東莞地區(qū)老年人高脂血癥ApoE基因多態(tài)性與血脂水平相關性探討

楊萬勇 阮富旺 陳小隴

【摘要】 目的 探討東莞地區(qū)老年人高脂血癥患者載脂蛋白E（ApoE）基因多態(tài)性與血脂相關性。方法 選擇2100例高脂血癥患者作為高脂血癥組， 另選100例健康對照者作為對照組。兩組均采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法進行ApoE基因型檢測， 利用全自動生化儀檢測甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平， 并分析其與ApoE基因多態(tài)性的相關性。結果 兩組人群共檢出E2/2、E3/3、E4/4、E2/3、E2/4和E3/4六種基因型， 高脂血癥組患者E3/3基因型頻率低于對照組， E3/4基因型頻率高于對照組（P<0.05或0.01）；E3/4+ E4/4基因型患者TC、LDL-C水平明顯高于E3/3和E2/2+ E2/3基因型患者， HDL-C水平低于E2/2+ E2/3基因型患者差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；E3/3基因型患者LDL-C水平高于E2/2+ E2/3基因型患者， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 ApoE基因多態(tài)性與高脂血癥有一定的相關性， E3/4+ E4/4基因型與TC、LDL呈正相關， E3/3和E2/2+ E2/3則呈負相關。

【關鍵詞】 載脂蛋白E；多態(tài)性；高脂血癥；相關性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.11.014

【Abstract】 Objective To discuss the correlation between Apolipoprotein E （ApoE） gene polymorphism and blood lipid level in the elderly hyperlipidemia patients in Dongguan. Methods There were 2100 hyperlipidemia patients as hyperlipidemia group， and 100 healthy control persons as control group. ApoE genotypes in both groups were detected by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism （PCR-RFLP） method， and triglyceride （TG）， total cholesterol （TC）， low density lipoprotein cholesterol （LDL-C）， high density lipoprotein cholesterol （HDL-C） level were detected by automatic biochemical analyzer. Its correlation with ApoE gene polymorphism was analyzed. Results Six genotypes of E2/2， E3/3， E4/4， E2/3， E2/4 and E3/4 were detected in two groups. The frequency of E3/3 genotype in the hyperlipidemia group was lower than that in the control group， and the frequency of E3/4 genotype was higher than that in the control group （P<0.05 or 0.01）. Patients with E3/4+ E4/4 genotype had obviously higher E3/3 and E2/2+ E2/3 genotype， and lower HDL-C level than patients with E2/2+ E2/3 genotype. Their difference was statistically significant （P<0.05）. Patients with E3/3 genotype had higher LDL-C level than patients with E2/2+ E2/3 genotype， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion There is a correlation between ApoE gene polymorphism and hyperlipidemia. The E3/4+ E4/4 genotype is positively correlated with TC and LDL， and E3/3 and E2/2+ E2/3 are negatively correlated.

【Key words】 Apolipoprotein E； Polymorphism； Hyperlipidemia； Correlation

高脂血癥是老年人冠心病的重要危險因素， ApoE是一種多態(tài)性蛋白， 有三個常見的異構體， 主要分布于乳糜微粒（CM）、極低密度脂蛋白（VLDL）、低密度脂蛋白（LDL）和部分高密度脂蛋白（HDL）中， ApoE除具有于LDL受體結合的功能外， 還具有免疫調節(jié)作用和神經細胞修復功能[1-3]。本研究利用PCR-RFLP方法檢測2100例高脂血癥患者ApoE基因型， 并與100例健康對照者進行比較， 同時分析其與血脂的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇2015年1月～2017年6月在本院住院的2100例未經血脂藥物治療的高脂血癥患者作為高脂血癥組。根據WHO年齡劃分標準分為中年組（45～59歲）、老年前期組（60～74歲）、老年組（75～89歲）。其中中年組263例，平均年齡（49.2±5.5）歲；老年前期組717例， 平均年齡（68.5±3.6）歲；老年組1120例， 平均年齡（78.3±3.8）歲。選擇100例健康對照者作為對照組。

1. 2 方法 所有研究對象均在抽血前未口服降血脂藥物， 空腹12～14 h， 抽取靜脈血3～4 ml送檢， 分別檢測TC、HDL-C、LDL-C、TG。基因組DNA提取標本采用空腹ETDA抗凝全血， -20℃保存。利用AU5800全自動生化分析儀檢測TG、TC、LDL-C、HDL-C， 試劑采用寧波美康生物科技有限公司。DNA提取采用深圳匯研全自動核酸提取儀進行， 采用配套試劑進行。引物合成由上海天根生物公司合成。分析TG、TC、LDL-C、HDL-C與ApoE基因多態(tài)性的相關性。

1. 3 ApoE基因型擴增及電泳 95℃預變性10 min， 95℃變性5 min， 62℃退火50 s， 72℃延伸1 min， 30個循環(huán)， 72℃再延伸7 min。PCR產物進行HhaI內切酶酶解， 取酶解產物10 ml行8%聚丙烯酰胺凝膠電泳， 溴化乙錠染色， 在紫外燈下觀察結果。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件對研究數據進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2. 1 兩組ApoE基因分布情況比較 兩組人群共檢出E2/2、E3/3、E4/4、E2/3、E2/4和E3/4六種基因型， 分別為E2/2、E3/3、E4/4、E2/3、E2/4和E3/4。高脂血癥組患者E3/3基因型頻率低于對照組， E3/4基因型頻率高于對照組（P<0.05或0.01）。見表1。

