血清CTGF 和PDGF-BB 表達與老年特發性間質性肺炎相關性分析

葉舒婷 趙敏華 李夢遠 張 英

特發性間質性肺炎（idiopathic interstitial pneumonia，IIP）是一組病因不明的進行性下呼吸道疾病，好發于老年人[1]。該病發病機制復雜，診治困難，大部分患者因肺纖維化導致肺動脈高壓、肺源性心臟病，IIP 缺乏特效的治療方法，患者生存時間較短[2-3]。血清學標志物是目前常用的一種非創性診斷方法，既往研究顯示結締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）、血小板衍生生長因子-BB（platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB）與纖維化的發生發展有關[4-5]。本研究檢測老年IIP 患者血清中CTGF 和PDGF-BB 表達水平，并分析二者與IIP 的相關性。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2015 年3 月—2019 年10 月在浙江省臺州市立醫院呼吸內科接受治療的老年IIP 患者99 例作為研究對象。依據不同病理類型分為特發性肺纖維化（IPF）組53 例；除IPF 外的其他類型IIP（nIPF-IIP）組46 例，其中包括非特異性間質性肺炎（NSIP）18 例，隱源性機化性肺炎（COP）17例，呼吸性細支氣管炎伴間質性肺疾病（RB-ILD）11例。另外選擇同期在我院進行老年健康體檢者40 名作為對照組。本研究方案經臺州市立醫院倫理委員會審核通過，符合《赫爾辛基宣言》倫理原則。

1.2 納入標準 （1）均經臨床、影像學等檢查確診為IIP 患者：IPF 診斷標準參照《特發性肺纖維化診斷和治療中國專家共識》[6]，nIPF-IIP 診斷參照美國胸科學會/歐洲呼吸學會官方共識[7]；（2）臨床資料完整；（3）年齡≥60 歲；（4）所有研究對象及家屬均簽署知情同意書。

1.3 排除標準 （1）合并心臟、腎臟等其他器官組織纖維化者；（2）呼吸系統疾病者；（3）合并感染者；（4）免疫系統檢查異常者。

2 方 法

2.1 檢測指標及方法 （1）一般資料：包括性別、年齡、病程、是否吸煙等；（2）標本提取：次日早晨8:00抽取研究對象空腹狀態肘靜脈血5mL，置于離心機中以5000r/min 轉速離心10min（離心半徑為10cm），移取上清液放入2mL 凍存管中，分離血清標記后于-80℃冰箱凍存待測，然后采用SIEMENS ADVIA2400 全自動生化分析儀（德國）檢測總膽固醇（TC）（氧化酶法）、三酰甘油（TG）（甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）（勻相測定法）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）（勻相測定法）、超敏C 反應蛋白（hs-CRP）（免疫散射比濁法）以及同型半胱氨酸（Hcy）（氧化酶法）等生化指標，所有試劑盒均購自寧波美康生物科技有限公司（批號150214、160521、160512、161224、170514、150630）；（3）血清CTGF 和PDGF-BB 測定：于相同條件下采集所有研究對象空腹血液標本，分離血清置-80℃保存待測，采用酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）檢測血清CTGF 和PDGF-BB 表達，定量測定試劑盒購自上海億欣生物科技有限公司（批號150327、150619）。

2.2 統計學方法 應用SPSS 24.0 統計軟件，計量資料以均數±標準差（） 表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗；計數資料采用例數（n）和百分比（%）描述，行χ2檢驗。然后采用ROC 曲線分析血清CTGF、PDGF-BB 表達界限值，采用Logistic 逐步回歸分析老年IIP 肺纖維化的相關影響因素，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 三組研究對象一般資料及生化指標比較 三組研究對象hs-CRP 和Hcy 比較，差異有統計學意義（P＜0.05），IPF 組血清hs-CRP 和Hcy 表達水平明顯高于對照組和nIPF-IIP 組（P＜0.05），nIPF-IIP 組血清hs-CRP 和Hcy 表達水平明顯高于對照組（P＜0.05）；性別、年齡、病程、吸煙、TG、TC、HDL-C、LDLC 等一般資料比較差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。

表1 三組研究對象一般資料及生化指標比較

3.2 三組研究對象血清CTGF 和PDGF-BB 表達水平比較 nIPF-IIP 組血清CTGF 和PDGF-BB 表達水平明顯高于對照組，IPF 組血清CTGF 和PDGFBB 表達水平明顯高于對照組與nIPF-IIP 組（P＜0.05）。見表2。

表2 三組研究對象血清CTGF 和PDGF-BB 表達比較（）

表2 三組研究對象血清CTGF 和PDGF-BB 表達比較（）

注：IPF 組為特發性肺纖維化患者；nIPF-IIP 組為除特發性肺纖維化外的其他類型的特發性間質性肺炎患者；對照組為健康體檢者；CTGF 為結締組織生長因子；PDGF-BB 為血小板衍生生長因子-BB；與對照組比較，aP＜0.05；與nIPF-IIP 組比較，bP＜0.05

