整體浸提與分段浸提在無菌檢查中的比較

張桂銘

【摘要】目的 用直接接種法對醫(yī)療器械沖洗管進(jìn)行無菌檢查，比較整體浸提和剪開分段管腔浸提兩種方式對檢測結(jié)果的影響。方法采用ISO 11737-2：2009標(biāo)準(zhǔn)方法，對試驗(yàn)樣品進(jìn)行無菌檢查試驗(yàn)。

【關(guān)鍵詞】管腔醫(yī)療器械? 無菌? 方法? 比較

在科技飛速發(fā)展的今天，輔助治療人類疾病的醫(yī)療器械也層出不窮，醫(yī)學(xué)及生物學(xué)對于醫(yī)療器械尤其是無菌醫(yī)療器械的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)控制也日趨嚴(yán)格，本文就沖洗管，筆者對采用整體浸提和剪開分段管腔浸提兩種方法下的無菌檢查進(jìn)行了比較。

一、材料與試劑

（一）培養(yǎng)基及試劑

氯化鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;批號：20151123），吐溫80（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;批號：20160314），大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基SCDM（青島海博生物技術(shù)有限公司;批號：20180522），胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基TSA（北京陸橋技術(shù)股份有限公司;批號：180820），沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基SDA（北京陸橋技術(shù)股份有限公司;批號：181127）

（二）陽性菌株

金黃色葡萄球菌〔ATCC 6538〕：第5代;枯草芽孢桿菌〔ATCC 6633〕：第5代;白色念珠菌〔ATCC 10 231〕：第5代;黑曲霉〔ATCC 16 404〕：第5代;來源自美國菌種保藏中心。

（三）試驗(yàn)樣品

某公司生產(chǎn)的沖洗管（同一批號;規(guī)格：4米;滅菌方式：環(huán)氧乙烷）。

（四）其他材料

電子天平JM-A2003（余姚紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司）;潔凈工作臺SW-CJ-2F（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）;生物安全柜BHC-1300IIA2（阿爾泰實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）;生化培養(yǎng)箱SHP-150（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;生化培養(yǎng)箱SHP-450（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;立式壓力蒸汽滅菌器YXQ-LS-100SII（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）;移液器（Thermo Scientific，100-1000 ml，20-200 ml，10-100 ml）;滅菌吸頭（250、1000ml）;WHIRL-PAKR SAMPLE BAGS（B01447）。

二、方法與結(jié)果

（一）無菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證

（1）標(biāo)準(zhǔn)菌株準(zhǔn)備：取枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉傳代培養(yǎng)，制成小于100cfu/ml的菌懸液備用，用標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)（cfu）;

（2）試驗(yàn)樣品組：以無菌操作將試驗(yàn)樣品（SIP=1）轉(zhuǎn)移到1000ml SCDM培養(yǎng)基中，接種標(biāo)準(zhǔn)菌株≤100cfu;試驗(yàn)樣品接種方式分為兩種：整件浸提和剪開分段浸提。

（3）陽性對照：取滅菌1000ml SCDM接種標(biāo)準(zhǔn)菌株≤100cfu;

（4）陰性對照：取滅菌產(chǎn)品（SIP=1） 以無菌操作轉(zhuǎn)移到1000ml SCDM培養(yǎng)基中;

（5）空白對照：取滅菌1000ml SCDM直接培養(yǎng);

（6）培養(yǎng)條件：30±2℃培養(yǎng)≤5天;結(jié)果可接受標(biāo)準(zhǔn)：試驗(yàn)樣品組可見微生物生長;陰性對照和空白對照無菌生長;陽性對照可見微生物生長;

（7）試驗(yàn)結(jié)果：陰性對照和空白對照無菌生長;陽性對照可見微生物生長;兩種浸提方式下的試驗(yàn)樣品組在規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)均可見微生物生長。在本試驗(yàn)條件下，整件浸提和剪開分段浸提的試驗(yàn)樣品中均未檢出影響微生物生長的釋出物，該試驗(yàn)方法（整體浸提和剪開分段浸提）可以作為試驗(yàn)樣品的常規(guī)無菌檢測方法。

