清胃瀉心湯對急性胃潰瘍模型大鼠免疫球蛋白、炎癥因子及氧化應激指標的影響?

宋秀菊 韓 兵 劉春曉 王 莉

（1.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410000；2.山東省青島市即墨區中醫醫院，山東 青島 266200；3.山東省青島市海慈醫療集團，山東 青島 266033）

胃潰瘍為常見的消化道疾病，病因十分復雜，與營養不良、應激、創傷、吸煙酗酒、過量服用非甾體消炎藥、幽門螺桿菌感染等多種因素有關。發病機制有炎癥學說、無酸無潰瘍學說、因子失衡學說等［1］。急性胃潰瘍易反復發作，引起胃部出血、潰瘍穿孔等嚴重并發癥，隨著人們生活節奏加快，不良生活習慣增多，其發病率有逐年上升趨勢，目前治療以外科手術和非甾體抗炎藥治療為主，但易導致多種不良反應，療效欠佳［2］。胃潰瘍屬中醫學“胃脘痛”范疇，其病位在胃，涉及肝脾、外邪、飲食、情志等因素，胃氣阻滯，胃失和降而發病，胃火上沖動血，治宜健脾益氣、清熱燥濕、疏肝和胃［3-4］。清胃瀉心湯由黃連、藿香等16味中藥組成，為本院治療胃潰瘍的臨床協定方，具有較好的臨床療效，但其作用機制尚不明確。本研究通過腹腔注射吲味美辛和水浸拘束法建立急性胃潰瘍大鼠模型，旨在觀察清胃瀉心湯對急性胃潰瘍模型大鼠免疫球蛋白、炎癥因子及氧化應激指標的影響，并探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠，體質量（200±20）g，8周齡，北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證：SCXK-（京）2012-0001。合格證號：110011191100312。室溫飼養，自由飲水，符合《實驗動物管理條例》要求。

1.2 實驗藥物 清胃瀉心湯，藥物組成：黃連15 g，藿香10 g，半夏10 g，茯苓15 g，茵陳10 g，白及10 g，黃芪15 g，生地黃15 g，牡丹皮10 g，黃芩10 g，大黃10 g，延胡索10 g，木香10 g，薏苡仁15 g，蒼術10 g，陳皮10 g。上述中藥飲片由青島市海慈醫療集團中藥房提供，藥材加水煎煮2次，分別濃縮成1 mL含0.5 g、1 g和1.5 g原藥材的藥液。吲哚美辛（上海北諾生物科技有限公司，生產批號：20180917）；奧美拉唑膠囊（20 mg/粒，海南通用三洋藥業有限公司，國藥準字H53021955）。

1.3 試劑與儀器 蘇木精-伊紅染色液（武漢華美生物工程有限公司）；免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）試劑盒購于美國B&D公司；白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒購于碧云天生物科技有限公司；過氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）購于南京建成生物工程研究所。RM2235型病理切片機，德國萊卡公司；BX60顯微鏡，日本Olympus Optical公司；LDZ-2型低速離心機（北京京立離心機有限公司）；OLYMPUSAU5400全自動生化分析儀，日本奧林巴斯有限公司；ELx800酶標儀，美國伯騰儀器有限公司。

1.4 分組與造模 將60只大鼠隨機分為對照組，模型組，清胃瀉心湯低、中、高劑量組和陽性組，每組10只。除對照組外，其余各組采用腹腔注射吲哚美辛和水浸拘束法建立急性胃潰瘍大鼠模型。具體為腹腔注射吲哚美辛，劑量為20 mg/kg，6 h后將各組大鼠拘束于長×寬×高分別為16 cm×4 cm×4 cm的籠中，浸泡于16～18℃的恒溫水中，水面與劍突部齊平，浸泡6 h后，取出松綁。按照Guth標準采用潰瘍數評價［5］，麻醉后取完整胃組織，結扎賁門幽門制成胃袋并注入10 mL氯化鈉溶液，2%的甲醛溶液中固定10 min，沿胃大彎剪開并平展，淤血點為1分，線狀淤血長度＜1 mm為2分，1～2 mm為3分，3～4 mm為4分，＞5 mm為5分，全胃分數的綜合得分為該鼠的潰瘍數，潰瘍數大于20分為造模成功［6］。

