CD44、ALDH1在胃癌中的表達及與臨床特征的相關性分析

張彩蘭，楊艷梅

（定西市第二人民醫院，甘肅 定西 743000）

CD44、ALDH1在胃癌中的表達及與臨床特征的相關性分析

張彩蘭，楊艷梅

（定西市第二人民醫院，甘肅 定西 743000）

目的 探討CD44、ALDH1在胃癌中的表達情況，并且分析CD44、ALDH1與胃癌臨床特征之間的相關性。方法 采用免疫組化染色、免疫組化雙重染色檢測正常胃黏膜組織、慢性萎縮性胃炎II～III級胃黏膜組織及胃癌組織中CD44、ALDH1的表達情況，分析CD44、ALDH1表達與胃癌臨床特征之間的關系。結果 CD44、ALDH1在胃癌組織中陽性表達的人數多于慢性萎縮性胃炎的胃黏膜組織及正常胃黏膜組織（P＜0．05）；胃癌組織中CD44、ALDH1的表達與腫瘤分級、有無淋巴結轉移存在相關性（P＜0．05）。結論 胃癌組織中CD44、ALDH1的表達明顯高于正常胃黏膜組織，與胃癌的發生、發展有密切相關性，可作為胃癌早期發現、浸潤、轉移、預后的重要指標。

胃癌；CD44；ALDH1；臨床特征

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，世界各地發病率有很大差異，日本、中國、智利、芬蘭、冰島等國家是胃癌的高發區，而美國、澳大利亞、新西蘭等國胃癌的發病率則較低。中國胃癌的發病率占全世界的42%，并且胃癌死亡率占惡性腫瘤的第一位，全國平均胃癌死亡率高達20/10萬，男性高于女性，男女比約為3∶1。目前胃癌的治療主要以手術為主，輔以放療和化療等綜合治療方法，但手術治療對晚期胃癌患者已失去了意義。找到一種能夠早期發現胃癌，與胃癌的發現、發展、浸潤、預后有關的指標，將為胃癌的治療提供新的策略。目前研究發現，一些細胞表面分子標志物與惡性腫瘤的發現、發展及預后具有相關性。而CD44是研究比較廣泛的腫瘤干細胞因子，它是一種細胞表面跨膜蛋白，主要表達于上皮細胞、淋巴細胞及巨噬細胞，主要作用是通過和透明質酸、纖維粘連蛋白及膠原結合，介導細胞和細胞外基質之間的特異性黏附，參與細胞對透明質酸的攝取及降解，與細胞骨架蛋白結合，參與細胞偽足的形成，從而促進細胞的遷移[1－2]。而ALDH1是乙醛脫氫酶（ALDH）家族成員之一，是催化細胞內乙醛氧化為乙酸的細胞溶質酶，在其與惡性腫瘤關系的研究中，最初發現與環磷酰胺（CTX）類藥物耐藥有關，這就進一步說明ALDH1陽性細胞能避免化療藥物的作用。進一步研究CD44、ALDH1的表達與胃癌臨床特征的相關性，可為未來胃癌的發現、治療提供新的線索及策略，現介紹如下。

1 病例與試劑

本研究中的48例胃癌患者的腫瘤組織（術前均未行放化療）、18例慢性萎縮性胃炎II～III級患者的胃黏膜組織及16例正常人的胃黏膜組織均來自定西市第二人民醫院病理科及內鏡中心，均經病理學研究證實。胃癌患者中男26例，女22例；年齡 23～75歲，平均年齡 57．8歲；胃癌處于I、II級的20例，胃癌處于III、IV級的28例；淋巴結轉移的 28例，無淋巴結轉移的20例。

本次研究的濃縮性ALDH1兔抗人多克隆抗體購自武漢博士德生物技術有限公司，CD44鼠抗人單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司，免疫組化染色試劑盒：UltraSensitveTMSP染色試劑盒、DouTMSP雙染試劑盒（KIT－9999）均購自福州邁新生物科技有限公司。

2 方法

將不同組織包埋在石蠟塊里，每個石蠟塊切片4張，用于CD44、ALDH1單染及雙染。經過處理的切片置于60℃～70℃烤箱中烘烤6小時，備用。免疫組化染色及免疫組化雙重染色步驟均嚴格按說明書進行。

3 結果判定及統計學分析

免疫組化染色及免疫組化雙重染色結果顯示：CD44陽性，表達于細胞膜，呈棕黃色；ALDH1陽性，表達于細胞漿，呈棕黃色。陽性細胞計數參照TomomiIshida的計數標準[3]，選擇腫瘤組織比較豐富的區域，在物鏡下觀察10個視野，每個視野計數100個細胞，計算所有陽性細胞數。采用半定量方法進行統計，無陽性細胞數為（－），陽性細胞數＜5%為（+），陽性細胞數5%～25%為（++），陽性細胞數＞25%為（+++），染色結果均由兩位醫生用雙盲法進行評估。

采用SPSS13．0統計軟件包進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗。

4 結果

4.1 CD44、ALDH1在不同組織中的表達

在胃癌組織中，CD44陽性，表達于細胞膜，呈棕黃色；CD44在慢性萎縮性胃炎中局灶陽性表達；而在正常胃黏膜中幾乎不表達。在胃癌組織中，ALDH1陽性，表達于細胞漿，呈棕黃色顆粒；在慢性萎縮性胃炎II～III級的胃黏膜組織中，ALDH1陽性表達率明顯低于胃癌組織；在正常胃黏膜組織中，ALDH1無表達，見表1。