2. 2 高脂血癥組不同基因型血脂水平比較 E3/4+ E4/4基因型患者TC、LDL-C水平明顯高于E3/3和E2/2+ E2/3基因型患者， HDL-C水平低于E2/2+ E2/3基因型患者， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；E3/3基因型患者LDL-C水平高于E2/2+ E2/3基因型患者， 差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

高血脂是老年人冠心病的重要危險因素， ApoE是是一種富含精氨酸的堿性蛋白， 存在于血漿CM、VLDL 及其殘粒中， β-VLDL中含ApoE的量高于VLDL， 一部分ApoE在血液中可與ApoAⅡ形成復合體[4-6]。ApoE可在多種組織中合成， 主要是在肝臟， 其次是在腦組織和腎臟中。ApoE的基因位點具有遺傳多態(tài)性， 多態(tài)性與個體血脂水平及動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關[7-10]。黎旭等[1]研究指出我國北京自然人群的ApoE存在6種基因表型。其中ApoE3/E3占絕大多數， 為65.6%， 其次為ApoE2/E3和ApoE4/E3， 分別占14.9%和16.3%.兩個純合子最少， ApoE2/E2占0.8%， ApoE4/E4占0.7%。ApoE基因的3種等位基因序列的不同造成其結構差異， 進而導致由其編碼的3種ApoE異構體具有不同的受體結合活性， 從而影響個體的血清血脂水平[2]：ApoE4與受體的結合能力最強， 機體的肝臟通過ApoE受體攝取較多膽固醇。使肝細胞內膽固醇含量增加。通過反饋調節(jié)使肝細胞膜表面的LDL受體數量減少， 降低了肝細胞對LDL的攝取， 同時極低密度脂蛋白轉化為LDL增多， 使血清LDL水平增高；相反， ApoE2的受體結合活性最弱， 使得血清LDL水平降低。

本研究對東莞地區(qū)2100例高脂血癥患者進行了ApoE基因型合并分析， 結果表明， 兩組人群共檢出E2/2、E3/3、E4/4、E2/3、E2/4和E3/4六種基因型， 高脂血癥組患者E3/3基因型頻率低于對照組， E3/4基因型頻率高于對照組（P<0.05或0.01）；E3/4+ E4/4基因型患者TC、LDL-C水平明顯高于E3/3和E2/2+ E2/3基因型患者， HDL-C水平低于E2/2+ E2/3基因型患者差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；E3/3基因型患者LDL-C水平高于E2/2+ E2/3基因型患者， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

綜上所述， ApoE基因多態(tài)性與高脂血癥有一定的相關性， E3/4+ E4/4基因型與TC、LDL呈正相關， E3/3和E2/2+ E2/3則呈負相關。

參考文獻

[1] 黎旭， 趙冬， 劉靜， 等. 北京自然人群載脂蛋白E基因多態(tài)性頻率分布及與血脂關系研究. 心肺血管病雜志， 2002， 21（4）：193-197.

[2] Souza DR， Nakachima L， Biagioni RB， et al. Relevance of apolipoprotein E4 for the lipid profile of Brazilian patients with coronary artery disease. Braz J Med Bid Res， 2007， 40（2）：189-197.

[3] 占程燕， 楊惠民， 韓麗蓓， 等. 高脂血癥痰瘀證ApoE基因多態(tài)性分布特點及其與血脂水平相關性探索. 北京中醫(yī)藥大學學報， 2007， 30（9）：634-636.

[4] 劉迎利， 李建科， 閏自強， 等. ApoE基因多態(tài)性與血脂水平的相關性. 醫(yī)學爭鳴， 2006， 27（5）：460-461.

[5] 劉國棟， 王樺， 汪琦， 等. APOE基因多態(tài)性與血脂異常相關性分析. 武漢大學學報（醫(yī)學版）， 2017， 38（2）：267-270.

[6] 韓晶. 新疆散發(fā)性阿爾茨海默病患者血脂水平分析及與ApoE基因多態(tài)性的相關性研究. 新疆醫(yī)科大學， 2008.

[7] 張利芳， 徐能義， 高麗君， 等. 內蒙古包頭市區(qū)肥胖兒童ApoE基因多態(tài)性及血脂水平. 現代預防醫(yī)學， 2012， 39（6）：1378-1380.

[8] 楊純玉， 盧杭楨， 黃璐璐， 等. 中年男性ApoE基因多態(tài)性與血清血脂濃度分析. 嶺南心血管病雜志， 2009， 15（4）：303-305.

[9] 魏貞. 長壽人群ApoE基因多態(tài)性與血脂及長壽相關性的研究. 廣西醫(yī)科大學， 2014.

[10] 何茜， 郝晟赟， 張萬松， 等. 高脂血癥患者與ApoE基因多態(tài)性的相關性研究. 臨床合理用藥雜志， 2017， 10（31）：141-143.

[收稿日期：2018-01-03]