VEGF、c-Met在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系

田悅　蘇群英　朱曉瑩　黃云美　黃炳臣

【摘要】目的研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、間質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子（c-Met）蛋白在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)及其與患者臨床病理特征的關(guān)系及表達(dá)的相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)195例人結(jié)直腸腺癌組織中VEGF和c-Met的蛋白表達(dá)，分析兩者與臨床病理特征的關(guān)系及兩者表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果VEGF和c-Met在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)率分別為57.4%和64.6%;VEGF和c-Met蛋白表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組較陰性組明顯增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)（P>0.05）;VEGF和c-Met兩者蛋白表達(dá)有顯著相關(guān)性（C=0.204，P<0.01）。結(jié)論結(jié)直腸腺癌中VEGF和c-Met的高表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮了重要的作用。兩者蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，提示兩者之間有協(xié)同作用，VEGF及c-Met可作為判斷結(jié)直腸腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸腺癌;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體;間質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

中圖分類號(hào)：R735文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.05.004

Expression of VEGF and c-Met in colorectal adenocarcinoma and their

correlation with clinicopathological characteristics of patients

TIAN Yue SU Qunying ZHU Xiaoying HUANG Yunmei HUANG Bingchen

（1.Department of Pathology， Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities，

2.Key Laboratory of Molecular Pathology 〔Hepatobiliary Diseases〕 of Guangxi， 3.Graduate School，

Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， Guangxi， China）

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） and c-Mesenchymal-epithelial transition factor （c-Met） protein in colorectal adenocarcinoma and their relationship with patient clinicopathological features and expression. Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expressions of VEGF and c-Met in 195 cases of colorectal adenocarcinoma， and the relationship between VEGF and c-Met and clinicopathological features and the correlation between their expressions were analyzed. ResultsThe positive expression rates of VEGF and c-Met in colorectal adenocarcinoma were 57.4% and 64.6%， respectively. Protein expressions of VEGF and c-Met in lymph node metastasis positive group were significantly higher than those in lymph node metastasis negative group， and difference was statistically significant（P<0.01）， while they were not correlated with gender， age， tumor location， tumor size， degree of differentiation and depth of invasion （P>0.05）. There was significant correlation between the protein expressions of VEGF and c-Met（C=0.204， P<0.01）. ConclusionHigh expressions of VEGF and c-Met in colorectal adenocarcinoma may play an important role in lymph node metastasis. Positive correlation of VEGF and c-Met protein expressions in colorectal adenocarcinoma suggests a synergistic effect between them， and VEGF and c-Met can be used as indicators to judge the biological behaviors of colorectal adenocarcinoma.124698E7-26CF-40DB-9D52-26B87174CA0F

【Key words】colorectal adenocarcinoma; VEGF; hepatocyte growth factor receptor; c-Met; lymph node metastasis

結(jié)直腸腺癌是發(fā)病率正在較快增長(zhǎng)的常見(jiàn)癌癥，老年患者逐年增多。多數(shù)患者診斷時(shí)就已經(jīng)是中晚期，侵襲轉(zhuǎn)移是患者治療失敗和死亡的主要因素。目前已知許多因子會(huì)促使腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、增強(qiáng)轉(zhuǎn)移能力，包括腫瘤自分泌的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子等可影響腫瘤細(xì)胞表面受體的分布，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)過(guò)程中細(xì)胞與細(xì)胞之間、細(xì)胞和基質(zhì)之間的結(jié)合，并啟動(dòng)和維持腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)及定向遷移。我們采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和間質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子（c-Met）在結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)，探討其與患者臨床病理特征的關(guān)系及表達(dá)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本收集 收集右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2016年2月～2020年12月195例手術(shù)切除結(jié)直腸腺癌石蠟包埋癌組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）結(jié)直腸腺癌的病理切片由兩名副主任醫(yī)師以上的病理醫(yī)師確認(rèn);（2）具有患者完整的臨床病理資料;（3）手術(shù)前未進(jìn)行放療、化療或免疫治療;（4）組織病理樣本可用;（5）獲得患者的知情同意，并獲得相關(guān)倫理審批與同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）未經(jīng)病理確診患者;（2）臨床病理資料欠缺;（3）手術(shù)前做過(guò)放療、化療或者免疫治療的患者;（4）腫瘤細(xì)胞過(guò)少的樣本;（5）不愿參加者或者未獲得相關(guān)倫理委員會(huì)審批同意者。

