35牡丹花粉植物甾醇的分析及其與油菜花粉的比較

毛文岳 段向東 邵琳雅 郭彥君 孫春燕 紀海鵬 黃健花

摘 要：采用GC-MS分析了牡丹花粉中的主要植物甾醇，并與油菜花粉的含量進行比較。結果表明：牡丹花粉中共檢出了5種甾醇，含量最高的甾醇為異巖藻甾醇（21.89 mg/g）;其次為新甾醇物質Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-（2.68 mg/g）;β-谷甾醇及另外2種甾醇的含量均在1 mg/g以下。牡丹花粉含有的2種主要植物甾醇—異巖藻甾醇和Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-在油菜花粉中均有測得，但含量均低于牡丹花粉。

關鍵詞：牡丹花粉;植物甾醇;氣相色譜-質譜;油菜花粉

自我國正式批準植物甾醇、甾醇酯作為新資源食品以來，植物甾醇越來越受到食品和藥品領域的關注。花粉的營養價值受到大眾廣泛認可，植物甾醇作為花粉的主要功能性成分之一，是近年來食品功能性成分研究領域的熱點之一。不同種子來源的花粉，營養成分差異顯著，所含甾醇物質大相徑庭。油菜花粉的甾醇主要為豆甾醇、菜油甾醇、β-谷甾醇、24-亞甲基膽甾醇[1]，而板栗花粉中則為以下5種甾醇：膽固醇、（3β，24R）-麥角甾-5-烯-3-醇、豆甾醇、β-谷甾醇和（3β）-豆甾-5，24（28）-雙烯-3-醇[2]。研究發現，不同的甾醇物質表現出抗氧化、抗癌、促進膽固醇降解代謝等不同的生理功能，差異顯著[3-4]。因此，有必要就尚未研究的植物花粉的甾醇物質進行鑒定，尤其是借助現代檢測手段分析鑒定新的甾醇物質，這不論是對于花粉產品的開發利用，還是對于甾醇在食品和藥品領域的應用都具有重要意義。

牡丹是我國特有的一種觀賞藥用植物，在我國已有2 000多年的藥用歷史，其根、皮、花均可入藥。我國牡丹種植面積近百萬畝，牡丹花朵大，花粉產量多，花粉年產量估計可達數千噸[5]，但牡丹花粉的利用率較低，亟待開發利用。牡丹花粉作為牡丹花雄蕊中的生殖細胞，營養物質和藥用活性成分豐富，具有很高的食藥價值和經濟價值[6-7]。查閱文獻發現，目前尚無研究涉及牡丹花粉的甾醇。

鑒于此，本研究采用氣質技術，對牡丹花粉中的主要甾醇進行物質鑒定，并將其含量與研究和開發利用較多的油菜花粉中的含量進行了比較，以期為牡丹花粉的開發利用提供基礎數據。

1 材料與方法

1.1 材料

牡丹花粉，采自安徽亳州;油菜花粉，網購，產自內蒙古;5α-膽甾烷醇標品 、 BSTFA+TMCS（99∶1 ）硅烷化試劑，均購自Sigma公司（美國）;其余化學試劑均為分析純，國藥化學試劑有限公司。

Trace GC Ultra 氣相色譜儀、ISQ 質譜檢測儀，Thermo 公司（美國）;色譜柱：DB-5 柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），Thermo 公司（美國）;水浴鍋、電子分析天平、漩渦振蕩儀等常見設備。

1.2 方法

樣品前處理：首先，按馮妹元[8]所述方法加入內標5α-膽甾烷醇，加入6 mol/mL的鹽酸-乙醇溶液1.0 mL并于80 ℃加熱1 h酸解;然后，加入 KOH-乙醇溶液，按李志曉[9]所述方法進行衍生化。

甾醇測定：參考李志曉[9]的方法，采用氣相色譜-質譜定性，并以5α-膽甾烷醇為內標定量。花粉中甾醇含量的計算公式如式（1）：

甾醇含量（mg/g）=S×BA×M×1 000（1）式（1）中，S表示加入待測樣品中的內標5α-膽甾烷醇的質量、B表示所測樣品中某甾醇物質的峰面積、A表示內標5α-膽甾烷醇的峰面積、M表示稱取的花粉樣品質量。

2 結果與分析

經解譜后發現共檢出了5種甾醇，其中，出峰時間在15.26 min的異巖藻甾醇含量最高，牡丹花粉中的含量為21.89 mg/g（圖1）。該異巖藻甾醇經硅烷化后的化學結構式、質譜圖見圖2。巖藻甾醇類多來源于藻類，體外實驗證實其具有抗腫瘤、抗氧化作用[10-11]。本研究首次從植物花粉中檢測出了異巖藻甾醇，發現其具有抑制脂肪酶活性的作用，具有潛在減肥功效[12]。樣品中同時測得了2.68 mg/g的新甾醇物質Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-，出峰時間15.06 min，該甾醇經硅烷化后的化學結構式和質譜圖見圖3。另外，樣品中還測得了少量的β-谷甾醇、4-Methylcholesta-8，24-dien-3-ol，（3a，4a，5a）和9，19-cyclolanost-24-en-3-ol，（3a）-，含量均在1 mg/g以下，三者的出峰時間分別為16.22、16.84、17.03min，質譜圖略。

鑒于牡丹花粉的兩種主要甾醇——異巖藻甾醇和Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-，均為首次在植物花粉中測得，為驗證此類物質是否在其他花粉中同樣存在，并評估其含量水平，以研究較多且有較多成熟市售花粉類產品的油菜花粉為代表，分析鑒定其甾醇物質組成，發現這兩種甾醇在油菜花粉中均有測得，異巖藻甾醇和Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-的含量分別為6.47、0.49mg/g。油菜花粉中植物甾醇經BSTFA+TMCS（99∶1）硅烷化的總離子流圖見圖4。

3 結論

牡丹花粉中共檢出了5種甾醇，含量最高的甾醇為異巖藻甾醇，含量為21.89 mg，該甾醇首次在植物花粉中測得;其次，為新甾醇物質Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-，含量為2.68 mg/g;β-谷甾醇及另外兩種甾醇的含量均在1 mg/g以下。牡丹花粉所含有的兩種主要植物甾醇——異巖藻甾醇和Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-在油菜花粉中均有測得，含量分別為6.47、0.49mg/g，均低于牡丹花粉的。

參考文獻

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