深圳市羅湖區呼吸道感染患兒外周血淋巴細胞亞群分析*

王甩艷，楊穎蘭，黃 濤，張秀明，林喜榮，莫紅梅△

1.廣東省深圳市羅湖區人民醫院醫學檢驗科，廣東深圳 518001；2.嘉應學院醫學院基礎部，廣東梅州 514031；3.廣東省深圳市兒童醫院檢驗科，廣東深圳 518026

感染性疾病是兒童發病率最高的一類疾病，而其中又以呼吸道感染發病率最高[1]。呼吸道感染是因為細菌或者病毒等侵襲呼吸道所導致的炎性反應[2]。呼吸道感染常給患兒的生長發育帶來一定影響,大部分患兒病程短(7～10 d)、預后好,但仍有少數患兒病程較長,其原因除了反復接觸感染源、用藥不規范外，還主要與患兒自身的免疫功能低下有關[3]。淋巴細胞在兒童抗感染免疫中發揮著重要作用。淋巴細胞亞群是判斷機體細胞免疫和體液免疫水平的重要指標，其能反映機體當前的免疫狀態、功能及平衡情況，應用流式細胞術分析外周血淋巴細胞亞群表型已成為診斷免疫疾病、血液疾病以及監測免疫水平的重要手段之一[4]。小兒呼吸道感染可由多種病原體引起[5]，不同類型病原體感染后機體的免疫功能變化情況有差異[6]，因此需要不同的治療方法。不同類型病原體引起呼吸道感染的早期臨床表現多樣，且無特異性，在一定程度上會影響臨床對癥治療，因此，及早明確引起呼吸道感染的病原體類型及機體免疫狀況，并予以對癥治療，是提高臨床療效、改善預后的關鍵[7]。研究顯示，人體淋巴細胞亞群分布存在地域、種族和性別差異[8-9]。外周血 T淋巴細胞、B淋巴細胞、自然殺傷(NK)細胞計數和百分比會隨兒童的年齡增長而發生相應的變化，同時還受環境、發育和疾病等因素的影響[4]。因此，本文針對性地分析了深圳市羅湖區人民醫院收治的呼吸道感染患兒的淋巴細胞亞群檢測結果，并進一步探討其輔助診斷價值，以期為患兒呼吸道感染的診療提供理論依據和數據支持。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年9月至2020年8月深圳市羅湖區人民醫院收治的呼吸道感染患兒共736例，將已明確病原學診斷的423例患兒作為感染組，其中男209例，女214例；年齡26 d至13歲，平均(3.58±1.95)歲；根據呼吸道感染疾病類型又將感染組患兒分為上呼吸道感染組93例，支氣管肺炎組286例，支氣管炎組44例；根據病原學診斷結果對感染組患兒進行篩選，排除混合感染的患兒后將剩余患兒分為細菌組58例，支原體組166例和病毒組92例。另選取同期20例體檢健康兒童作為對照組，其中男10例、女10例，年齡(5.94±1.31)歲。感染組與對照組年齡、性別等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2儀器與試劑 深圳邁瑞公司生產的BriCyte E6流式細胞儀及配套的鞘液和溶血素(使用前用蒸餾水進行 10倍稀釋，即溶血素∶蒸餾水=1∶9)；CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑；CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色試劑。

1.3方法 將人外周血標本與CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC和CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色試劑避光孵育反應，熒光素偶聯抗體與白細胞表面特異性抗原結合，采用溶血免洗的方法處理反應標本，最后將處理后的標本在流式細胞儀上進行檢測。由于不同類型細胞結合不同種類和數量的熒光素，標本液通過流動室時在激光照射下會被激發出不同發射波長的熒光，流式細胞儀對細胞的前向角散射光(FSC)、側向角散射光(SSC)和熒光信號進行收集，并根據標本細胞檢測的FSC、SSC和熒光強度等參數信息，對淋巴細胞中T淋巴細胞亞群(CD3+)、輔助/誘導T淋巴細胞亞群(CD3+CD4+)、抑制/細胞毒性T淋巴細胞亞群(CD3+CD8+)、B淋巴細胞(CD3-CD19+)和NK細胞(CD3-CD16+CD56+)進行分類。

2 結 果

2.1呼吸道感染患兒的年齡分布情況 在736例呼吸道感染患兒中，新生兒期(自胎兒娩出臍帶結扎時起至出生后28 d)2例，嬰兒期(從出生后到滿1歲之前)181例(此處除外2例新生兒期患兒)，幼兒期(1歲后到滿3歲之前)230例，學齡前期(3歲后到6～7歲入小學前)269例，學齡期[從6～7歲入小學起到青春期(女12歲，男13歲)]54例。新生兒期患兒數量最少，嬰兒期、幼兒期、學齡前期患兒數量逐漸增加，各階段中以學齡前期患兒數量最多，到學齡期患兒數量又有所減少，見圖1。

圖1 呼吸道感染患兒的年齡分布情況

2.2不同季節呼吸道感染患兒的分布情況 在736例呼吸道感染患兒中，春季就診的有13例，夏季就診的有154例，秋季就診的有362例，冬季就診的有207例。秋季就診的患兒最多，其次依次為冬季、夏季，春季最少，見圖2。

圖2 不同季節呼吸道感染患兒的分布情況

2.3感染組與對照組外周血淋巴細胞亞群水平比較 感染組CD3+CD4+、CD3-CD19+、CD3+CD4+/CD3+CD8+水平均高于對照組，CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+水平均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 感染組與對照組外周血淋巴細胞亞群水平比較