（二）無菌檢查

（1）試驗(yàn)樣品：無菌操作將試驗(yàn)樣品沖洗管（SIP=1）轉(zhuǎn)移至1000ml SCDM培養(yǎng)基中，30±2℃培養(yǎng)14天;試驗(yàn)樣品接種方式分為兩種：整件浸提和剪開分段浸提。

（2）陰性對照：1000ml SCDM培養(yǎng)基同2.2.1培養(yǎng);

（3）陽性對照：無菌操作在含有1件樣品（SIP=1）的SCDM里加金黃色葡萄球菌〔ATCC 6538〕≤100cfu，30±2℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)≤3天;

（4）每天觀察是否有菌生長;

（5）結(jié)果：在本試驗(yàn)條件下，陰性對照無菌生長，陽性對照在規(guī)定時(shí)間內(nèi)有菌生長;整體浸提（SIP=1）的10件樣品中發(fā)現(xiàn)有2件陽性，剪開分段浸提（SIP=1）的10件樣品中發(fā)現(xiàn)有10件陽性。

三、討論

通過兩種方式（整體浸提和剪開分段浸提）對樣品進(jìn)行無菌檢查的結(jié)果，我們可以看出剪開分段浸提的直接接種法無菌檢查試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的陽性樣品明顯多于整體浸提的;我們已知用于檢測的試驗(yàn)樣品是同一批號，且抽樣隨機(jī)，即用于兩種方式檢查的樣品應(yīng)出現(xiàn)類似數(shù)量的陽性結(jié)果，于是我們比較了兩種浸提接種方式的區(qū)別。由于樣品沖洗管規(guī)格有4米長，在整體浸提無菌檢查時(shí)，其在無菌取樣袋中是繞成7-8圈的狀態(tài)，培養(yǎng)基不能浸入沖洗管的全部內(nèi)腔，即有一部份內(nèi)腔并沒有與培養(yǎng)基接觸，假如這些內(nèi)腔有微生物，那就不能被檢測出來;而剪開分段浸提的方式利用無菌剪刀無菌操作將4米長的沖洗管剪成了20cm左右的片段，每一段管的內(nèi)腔都更容易被培養(yǎng)基浸沒，實(shí)驗(yàn)中此方式下的沖洗管樣品的表面和內(nèi)腔均被培養(yǎng)基完全浸沒。相較于整體浸提，剪開分段浸提對沖洗管的可能存在微生物的檢出更全面，換言之，對沖洗管用整體浸提進(jìn)行無菌檢查有假陰性的風(fēng)險(xiǎn)。

另一方面，從醫(yī)療器械的滅菌方式角度分析，沖洗管類的醫(yī)療器械一般采用環(huán)氧乙烷滅菌，已知環(huán)氧乙烷滅菌程序包括預(yù)熱、預(yù)濕、抽真空、通入汽化環(huán)氧乙烷達(dá)到預(yù)定濃度、維持滅菌時(shí)間、消除滅菌柜內(nèi)環(huán)氧乙烷氣體、解析;就滅菌效果而言，越是有管腔的非實(shí)體醫(yī)療器械就越難達(dá)到符合要求的滅菌效果，因?yàn)閷τ趯⑵餍道@成7-8圈進(jìn)行包裝的沖洗管樣品，其內(nèi)腔比表面更難與環(huán)氧乙烷密切接觸，從而達(dá)到滅菌的效果，即在無菌屏障系統(tǒng)符合要求下，此類器械的內(nèi)腔中有存活微生物的概率比其表面存在微生物的概率要大。

因此對于管腔類的醫(yī)療器械，尤其是含有較長管腔類的醫(yī)療器械，我們在做無菌檢查時(shí)，需無菌操作用剪開分段等方法使醫(yī)療器械的內(nèi)管腔內(nèi)都能浸入培養(yǎng)基，這樣才能更全面的檢測出試驗(yàn)樣品表面和管腔中可能存在的微生物，避免假陰性的出現(xiàn)，減少醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)：

[1]Sterilization of Medical Devices - Microbiological Methods - Part 2： Tests of Sterility Performed in the Definition， Validation and Maintenance of a Sterilization Process （ISO 11737-2：2009）.

[2]醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法 （GB/T 14233.2-2005）.