血液中乙醇含量測定-異戊醇內標標準曲線法

趙曉華

摘 要：目的：建立用異戊醇作為內標的標準曲線定量法來測定血液中的乙醇含量，并與方法GA/T 1073-2013進行比較。方法：用頂空進樣器-氣相色譜聯用儀，采用內標工作曲線法的定量方式分析血液中乙醇含量[1-2]。結果：用本方法測得的乙醇加標回收率為99.4～101.9%，相對標準偏差在1%以內，一元性回歸方程式的相關系數r>0.999。結論：用該法分析血液中的乙醇含量準確度和精密度均能滿足要求，內標物的適用性更廣泛。

關鍵詞：乙醇;血液;異戊醇;氣相色譜;內標-標準曲線

中圖分類號：O657 文獻標識碼：A 文章編號：1671-2064（2020）01-0210-02

血液中的乙醇含量測定目前現有的方法是GA/T 1073- 2013，采用的內標物為叔丁醇，但是筆者在實際運用中發現：叔丁醇的熔點為25.7℃，冬天的時候，叔丁醇是固體狀態，配制內標液的時候需要加熱等候很長時間，給稱量或移取帶來不便。因此筆者想要尋找熔點較低的化合物來作為內標，根據標準GA/T 1073-2013，其不但可以測試乙醇含量，還用于測試甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇，因此內標物的選擇需要避開以上化合物，經過尋找，筆者找到了異戊醇，其熔點為-117℃，溶解性：微溶于水，與乙醇混溶，因此筆者認為異戊醇比較適合作為內標物。

1 材料與方法

1.1 儀器

Aglient氣相色譜7890B、Aglient頂空進樣器7697A、Eppendorf移液器（20-200μL和100-1000μL）、頂空進樣瓶（10mL，配有鋁帽及密封墊）。

1.2 試劑

乙醇系列標準品（Cerilliant進口標準品）、異戊醇（國藥試劑>98.5%）、蒸餾水（屈臣氏）、血液樣品。

1.3 試劑配制

1.3.1 內標物溶液

用移液器移取25.1μL的異戊醇（密度0.81g/mL，純度98.5%）于一預先裝有適量蒸餾水的500mL容量瓶中，再用蒸餾水定容至刻度，搖勻，得濃度為4mg/100mL的異戊醇內標工作液。

1.3.2 乙醇標準品

市售，濃度為10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL。

1.4 實驗條件

1.4.1 頂空進樣器條件（如表1）

1.4.2 氣相色譜條件（如表2）

1.5 實驗方法

1.5.1 標準曲線制作

用移液器分別移取500μL的異戊醇內標工作液于7個10mL頂空瓶中，再向這7個頂空瓶中分別移取100μL的10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL乙醇標準品，用硅膠墊和鋁帽密封，混勻。置于頂空進樣器中，按1.4實驗條件進樣分析。以待測組分（乙醇）和內標物（異戊醇）的峰面積之比作為縱坐標，以待測組分（乙醇）和內標物（異戊醇）的含量之比作為橫坐標，制作內標工作曲線。

1.5.2 樣品測定

用移液器分別移取100μL的全血樣品和500μL的異戊醇內標工作液于一個10mL頂空瓶中，用硅膠墊和鋁帽密封，混勻，置于頂空進樣器中，按1.4實驗條件進樣分析。跟據待測樣品中乙醇和異戊醇的峰面積之比，即可在工作曲線上查出待測樣品中乙醇的濃度，進而得出待測樣品中乙醇的含量。

2 結果與討論

2.1 方法的可行性

從圖1可知，乙醇的出峰時間為1.394min，異戊醇的出峰時間為5.112min，實驗條件能達到分離效果，實驗方法可行。

2.2 內標工作曲線的建立

乙醇/異戊醇峰面積之比-乙醇/異戊醇含量之比對照表見表3;內標工作曲線見圖2。

2.3 加標回收

向空白血液中加入適量乙醇，分別制得乙醇含量為50mg/100mL和80mg/100mL的血液樣品，用此方法測其乙醇含量，結果如表4。

2.4 精密度

隨機抽取一血液樣品，按此方法重復分析6次，得出6個乙醇含量結果，計算相對標準偏差如表5。

3 結語

應用異戊醇作為內標測定血液中乙醇含量，加標回收率為99.4～101.9%，相對標準偏差為0.78%，滿足測試要求，異戊醇代替叔丁醇作為內標的可操作性更強，特別是當室溫比較低時，異戊醇保持液體狀態，方便了檢測人員的操作。

參考文獻

[1] 陳君，彭峰.氣相色譜法直接測定血液中乙醇的含量[J].檢驗醫學與臨床，2010，7（5）：418-419.

[2] 代娟，陳曼，賴翼，等.直接進樣毛細管氣相色譜法測定血液中乙醇含量的研究[J].中國衛生檢驗雜志，2010，20（2）：283-284.