3.3 血清CTGF 和PDGF-BB 表達診斷IIP 的ROC曲線分析 由SPSS 24.0 統計軟件作ROC 曲線，并根據約登指數計算出兩組間的敏感度和特異度。結果顯示，血清CTGF 表達對于鑒別IPF 組和nIPF-IIP組以及nIPF-IIP 組和對照組的敏感度和特異度均較高，兩組間界限值分別為14.25ng/mL、5.18ng/mL；血清PDGF-BB 表達鑒別IPF 組和nIPF-IIP 組以及nIPF-IIP 組和對照組的敏感度和特異度均較高，兩組間界限值分別為59.43pg/mL、25.67pg/mL。14.25ng/mL、5.18ng/mL 為血清CTGF 判別IPF 組和nIPF-IIP 組、nIPF -IIP 組和對照組的標準值，59.43pg/mL、25.67pg/mL 為血清PDGF-BB 判別IPF 組和nIPF-IIP 組、nIPF-IIP 組和對照組的標準值。見表3。

3.4 老年特發性間質性肺炎肺纖維化影響因素Logistic 回歸分析 以老年IIP 有無肺纖維化為因變量（否＝0、是＝1），以血清hs-CRP、Hcy、CTGF、PDGF-BB等作為自變量（連續變量形式進入分析）進行二分類Logistic 逐步回歸分析可知，患者血清hs-CRP、Hcy、CTGF、PDGF-BB 升高是老年IIP 患者肺纖維化的危險因素（P＜0.05），見表4。

表3 血清CTGF 和PDGF-BB 表達診斷IIP 的ROC 曲線分析

表4 老年特發性間質性肺炎肺纖維化影響因素Logistic回歸分析

4 討論

IIP 疾病譜病因龐雜、分類混亂，診斷與鑒別診斷復雜，治療非常棘手[8]。多種因素產生的肺損害均可導致肺纖維化的發生（包括毒性物質、自身免疫性疾病、藥物、感染和創傷等），眾多因素所導致的肺部組織病理學表現各不相同，但均有不同程度的炎癥和纖維化[9]。CTGF 是一種在多種纖維增殖性疾病中起關鍵作用的細胞因子，具有促進成纖維細胞增殖以及參與細胞外基質產生、積聚等功能，對肺纖維的分化增殖具有很強的調控作用，在病理狀態下，CTGF 的過度表達與某些增生性或纖維化性疾病的發生密切相關[10-11]。PDGF-BB 是已知最強的促肺纖維化增殖、分化的細胞因子，隨著肺纖維化程度的加重，PDGF 表達逐漸增強，可通過轉化生長因子（TGF-β）介導作用于結締組織，對肺纖維化起維持性作用[12-13]。

本研究發現，IPF 組血清CTGF 和PDGF-BB 表達水平高于對照組和nIPF-IIP 組，且nIPF-IIP 組血清CTGF 和PDGF-BB 表達水平明顯高于對照組；本研究多因素回歸分析也發現，血清CTGF、PDGF-BB升高是老年IIP 患者肺纖維化的危險因素。這表明血清CTGF 和PDGF-BB 表達對肺纖維化的血清學診斷有重要意義。既往研究發現，血清CTGF 啟動子中存在Smads 結合元件，該元件突變后，既可以減少CTGF 的基礎表達，又可消除TGF-β 誘導的CTGF表達[14]。IIP 患者的血清CTGF 可提供肺纖維化發生發展的信息，并反映血清TGF-β 的生物活性[15-17]。說明血清CTGF 和PDGF-BB 在IIP 的發生發展中起到重要作用。本研究ROC 結果顯示，血清CTGF 表達對于鑒別IPF 組和nIPF-IIP 組以及對照組和nIPFIIP 組的敏感度和特異度分別為（82.37%、85.54%，84.25%、85.31%），而血清PDGF-BB 表達鑒別IPF 組和nIPF-IIP 組以及nIPF-IIP 組和對照組的敏感度和特異度分別為（80.56%、87.73%，81.27%、86.52%），由此說明可將CTGF 和PDGF-BB 作為無創評估肺纖維化程度的標記物，聯合檢測CTGF、PDGF-BB 多種肺纖維化相關血清指標有助于提高血清學肺纖維化診斷的靈敏度及特異度，早期診斷與動態監測肺纖維化對于IIP 的治療、改善預后具有重要意義。目前對于CTGF、PDGF-BB 在肺纖維化診斷IIP 中的作用報道不多，有待于我們進一步研究。

綜上所述，血清CTGF 和PDGF-BB 在老年IIP患者中表達升高，二者聯合檢測能提高診斷準確性，同時二者表達升高可以作為預測老年IIP 肺纖維化發生風險的標志物。