HPLC法測(cè)定乳粉及乳制品中酪蛋白磷酸肽含量

曾鳳澤*，姚宇澤

1. 烏蘭察布醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校（烏蘭察布 012000）；2. 烏蘭察布市獸藥監(jiān)察所（烏蘭察布 012000）

酪蛋白磷酸肽（CPP），又名促鈣吸收因子，是以牛乳或酪蛋白制品為原料，用蛋白酶水解、精制、純化而生產(chǎn)制得的，含有1～6個(gè)磷酸絲氨酸殘基的生物活性肽[1-3]，具有促進(jìn)鈣、鐵、鋅等礦物元素吸收、預(yù)防齲齒、提高免疫力、促使惡性細(xì)胞凋亡等作用[4-6]，已被國(guó)家衛(wèi)計(jì)委批準(zhǔn)作為食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 14880允許CPP用于調(diào)制乳、風(fēng)味發(fā)酵乳、糧食和糧食制品、飲料等，使用量≤1.6 g/kg。

國(guó)內(nèi)外關(guān)于CPP的檢測(cè)方法主要有鋇-乙醇沉淀法[7-8]、等電聚焦電泳（IEF）法[9-10]、液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）法[11]、高效液相色譜（HPLC）法[12-16]，這些方法均有局限性，其中鋇-乙醇沉淀法專屬性較差，不可用于直接測(cè)定食品中CPP含量；IEF操作要求高、兩性電解質(zhì)較貴；LC-MS設(shè)備昂貴，檢測(cè)成本高，且CPP無(wú)固定分子量，質(zhì)譜對(duì)其監(jiān)測(cè)難度大；HPLC具有操作方便、檢測(cè)成本低、靈敏度高等特點(diǎn)，被用于CPP產(chǎn)品的含量測(cè)定，而關(guān)于乳及乳制品中CPP含量的測(cè)定較少。試驗(yàn)采用等電點(diǎn)沉淀蛋白，固相萃取柱MCX凈化，以乙腈-0.1%乙酸溶液為流動(dòng)相，經(jīng)ZORBAX SB-C18色譜柱梯度洗脫，采用二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定，建立HPLC法測(cè)定乳粉及乳制品中CPP含量，為食品中CPP的含量測(cè)定提供簡(jiǎn)便、高效的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200型高效液相色譜儀，配備二極管陣列檢測(cè)器（DAD）（美國(guó)Agilent公司）；ME204E型電子分析天平（梅特勒托利多公司）；KQ-250B超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Vortex-genie2型渦旋混合器（美國(guó)Scientific Industries公司）；TTLDC氮吹儀（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）；……