HPLC法測(cè)定含乳飲料中的三聚氰胺

張淑芳 崔婷婷

摘 要：目的：利用高效液相色譜法測(cè)定含乳飲料中三聚氰胺非法添加劑的含量。方法：利用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器（Variable Wavelength Ultraviolet Detector，VWD），設(shè)置進(jìn)樣量20 μL、流速1.0 mL/ min、檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm，以離子對(duì)試劑緩沖液-乙腈（90∶10，V/V）為流動(dòng)相，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。結(jié)果：三聚氰胺非法添加劑可以得到很好的分離，在1.0～20.0 μg/mL具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99，加標(biāo)回收率為87.974%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)中高效液相色譜法檢測(cè)含乳飲料中三聚氰胺非法添加劑，結(jié)果重復(fù)性好，簡(jiǎn)單方便，適用于食品中含乳飲料的三聚氰胺非法添加劑的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜;三聚氰胺;含乳飲料

Determination of Melamine in Milk Beverage by HPLC

ZHANG Shufang1， CUI Tingting2*

（1.Ulanqab Product Quality Measurement， Inspection and Testing Center， Ulanqab 012000， China; 2.Ulanqab Inspection and Testing Center， Ulanqab 012000， China）

Abstract： Objective： To determine the content of melamine illegal additive in milk beverage by HPLC. Method： Agilent ZORBAX SB-C18 column （250 mm × 4.6 mm，5 μm） variable wavelength ultraviolet detector was used. The injection volume was 20 μL， the flow rate was 1.0 mL/min， the detection wavelength was 240 nm， and the ion-pairing reagent buffer-acetonitrile （90∶10， V/V） was used as the mobile phase， and the quantitative analysis was carried out by the external standard method. Result： The illegal additives of melamine could be well separated， with a good linear relationship between 1.0 and 20.0 μg/mL， the correlation coefficients R2 were all greater than 0.99， the standard addition recovery was 87.974%， and the relative standard deviation was less than 10%. Conclusion： In this experiment， high performance liquid chromatography was used to detect illegal melamine additives in milk-containing beverages. The results were reproducible， simple and convenient， and it was suitable for the determination of melamine illegal additives in milk-containing beverages in food.

Keywords： high performance liquid chromatography; melamine; milk beverage

三聚氰胺（Melamine）是一種白色粉末狀物質(zhì)，是一種化工原料，用于制造三聚氰胺樹(shù)脂，嚴(yán)禁人為添加到食品中[1]。三聚氰胺雖有低毒性，但同時(shí)攝入三聚氰胺和三聚氰酸會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的腎毒性[2-3]。在傳統(tǒng)的檢驗(yàn)檢測(cè)方法中，主要采用凱氏定氮法對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行含氮量的測(cè)定，最終確定蛋白質(zhì)的含量。這種檢驗(yàn)檢測(cè)方法只能測(cè)得含氮量的多少，忽略了氮的來(lái)源和種類，一些不法商家添加三聚氰胺，從而提高含氮量，造成食品中蛋白質(zhì)含量高的假象。此類不合格食品被人食用后嚴(yán)重影響人體健康，在社會(huì)上也造成了惡劣影響[4]。本實(shí)驗(yàn)中，利用高效液相色譜儀檢測(cè)三聚氰胺的含量，為保障食品安全提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

6種含乳飲料樣品隨機(jī)市購(gòu);三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度為99.5%，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司）;甲醇（色譜純，天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開(kāi)發(fā)有限公司）;乙腈（色譜純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司）;檸檬酸（河北省保定化學(xué)試劑廠）;辛烷磺酸鈉（色譜純，天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開(kāi)發(fā)有限公司）;試驗(yàn)用水為自制超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1260高效液相色譜儀系統(tǒng)，配有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器（Variable Wavelength Ultraviolet Detector，VWD）;電子分析天平（賽多利斯）;超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;進(jìn)樣量：20μL;流速1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm;離子對(duì)試劑緩沖液-乙腈（90∶10，V/V）為流動(dòng)相。

1.3.2 樣品處理

按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法》（GB/T 22388—2008）第一法處理樣品[5]。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶液稀釋，得到

1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL及20.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍

利用上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以峰面積y為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)x繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為y=61.304 179 9x-36.316 309、相關(guān)系數(shù)為0.999 89、線性范圍為1.0～20.0 μg/mL。三聚氰胺的相關(guān)系數(shù)R2大于0.99，具有良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度試驗(yàn)

取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，各進(jìn)樣6次，計(jì)算精密度，見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、

5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.15%、8.87%、4.04%、2.56%及2.53%，均小于10%，實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好，精密度符合要求。

2.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

取空白樣品，加入已知濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)3次，結(jié)果如表2。由表2可知，三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均回收率為87.974%，準(zhǔn)確度好。

2.4 部分市售樣品檢測(cè)

如圖2所示，三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間為20.963 min。隨機(jī)選取部分市售含乳飲料樣品6種，按照上述的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。圖3是該6種市售含乳飲料樣品其中一種三聚氰胺色譜圖，在20.963 min時(shí)，沒(méi)有任何峰出現(xiàn)，說(shuō)明該樣品不含三聚氰胺。其他5個(gè)樣品圖和圖3相似，都沒(méi)有在20.963 min出現(xiàn)峰。結(jié)果表明，這6種含乳飲料樣品均沒(méi)有非法添加劑三聚氰胺檢出，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。該方法簡(jiǎn)單方便，可以用于含乳飲料中非法添加劑三聚氰胺的檢測(cè)。

3 結(jié)論

本文利用高效液相色譜法檢測(cè)含乳飲料中非法添加劑三聚氰胺，該方法簡(jiǎn)單方便，重復(fù)性與準(zhǔn)確度好，方便實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)含乳飲料中非法添加劑三聚氰胺。

參考文獻(xiàn)

[1]王吉河，李卿沛.高效液相色譜法測(cè)定牛奶中三聚氰胺含量的不確定度評(píng)定[J].農(nóng)業(yè)科技與信息，2019（20）：56-58.

[2]林曉珊，吳惠勤，黃曉蘭，等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定乳制品中三聚氰胺及其3種類似物[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2014，35（6）：537-543.

[3]栗建輝，趙真，李玉蘭，等.三聚氰胺及其同系物三聚氰酸毒性的研究概況[J].臨床薈萃，2011，26（5）：457-460.

[4]朱曉晨.高效液相色譜法在乳制品三聚氰胺含量檢測(cè)中的應(yīng)用淺析[J].山東工業(yè)技術(shù)，2015（9）：270-271.

[5]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法：GB/T 22388—2008[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.