1.5 給藥方法 于造模后第2日進行干預。對照組和模型組給予0.9%氯化鈉溶液灌胃，劑量為5 mL/kg，清胃瀉心湯低（0.5 g/mL）、中（1 g/mL）、高劑量（1.5 g/mL）組給予清胃瀉心湯灌胃，劑量為5 mL/kg，陽性組給予奧美拉唑灌胃（0.3 mg/mL），劑量為5 mL/kg。連續7 d，每日1次。

1.6 標本采集與檢測 1）潰瘍指數和潰瘍抑制率：給藥7 d后，將大鼠處死并立即開腹，結扎幽門、賁門，取出胃，無菌生理鹽水將胃內容物沖洗干凈，2%的甲醛溶液中固定10 min，觀察胃組織的損傷情況，游標卡尺精確測量胃黏膜上每一個損傷的長度，按照Guth標準評價潰瘍指數，計算潰瘍抑制率［7］，潰瘍抑制率（%）=（1-給藥組潰瘍指數/模型組潰瘍指數）×100%。2）胃組織病理學觀察：給藥后第7日，處死各組大鼠，分離實驗所需胃組織，4%多聚甲醛固定24 h，自來水沖洗，不同濃度的乙醇脫水，二甲苯透明固定，石蠟包埋，切片，厚度為5 μm，烤片，二甲苯脫蠟，乙醇水化，蘇木精染色，1%鹽酸乙醇溶液分化，自來水沖洗返藍，浸入伊紅染液，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠進行封片，顯微鏡下觀察。3）免疫球蛋白檢測：給藥后7 d，處死各組大鼠，心臟取血，不抗凝，3 000 r/min離心10 min，采用全自動生化分析儀免疫比濁法分析血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）水平。4）炎癥因子測定：給藥后第7日，處死各組大鼠，心臟取血，離心，取上清，采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定各組大鼠血清炎癥因子IL-2、IL-6和TNF-α水平。5）氧化應激指標測定：分別于造模后第7日，處死各組大鼠，心臟取血，離心，取上清，采用ELISA測定各組大鼠血清應激指標MPO、MDA、SOD水平，按照試劑盒說明操作。

1.7 統計學處理 應用SPSS19.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，組間或組內治療前后采用t檢驗，（%）表示計數資料，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠潰瘍面積、潰瘍指數和潰瘍抑制率比較 見表1。與對照組比較，模型組潰瘍面積和潰瘍指數顯著升高（P＜0.05），清胃瀉心湯低、中、高劑量組和陽性組的潰瘍面積、潰瘍指數顯著低于模型組，清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組潰瘍抑制率顯著高于清胃瀉心湯低劑量組（P＜0.05）。清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組潰瘍面積、潰瘍指數和潰瘍抑制率比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠潰瘍面積、潰瘍指數和潰瘍抑制率比較（±s）

表1 各組大鼠潰瘍面積、潰瘍指數和潰瘍抑制率比較（±s）

與對照組比較，?P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與清胃瀉心湯低劑量組比較，◇P＜0.05。下同

組別對照組模型組清胃瀉心湯低劑量組清胃瀉心湯中劑量組清胃瀉心湯高劑量組陽性組n 潰瘍抑制率（%）10 10 10 10 10 10潰瘍面積（mm2）0.71±0.16 9.67±1.25*7.03±1.12*△4.81±0.86*△◇3.51±0.79*△◇4.12±0.81*△◇潰瘍指數（分）-24.21±1.53 17.91±1.47△13.04±1.31△◇7.59±0.97△◇8.76±0.83△◇- -31.57±1.26△45.21±1.19△◇51.24±1.32△◇49.67±1.08△◇