2.4不同呼吸道感染疾病組與對照組外周血淋巴細胞亞群水平比較 上呼吸道感染組、支氣管肺炎組、支氣管炎組CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+水平低于對照組，CD3-CD19+、CD3+CD4+/CD3+CD8+水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；支氣管肺炎組、支氣管炎組CD3+CD4+水平高于對照組與上呼吸道感染組，CD3-CD16+CD56+水平低于上呼吸道感染組，CD3+水平高于上呼吸道感染組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同呼吸道感染疾病組與對照組外周血淋巴細胞亞群水平比較

2.5不同病原體感染組與對照組外周血淋巴細胞亞群水平比較 細菌組、支原體組、病毒組CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+水平低于對照組，CD3-CD19+、CD3+CD4+/CD3+CD8+水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。支原體組、病毒組CD3+CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+水平低于細菌組，CD3+CD8+水平高于細菌組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同病原體感染組與對照組外周血淋巴細胞亞群水平比較

3 討 論

作為兒童常見病、多發病，呼吸道感染具有發病速度快、感染性強、易引起地區流行等特點[10]。機體內各類免疫細胞的比例偏離正常值常常提示機體免疫功能發生變化，而機體的細胞免疫功能又與許多疾病(特別是感染性疾病、腫瘤及自身免疫性疾病)的發生、發展和預后密切相關[11]。淋巴細胞及其亞群的水平變化能反映機體不同情況下免疫功能的變化。

從患兒的年齡分布情況來看，新生兒期發生呼吸道感染的患兒數量最少，而嬰兒期、幼兒期到學齡前期患兒數量逐漸增加，學齡期患兒數量大幅減少。分析原因如下：新生兒與外界接觸較少，避免了病原體的交叉感染；嬰兒出生后幾個月體內有較高水平的來自母乳的免疫活性細胞和免疫球蛋白，具有一定的免疫力；幼兒期兒童的呼吸道發育不完全，而其本身正處于活潑好動的階段，容易接觸到各種病原體，同時清除病原體的能力較差，因此易患呼吸道感染；學齡前期的兒童由于本身抵抗力較弱，與其他兒童接觸密切，極易相互傳播病原體，產生交叉感染；而學齡期兒童呼吸系統已逐漸發育成熟，且免疫力有所增強，故其患呼吸道感染的風險有所下降。

本研究進一步分析了不同季節呼吸道感染患兒的分布情況，結果顯示，該地區秋季就診患兒的數量最高，提示秋季是呼吸道感染的高發期，春季就診患兒數量最低。分析原因如下：秋季氣候干燥且氣溫變化大，兒童的體溫調節中樞和呼吸系統發育尚未完善，極易在該季節受到各種病原體的感染。本研究發現，感染組CD3+CD4+、CD3-CD19+及 CD3+CD4+/CD3+CD8+水平明顯高于對照組，CD3+CD8+和CD3-CD16+CD56+水平明顯低于對照組，表明呼吸道感染患兒的淋巴細胞亞群與健康兒童之間存在一定差異，呼吸道感染患兒淋巴細胞亞群失衡，免疫功能紊亂。進一步比較不同呼吸道感染疾病組與對照組的淋巴細胞亞群水平，結果顯示：上呼吸道感染組、支氣管肺炎組、支氣管炎組CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD3-CD19+、CD3+CD4+/CD3+CD8+水平與對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；支氣管肺炎組、支氣管炎組CD3+CD4+水平高于對照組與上呼吸道感染組，CD3-CD16+CD56+水平低于上呼吸道感染組，CD3+水平高于上呼吸道感染組，差異有統計學意義(P<0.05)。上述結果表明不同呼吸道感染疾病患兒的免疫功能改變也有所區別，盡管支氣管肺炎、支氣管炎、上呼吸道感染同屬于呼吸道感染性疾病，但病原體感染后主要攻擊的免疫細胞各不相同，機體的免疫應答途徑也各不相同，故淋巴細胞亞群的檢測結果也存在差異。有研究表明，支氣管肺炎患兒存在細胞免疫功能降低及紊亂，體液免疫功能亢進[12]，與本研究結果類似。

本研究根據病原學診斷結果對感染組患兒進行篩選，排除混合感染的患兒，檢出細菌感染58例，支原體感染166例和病毒感染92例，提示該地區兒童呼吸道單一病原體感染以支原體感染為主，其次是病毒感染，而細菌感染占比相對較低。有研究表明，兒童呼吸道單一病原體感染以病毒感染占比最高，而支原體、衣原體感染相對較低[13]，與本研究結果存在一定差異，考慮可能與地域性差異有關。進一步比較不同病原體感染組與對照組的淋巴細胞亞群水平，結果顯示，細菌組、支原體組、病毒組CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+水平低于對照組，CD3-CD19+、CD3+CD4+/CD3+CD8+水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，提示不同病原體感染患兒與健康兒童的免疫功能存在一定差異。此外，支原體組、病毒組CD3+CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+水平低于細菌組，CD3+CD8+水平高于細菌組，差異有統計學意義(P<0.05)，提示不同病原體感染患兒的免疫功能也存在一定差異，病毒感染患兒CD3+CD4+和 CD3+CD4+/CD3+CD8+水平相對較低，CD3+CD8+水平相對較高，這與LI等[14]研究發現的病毒性肺炎患兒淋巴細胞亞群的變化特點相符。體液免疫通過產生特異性抗體分解破壞病原體，細胞免疫則可直接通過NK細胞等非特異性細胞直接吞噬入侵體內的病原體，而上述不同的免疫應答途徑會使淋巴細胞亞群水平出現不同的變化[15]。

深圳市羅湖區兒童呼吸道感染的高發年齡段是學齡前期，高發季節是秋季。呼吸道感染患兒(已明確病原學診斷)與健康兒童的淋巴細胞亞群水平存在明顯差異，不同呼吸道感染疾病及不同病原體感染患兒的外周血淋巴細胞亞群水平也存在差異。