基于QuEChERS前處理的液相色譜—紫外檢測串聯(lián)柱后衍生熒光法測定蔬菜水果中13種農(nóng)藥殘留

陳楠 馬世柱 姚德祥 黎小鵬 梁錦填 周嘉誠

摘要 在運用QuEChERS法對蔬果樣品進行前處理的基礎上，使用高效液相色譜紫外檢測-衍生-熒光法測定常見蔬果中吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈和10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量。結果表明，13種農(nóng)藥儀器方法檢出限在0.003～0.050 mg/kg之間，加標回收率在70.5%～112.0%之間，相對標準偏差在0.46%～8.10%之間，標準曲線線性良好，相關系數(shù)在0.998 3～0.999 9之間。此方法操作簡便，有機溶劑用量少，準確度和精密度好，適合配備了高效液相色譜儀的基層實驗室對常見蔬菜水果進行農(nóng)藥多殘留檢測。

關鍵詞 農(nóng)藥多殘留檢測；高效液相色譜；紫外檢測-衍生-熒光法；QuEChERS

中圖分類號 S481+.8 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）13-0116-02

Determination of 13 Pesticides in Fruits and Vegetables with QuEChERS by HPLC-VWD-Post Column Derivatization-FLD

CHEN Nan MA Shi-zhu YAO De-xiang LI Xiao-peng LIANG Jin-tian ZHOU Jia-cheng

（Sanxiang Inspection and Testing Station of Agricultural Products in Province Guangdong，Zhongshan Guangdong 528463）

Abstract Based on the pre-treatment of fruits and vegetables samples by QuEChERS method，imidacloprid，acetamiprid，carbendazim and 10 carbamate pesticides in common fruits and vegetables were researched by HPLC-UV-Post column derivatization.Conclusions of detecting methods were that the limits of detection were in the range of 0.003-0.050 mg/kg.The average spiked recoveries ranged from 70.5% to 112.0% with relative standard deviations of 0.46%-8.10%.The calibration curves all had good linear relationships with correlation coefficients 0.998 3-0.999 9.This method is easy to operate，with less organic solvent consumption，accurate and reliable，good accuracy and precision，which is suitable for primary laboratory with HPLC to carry out detection of pesticide residues in fruits and vegetables.

Key words determination of multiple pesticide residues；HPLC；VWD-Post Column Derivatization-FLD；QuEChERS

蔬菜、水果的農(nóng)藥殘留問題日益受到人們關注，對農(nóng)殘的監(jiān)測技術要求越來越高，許多基層實驗室逐步配置氣相色譜儀和液相色譜儀，按檢測標準[1-3]進行農(nóng)殘測定，但部分方法前處理效率低，不符合農(nóng)業(yè)生產(chǎn)規(guī)律，過多的廢液、廢料對環(huán)境不友好。美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究服務中心的Anastassi-ades M等開發(fā)了一種快速、簡便、價格低廉的預處理方法用于高質量的農(nóng)藥多殘留物分析，簡稱為QuEChERS法[4]。近年來，國內QuEChERS法的研究運用火熱[5-6]，但未見高效液相色譜紫外檢測串聯(lián)柱后衍生熒光法測定蔬果農(nóng)殘的相關報道。本文參考基層實驗室儀器設施配備情況，運用QuE-ChERS前處理，使用高效液相色譜紫外檢測串聯(lián)柱后衍生熒光法，對幾種常見蔬果中13種農(nóng)藥殘留進行快速篩查。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫1260高效液相色譜儀，配紫外、熒光檢測器，柱后衍生儀（Pickering，Vector PCX），超純水機（銳思捷，Spring R20），電子天平，渦旋混合器，高速冷凍離心機，水浴氮吹儀，食品料理機。

甲醇、乙腈均為色譜純；QuEChERS萃取試劑包（安捷倫，5982-5650CH）；15 mL分散固相萃取凈化管（安捷倫，5982-5656CH）；0.2 μm尼龍濾膜（安捷倫，5191-4286）；柱后衍生試劑包（Pickering，含水解試劑CB130、OPA稀釋劑CB-910、鄰苯二甲醛OPA、巰基乙醇）；13種農(nóng)藥標準品均購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境質量監(jiān)督檢驗測試中心。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品處理。①樣品制備：抽取不少于1 000 g的樣品，將可食部分切碎，混勻于食物料理機中充分勻漿，分裝保存，制成待測樣，于-18 ℃冰箱中保存，備用。②樣品提取和凈化：準確稱取 10.00 g樣品于50 mL離心管中，加 10.0 mL乙腈（提前置于-4 ℃冰箱1～2 h），渦旋混合30 s，加入QuEChERS萃取試劑包，迅速振散混勻，渦旋1 min，8 000 r/min冷凍離心5 min。取6 mL上清液于15 mL分散固相萃取凈化管中，渦旋混合1 min，8 000 r/min離心5 min，取2.00 mL上清液50 ℃水浴氮吹至近干，加入1.00 mL 50%甲醇水混勻，過膜待測。