2.2 各組大鼠病理形態學比較 見圖1。對照組未見明顯的胃組織形態學變化；模型組胃黏膜變薄，上皮細胞出現脫落缺損，黏膜固有腺體排列稀疏紊亂，大量炎性細胞浸潤，黏膜層出血，黏膜下層水腫；清胃瀉心湯低劑量組胃黏膜變薄，上皮細胞脫落，黏膜固有腺體少量增生，可見炎性細胞浸潤；清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組胃黏膜變薄，上皮少量缺損、脫落，腺體增生較多，排列較整齊，少量炎性細胞浸潤。

圖1 各組大鼠胃組織病理形態學變化（HE染色，100倍）

2.3 各組大鼠免疫球蛋白水平比較 見表2。與對照組比較，模型組血清IgA、IgG、IgM水平顯著升高（P＜0.05），清胃瀉心湯低、中、高劑量組和陽性組血清IgA、IgG、IgM水平均低于模型組，且清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組顯著低于清胃瀉心湯低劑量組（均P＜0.05）。清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組血清IgA、IgG、IgM水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表2 各組大鼠免疫球蛋白水平比較（g/L，±s）

表2 各組大鼠免疫球蛋白水平比較（g/L，±s）

組別對照組模型組清胃瀉心湯低劑量組清胃瀉心湯中劑量組清胃瀉心湯高劑量組陽性組n 10 10 10 10 10 10 IgA 0.11±0.05 0.42±0.08*0.34±0.06*△0.25±0.04*△◇0.21±0.05*△◇0.23±0.06*△◇IgG 0.46±0.07 1.02±0.13*0.87±0.12*△0.62±0.10*△◇0.57±0.11*△◇0.61±0.12*△◇IgM 0.31±0.11 0.62±0.09*0.51±0.08*△0.43±0.07*△◇0.36±0.08*△◇0.39±0.09*△◇

2.4 各組大鼠炎癥因子水平比較 見表3。與對照組比較，模型組血清IL-2、IL-6和TNF-α水平顯著升高（P＜0.05）；清胃瀉心湯低、中、高劑量組和陽性組血清IL-2、IL-6和TNF-α水平均低于模型組，且清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組顯著低于清胃瀉心湯低劑量組（均P＜0.05）。清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組血清IL-2、IL-6和TNF-α水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表3 各組大鼠炎癥因子水平比較（μg/L，±s）

表3 各組大鼠炎癥因子水平比較（μg/L，±s）

組別對照組模型組清胃瀉心湯低劑量組清胃瀉心湯中劑量組清胃瀉心湯高劑量組陽性組n 10 10 10 10 10 10 IL-2 10.32±1.23 72.14±1.98*50.04±2.03*△31.41±1.62*△◇28.31±1.62*△◇30.12±1.72*△◇IL-6 2.63±0.21 8.16±0.41*6.11±0.32*△4.26±0.29*△◇3.57±0.25*△◇3.62±0.28△◇TNF-α 5.25±0.39 17.26±3.11*14.17±2.58*△10.37±2.61*△◇8.47±2.35*△◇8.13±2.47*△◇

2.5 各組大鼠氧化應激指標水平比較 見表4。與對照組比較，模型組血清MPO和SOD水平顯著降低，MDA水平顯著升高（P＜0.05）；清胃瀉心湯低、中、高劑量組和陽性組MPO和SOD顯著高于模型組，而MDA顯著低于模型組，且清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組與清胃瀉心湯低劑量組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組血清MPO、MDA和SOD水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表4 各組大鼠氧化應激指標水平比較（±s）

表4 各組大鼠氧化應激指標水平比較（±s）

組別對照組模型組清胃瀉心湯低劑量組清胃瀉心湯中劑量組清胃瀉心湯高劑量組陽性組n 10 10 10 10 10 10 MPO（g/L）0.58±0.07 0.21±0.05*0.34±0.08*△0.46±0.07*△◇0.49±0.08*△◇0.51±0.06*△◇MDA（μmol/L）3.17±0.48 23.45±1.76*17.24±1.54*△11.27±1.37*△◇10.03±1.41*△◇9.67±1.52*△◇SOD（U/L）63.04±4.23 20.37±1.89*31.47±2.34*△45.12±2.89*△◇47.92±3.12*△◇49.52±2.76*△◇