1.2 臨床資料的收集根據(jù)上述研究對(duì)象的納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，收集2016年2月～2020年12月右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院符合標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)直腸癌病例195例。其中男性124例，女性71例;年齡24～85歲，平均年齡50.6歲，其中年齡≥50歲138例、<50歲57例;結(jié)腸部位106例、直腸部位89例;腫瘤直徑≥5 cm 96例、<5 cm 99例;中高分化腺癌組156例、低分化腺癌和黏液腺癌為低分化組共39例;浸潤(rùn)深度T1+T2共80例、T3+T4共115例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移89例、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移106例。

1.3 試劑和方法鼠抗人VEGF單克隆抗體、兔抗人c-Met單克隆抗體、SP即用型免疫組化試劑盒及DAB顯色劑均購(gòu)自北京中杉金橋公司。染色步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，4 μm厚組織切片常規(guī)脫蠟、梯度乙醇入水。在EDTA抗原修復(fù)液中95℃～99℃抗原修復(fù)20 min，室溫冷卻10 min。除去切片組織外的水分，在離組織3 mm處用免疫組化油筆畫(huà)圈，PBS緩沖液清洗2×3分鐘，分別滴加VEGF和c-Met抗體并置于4℃冰箱過(guò)夜。第二天，應(yīng)用SP檢測(cè)和DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，樹(shù)膠封片。以PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性的肺腺癌組織作陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定VEGF染色陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，c-Met陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，以黃色、棕黃色、棕褐色為陽(yáng)性著色，染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為綜合陽(yáng)性細(xì)胞比率及陽(yáng)性強(qiáng)度進(jìn)行半定量評(píng)分，染色強(qiáng)度：無(wú)著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分;按顯色細(xì)胞比例進(jìn)行評(píng)分：0～10%為1分，11%～50%為2分，>50%為3分。兩項(xiàng)相乘0～3分為陰性病例，4～9分為陽(yáng)性病例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS 24.0軟件包處理數(shù)據(jù)。VEGF和c-Met在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征的差異用χ²檢驗(yàn)，VEGF和c-Met在結(jié)直腸腺癌中表達(dá)的相關(guān)性用列聯(lián)系數(shù)相關(guān)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 VEGF和c-Met表達(dá)與結(jié)直腸腺癌臨床病理特征的關(guān)系VEGF染色陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)、c-Met陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、棕褐色。在195例結(jié)直腸腺癌中VEGF和c-Met的表達(dá)率分別為57.4%（112/195）和64.6%（126/195）。其中VEGF和c-Met表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（χ²=8.257，P<0.05;χ²=14.108，P<0.01），而與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)（P>0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 VEGF和c-Met在結(jié)直腸腺癌中表達(dá)的相關(guān)性195例結(jié)直腸腺癌組織中VEGF和c-Met均為陽(yáng)性表達(dá)82例、均為陰性39例，VEGF陽(yáng)性而c-Met陰性30例、c-Met陽(yáng)性而VEGF陰性44例，VEGF和c-Met的表達(dá)有相關(guān)性（C=0.204， P=0.004）。見(jiàn)表2。

3 討論

侵襲轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征，其生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移有賴于腫瘤血管的形成。多數(shù)腫瘤細(xì)胞可合成分泌VEGF，并影響腫瘤生長(zhǎng)、侵襲轉(zhuǎn)移等病理過(guò)程。研究證實(shí)VEGF在前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肺腺癌等惡性腫瘤中高表達(dá)，且隨著表達(dá)強(qiáng)度增高與腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后不良呈正相關(guān)[1～3]。臧志意等[4]通過(guò)檢測(cè)肺腺癌組織中VEGF的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，VEGF的表達(dá)強(qiáng)度與更大的腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及更晚的TNM分期呈正相關(guān)。不同的研究也發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移灶數(shù)量多的乳腺癌、前列腺癌中VEGF表達(dá)強(qiáng)度明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移灶少的病例[5～6]。說(shuō)明VEGF的高表達(dá)或過(guò)表達(dá)促進(jìn)惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，而腫瘤中新生小血管結(jié)構(gòu)的不完整和高通透性以及血管網(wǎng)的增加是促進(jìn)腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)。我們的研究也發(fā)現(xiàn)VEGF在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤發(fā)生部位、組織分級(jí)分化、浸潤(rùn)深度及腫瘤直徑等臨床病理參數(shù)無(wú)關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中VEGF蛋白表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，表明結(jié)直腸腺癌中VEGF表達(dá)上調(diào)參與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。張彬等人[7]采用免疫組化和酶聯(lián)免疫法分別檢測(cè)136例宮頸癌患者癌組織和血清中VEGF表達(dá)和Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析，結(jié)果表明VEGF表達(dá)上調(diào)是宮頸癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)直腸腺癌中VEGF蛋白表達(dá)可能是預(yù)測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后的較好指標(biāo)。124698E7-26CF-40DB-9D52-26B87174CA0F

腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和趨化性是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的重要生物學(xué)基礎(chǔ)，腫瘤細(xì)胞的遷移能力受腫瘤自身分泌的眾多運(yùn)動(dòng)因子影響，其中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）也參與細(xì)胞遷移的調(diào)控。HGF/c-Met途徑主要通過(guò)干擾其他基因的表達(dá)水平來(lái)影響腫瘤的微環(huán)境，王瑞等人[8]將c-Met基因質(zhì)粒注射到小鼠肝臟后發(fā)現(xiàn)，c-Met可促進(jìn)AKT/mTOR信號(hào)通路的激活而誘發(fā)肝癌。目前發(fā)現(xiàn)胃癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌、宮頸癌等[9～11]都可檢出c-Met蛋白的表達(dá)，在乳腺癌、結(jié)直腸癌中也觀察到c-Met的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。其機(jī)制可能是c-Met與HGF特異結(jié)合導(dǎo)致磷脂肽肌醇-3激酶（P13K）磷酸化，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞VEGF的分泌、表達(dá)和促進(jìn)腫瘤血管的生成;HGF/c-Met可激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路使β-連環(huán)蛋白的酪氨酸殘基磷酸化，不能與E-鈣黏蛋白結(jié)合形成功能復(fù)合體，降低細(xì)胞黏附。此外，HGF/c-Met途徑尚可誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）的分泌、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解等機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[12]。本組免疫組化結(jié)果分析顯示，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸腺癌組c-Met表達(dá)率為78.6%，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的52.8%，提示c-Met參與結(jié)直腸腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程，高表達(dá)或過(guò)表達(dá)提示結(jié)直腸腺癌患者易于發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移并影響患者的預(yù)后。李雄峰等[13]分析c-Met在肺腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系發(fā)現(xiàn)，肺腺癌組織中c-Met高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)、臨床分期有關(guān)，高表達(dá)的c-Met提示患者預(yù)后不佳，是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素。上述研究結(jié)果均提示c-Met有可能成為預(yù)測(cè)結(jié)直腸腺癌預(yù)后的一個(gè)重要生物學(xué)標(biāo)志物。

在本實(shí)驗(yàn)中，我們對(duì)每例患者均用同一腫瘤蠟塊組織連續(xù)切片進(jìn)行VEGF和c-Met免疫組化染色，以降低腫瘤不同區(qū)域如不同分化程度等異質(zhì)性對(duì)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，VEGF和c-Met在結(jié)直腸腺癌中有較高的表達(dá)，在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸腺癌病例中，VEGF和c-Met兩者的表達(dá)率均較高，與非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示VEGF和c-Met在結(jié)直腸腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，VEGF和c-Met高表達(dá)或過(guò)表達(dá)促進(jìn)腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在本組免疫組化結(jié)果觀察中VEGF、c-Met同時(shí)陽(yáng)性和同時(shí)陰性的病例較多，相關(guān)分析顯示，結(jié)直腸腺癌中VEGF和c-Met的表達(dá)具有顯著相關(guān)性，提示兩者在結(jié)直腸腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移機(jī)制中存在協(xié)同作用，VEGF及c-Met可作為判斷結(jié)直腸腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。參考文獻(xiàn)[1] 李本根，梁天才，李曉光.miR-409-3p通過(guò)抑制LHX2調(diào)控VEGF/VEGFR2信號(hào)通路促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2021，29（21）：3731-3736.

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（收稿日期：2021-11-18修回日期：2022-03-09）

（編輯：梁明佩）124698E7-26CF-40DB-9D52-26B87174CA0F