生物化學(xué)教研室．生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]．北京：高等教育出版社，1986．

[4]丁正梁，舒家模，王楠田，等．各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血清蛋白電泳值[J]．上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，1984，4（1）：43-47．

[5]陳書明，曹新鵬，胡軍，等.6種血清的醋酸纖維素薄膜電泳分析[J]．山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（6）：18-20．

[6]董彩霞，黃建華，祝勇，等.醋酸纖維素薄膜電泳分離禽卵蛋白質(zhì)[J]．光譜實(shí)驗(yàn)室，2007，24（5）：800-802．

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1671-1246（2017）24-0084-02