表1 CD44和ALDH1在不同組織中的表達

4.2 CD44和ALDH1的表達與臨床特征的關系

在胃癌組織中，CD44、ALDH1的陽性表達與腫瘤分級、有無淋巴結轉移相關（P＜0．05）；CD44、ALDH1 的表達與性別、腫瘤大小、年齡無明顯相關性（P＞0．05），見表 2。

表2 CD44和ALDH1在胃癌中的表達與臨床特征的關系

4.3 CD44+/ALDH1+在胃癌組織中的陽性表達及與臨床特征的相關性

在胃癌組織中，CD44+/ALDH1+的陽性表達與有無淋巴結轉移、腫瘤分級相關（P＜0．05）；隨著腫瘤分級的升高、淋巴結的轉移，CD44+/ALDH1+陽性表達的患者人數逐漸增多，見表3。

表3 CD44+/ALDH1+在胃癌中的表達及與臨床特征的相關性

5 討論

胃癌是消化道高發腫瘤，近年來發病年輕化，發病率和死亡率增加，晚期患者人數增加，好多患者錯過手術時機。Mayer等[4]發現，正常胃黏膜無CD44陽性表達，慢性炎癥有誘導良性胃黏膜表達CD44的作用，而ALDH1是ALDH超家族編碼特定生命進程中的關鍵酶，與多種人類腫瘤的發生、發展有關，最初發現與環磷酰胺（CTX）類藥物耐藥有關，其表達增高提示對化療藥不敏感、預后差。惡性腫瘤的發生、發展一直是研究的熱點，研究CD44、ALDH1這兩種蛋白的表達，為胃癌的早期發現、預防及治療提供線索。本研究結果顯示，胃癌組織中CD44、ALDH1陽性表達的人數明顯多于慢性萎縮性胃炎、正常胃黏膜組織（P＜0．05），慢性萎縮性胃炎的胃黏膜組織中，CD44、ALDH1陽性表達的人數多于正常胃黏膜組織（P＜0．05），進而說明CD44、ALDH1的陽性表達與胃癌及胃黏膜疾病有相關性。任何腫瘤的發生都是多階段、多基因參與的過程，前期研究發現，CD44廣泛參與胃癌細胞的黏附、歸巢、侵襲及轉移過程。

Harn等[5]在1996年就發現，在慢性萎縮性胃炎的胃黏膜組織中，CD44陽性表達的人數明顯多于正常胃黏膜組織（P＜0．05），并認為它可作為檢查胃癌前病變的有用工具。本次研究證實，CD44、ALDH1的表達與胃癌患者的年齡、性別及腫瘤大小無明顯相關性（P＞0．05），而與腫瘤分級、有無淋巴結轉移有明確相關性（P＜0．05），隨著腫瘤分級的升高、淋巴結的轉移，CD44、ALDH1陽性表達的人數明顯增多，通過進一步的免疫組化雙重染色結果顯示，CD44+/ALDH1+的表達與腫瘤分級、有無淋巴結轉移有相關性（P＜0．05）。Winder等[6]的研究證實，CD44是一種轉移相關基因；謝建偉、Hirata、王軍等[7－9]通過實驗證實，CD44參與胃癌發展和淋巴結轉移過程，發現CD44的表達與腫瘤分級、淋巴結轉移有密切相關性（P＜0．05）。前期關于結直腸癌組織的研究證實，CD44、ALDH1、CD44+/ALDH1+的表達與結直腸癌的發生、發展及預后有相關性（P＜0．05）[10]，為靶向治療提供靶點。

[1]Shah N，Cabanillas F，Mclntyre B，et al．Prognostic value of serum CD44，intercellular cell adhesion molecule－1 and vascular cell adhesion molecule－1 levels in patients with indolent non－Hodgkin lymphomas[J]．Leuk Lymphoma，2012，53（1）：50－56．

[2]WakamatsuY，SakamotoN，OoHz，et al．Expressioof cancer stem cell markers ALDH1，CD44，CD133 in primary tumor and lymph node metastasis of gantric cancer[J]．Pathol Int，2012，62（2）：112－119．

[3]Ishida T．Immunohistochemical expression of the CD44 variant 6 in colorectal adenocar－cinoma[J]．Surg Today，2000，30（1）：28－32．

[4]Mayer B，Jauch KW，Gunthert U，et al．Denovo expression of CD44 and survival in gastric cancer[J]．Lancet，1993，42（8）：1019－1022．

[5]Harn HJ，Ho LI，Shyu RY，et al．Soluble CD44isoforms in serum as potential markers of metastatic gastric carcinoma [J]．J Clin Gastroenterol，1996，22（2）：107－110．

[6]Winder T，Ning Y，Yang D，et al．Germline polymorphisma in genes involved in the CD44 signaling pathway are associated with clinical outcome in localined gastric adenocarcinoma[J]．Int J Cancer，2011，129（5）：1096－1104．

[7]謝建偉，黃昌明，鄭朝輝，等．腫瘤干細胞表面標志物CD44在胃癌中的表達及其意義[J]．中華胃腸外科雜志，2013，16（11）：1107－1111．

[8]Hirata K，Suzuki H，Imaeda H，et al．CD44 variant 9 expression in primary early gastric cancer as a marker for recurrence[J]．Br J，2013（109）：379－386．

[9]王軍，張勇，任芳，等．干細胞標志物CD44與胃癌臨床病理特征的相關性研究[J]．現代腫瘤醫學，2013，21（3）：85．

[10]張彩蘭，劉斌，楊艷麗，等．癌干細胞CD44+/ALDH+在結直腸癌中的表達及臨床病理學意義[J]．世界華人消化雜志，2012（31）：3005－3009．

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1671－1246（2017）24－0150－03