3 討論

胃潰瘍病情較為復雜，主要是因胃黏膜侵襲因素增強引起，多種因素均參與了胃潰瘍的胃黏膜損傷過程，導致胃黏膜防御能力下降，病程延長，易引起胃部出血、潰瘍穿孔、幽門阻塞等嚴重并發癥，嚴重影響患者的生活質量［8］。胃潰瘍的發生與胃黏膜侵襲因素和防御機制之間平衡失調有關，胃酸分泌在胃潰瘍的發病中具有關鍵性的作用，胃黏膜損傷修復過程涉及多種細胞、細胞外基質及細胞因子等，抑制損傷因子和提升保護因子具有重要的意義［9］。研究發現，炎癥反應及氧化應激是胃潰瘍發生的重要基質。程曉華等研究發現［10］，活動性胃潰瘍患者血清PG呈異常升高狀態，與炎癥活動性評分具有正相關關系；血清EGF呈異常下降狀態，與炎癥活動性評分具有負相關關系，動態監測活動性胃潰瘍患者血清PG、EGF水平有助于評估病情及預后。體內自由基產生過多會損傷細胞，導致胃黏膜受損，羅炎杰等發現［11］，蘭索拉唑治療活動期胃潰瘍的臨床效果明顯優于奧美拉唑，可能與其顯著提高患者血清SOD、NO水平及降低血清MDA、ET-1水平有關。此外，費林立等發現［12］，奧美拉唑聯合抗生素治療有助于提高胃潰瘍患者的臨床療效，降低復發率，這可能與改善患者免疫功能、調節胃腸激素等因素有關。因此，從免疫球蛋白、炎癥因子及氧化應激指標探討急性胃潰瘍的治療作用具有重要意義。

西醫治療胃潰瘍具有給藥方便、起效快的優點，但存在藥物順應性和耐藥性的缺點，且遠期潰瘍復發率高。胃潰瘍屬中醫學“胃脘痛”“胃癰”“吐酸”“反胃”等范疇，脾胃氣機和暢，升降協調，運納相宜，邪氣侵襲，氣機升降失司，脾胃運納失職，導致疾病的發生。因中醫藥具有改善全身狀況、穩定病情及減少副作用等優勢，在治療胃潰瘍方面越來越受到人們的關注［13］。清胃瀉心湯依據胃潰瘍病因理論創立，重點是清熱解毒，去腐生肌，其次護脾和胃。方中黃連和黃芩清熱瀉火、補脾益胃、斂瘡生肌，清熱祛腐而不傷正，藿香化濕醒脾，半夏燥濕化痰、消痞降氣，茯苓利水滲濕、健脾，茵陳清熱利濕，白及收斂止血，黃芪補氣升陽、益氣攝血、生肌長肉，生地黃滋陰補血、生津止渴，牡丹皮清熱涼血、活血化瘀，大黃攻積滯、清濕熱、瀉火涼血、祛瘀解毒，延胡索、木香可理氣止痛，木香還具有溫胃化濕、醒脾消滯的作用，薏苡仁可益氣除濕，蒼術是運脾藥，可燥濕化濁止痛，陳皮是輕升理氣藥，可使和胃健脾各得其宜，增加療效。全方諸藥合用可開可降、可清可補、和降胃氣，使得脾升胃降。

本研究發現，清胃瀉心湯低、中、高劑量組和陽性組的潰瘍面積、潰瘍指數顯著低于模型組；清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組胃黏膜變薄，上皮少量缺損、脫落，腺體增生較多，排列較整齊，少量炎性細胞浸潤；清胃瀉心湯低、中、高劑量組和陽性組血清IgA、IgG、IgM水平均低于模型組，血清IL-2、IL-6和TNF-α水平均低于模型組，MPO和SOD顯著高于模型組，而MDA顯著低于模型組；且清胃瀉心湯中、高劑量組和陽性組明顯優于清胃瀉心湯低劑量組。

綜上所述，清胃瀉心湯可顯著減少潰瘍面積和潰瘍指數，提高潰瘍抑制率，改善胃組織形態學，其機制可能與調節免疫功能，降低炎癥反應，改善氧化應激有關［14-20］。