1.2.2 儀器條件。色譜柱為Pickering氨基甲酸酯分析專用柱（C8，4.6 mm×250 mm×5 μm，貨號0846250）；柱溫42 ℃；進樣體積10 μL；流速1.2 mL/min。洗脫程序（水%∶甲醇%）為0 min，95%∶5%；1 min，90%∶10%；26 min，30%∶70%；28 min，0%∶100%；30 min，95%∶5%；后運行5 min。串聯(lián)方式為色譜柱→紫外檢測器→柱后衍生儀→熒光檢測器；紫外檢測器波長270 nm，15.8 min變?yōu)?46 nm，17 min變?yōu)?86 nm；柱后衍生條件為溫度100 ℃，水解試劑和OPA試劑流速均為0.3 mL/min；熒光檢側器激發(fā)波長330 nm，發(fā)射波長465 nm。

1.2.3 標準曲線繪制。13種標準品用甲醇配成混合標準貯備液，其中氨基甲酸酯類農(nóng)藥濃度為10 mg/L，吡蟲啉、啶蟲脒和多菌靈濃度為50 mg/L，貯存于-18 ℃冰箱中，有效期為6個月；以氨基甲酸酯類農(nóng)藥濃度計算，用50%甲醇水稀釋成濃度為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L的混合標準工作液。現(xiàn)配現(xiàn)用，以各色譜峰面積為縱坐標、樣品濃度為橫坐標，分別進行線性回歸處理，外標法定量。

2 結果與討論

2.1 標準曲線與檢出限

13種農(nóng)藥在29 min內完全分離，響應良好（圖1、2），濃度范圍內線性良好，以3倍基線噪聲所對應的標準品濃度為儀器檢出限，檢出限低于標準限量[7]，各項試驗數(shù)據(jù)見表1。

2.2 回收率和方法精密度

通過在空白樣品（經(jīng)檢測不含目標化合物）中加標進行回收率和方法精密度測試。取菜心、結球白菜、葉用芥菜、普通白菜、葉用萵苣、番茄、葡萄和草莓共8種蔬果的空白樣品，用1.2.3所配的13種農(nóng)藥混合標準貯備液進行加標，使樣品吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈含量為0.25、0.05 mg/kg 2個濃度水平，10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥含量為0.5、0.1 mg/kg 2個水平濃度，每個水平濃度檢測3次。取批內平均值，計算相對標準偏差RSD。番茄樣品的3-羥基克百威和涕滅威有基線干擾，影響定性定量，通過NH2固相萃取小柱凈化后干擾依然存在。部分氨基甲酸酯類農(nóng)藥熱穩(wěn)定性較差，水浴溫度不能過高且氮吹不得過干。

3 結論

綜上所述，本方法操作簡便，有機溶劑用量少，準確度和精密度良好，適合配備了高效液相色譜儀的基層實驗室對常見蔬菜水果進行13種農(nóng)藥殘留快速篩查。

4 參考文獻

[1] 蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定：NY/T 761-2008[S].北京：中國標準出版社，2008.

[2] 水果、蔬菜中多菌靈殘留的測定 高效液相色譜法：GB/T 23380-2009[S].北京：中國標準出版社，2009.

[3] 蔬菜、水果中吡蟲啉殘留量的測定：NY/T 1275-2007[S].北京：中國標準出版社，2007.

[4] 趙祥梅，董英，王和生.QuEChERS法在農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留物檢測中的應用研究進展[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18（5）：952-954.

[5] 黎小鵬，李擁軍，劉紅梅，等.QuEChERS前處理-高效液相色譜儀檢測多種蔬菜水果中10種氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2014（13）：138-140.

[6] 姚德祥，黎小鵬，李擁軍，等.QuEChERS前處理-氣相色譜儀檢測火龍果中的多種農(nóng)藥殘留[J].仲愷農(nóng)業(yè)工程學院學報，2017，30（1）：36-41.

[7] 食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量：GB 2763-2016[S].北京：中國標準出版社，2017.