高效液相色譜法測定小麥粉中過氧化苯甲酰的含量

摘要：本文使用島津高效液相色譜儀，建立了測定過氧化苯甲酰在小麥粉中含量的方法。本方法使用C18色譜柱，乙酸銨/甲醇=90/10 （v/v）為流動相進行等度洗脫，二極管陣列檢測器檢測。過氧化苯甲酰在5.0～100毫克/公斤的濃度范圍內具有良好的線性，相關系數為0.9998，方法檢出限為0.11毫克/公斤，定量限為0.36毫克/公斤。將標準溶液配制成不同濃度連續進樣6次開展精密度實驗，6次保留時間實驗結果的相對標準偏差低于0.10%，6次峰面積實驗結果的相對標準偏差低于2.27%，實驗結果表明儀器精密度良好。實際樣品添加不同濃度，回收率為96.8%～97.0%，結果表明方法準確可靠。

關鍵詞：小麥粉；過氧化苯甲酰；高效液相色譜；二極管陣列檢測器

過氧化苯甲酰（簡稱BPO）是一種面粉改良劑，具有強氧化性，這種強氧化性不僅對面粉有顯著的增白作用，還有殺菌防腐作用。因此可以對面粉的筋力及色澤起到改善作用，并將面粉的質量等級提高，顯著提升經濟效益，許多國家也因為這些原因選擇其作為一種常用食品添加劑。但將過氧化苯甲酰過多的加入到面粉中會對面粉的營養進行破壞，從而導致面粉中的一些天然成分，如類胡蘿卜素、葉黃素等喪失。長期過量使用這種面粉會使肝臟的負擔加重，引發多種并發癥；就算短期過量食用這種面粉也會讓人中毒，產生神經衰弱、惡心、頭暈等現象，因此對過氧化苯甲酰在小麥粉中的添加量需要嚴格控制。目前不同國家和地區針對BPO的法規不盡相同。美國對BPO在小麥粉中使用無最大使用量限制；加拿大規定BPO在小麥粉中最大使用量為150毫克/公斤；日本批準的最大使用量為300毫克/公斤；而歐盟禁止使用BPO。我國衛生部等多個部門在2011年3月1日發出公告，自2011年5月1日起，禁止在面粉中添加BPO。本文將標準《GBT 22325-2008 小麥粉中過氧化苯甲酰的測定高效液相色譜法》作為參考，采用島津LC-20A高效液相色譜儀，建立了測定過氧化苯甲酰在小麥粉中含量的方法，本方法具有靈敏度高、操作簡便的特點。

1.1 儀器

本實驗使用島津高效液相色譜儀LC-20A，包括CBM-20A 系統控制器，LC-20AT高精度溶液輸送泵，DGU-20A5在線脫氣機，SIL-20AC自動進樣器，SPD-20A二極管陣列檢測器。

1.2 分析條件

色譜柱：C18柱，4.6毫米×150毫米， 5微米；流動相：A-20毫摩爾/升乙酸銨，B-甲醇，A/B=90/10 （v/v） ；流速：0.8毫升/分鐘；洗脫方式：等度洗脫；檢測波長：190～370納米；進樣量：10微升。

1.3 樣品處理

苯甲酸基質工作曲線的配制：標準工作溶液配制。用甲醇配制1毫克/毫升的標準溶液，用甲醇稀釋成25.0微克/毫升、50.0微克/毫升、100.0微克/毫升、200.0微克/毫升、400微克/毫升、500.0微克/毫升的標準溶液系列濃度點，將標準《GBT22325-2008小麥粉中過氧化苯甲酰的測定高效液相色譜法》作為參照進行基質加標，基質加標具體濃度見表1。

試樣的制備：稱取5克（準確至0.1毫克）樣品置于50毫升具塞比色管中，加10.0毫升甲醇，在渦旋混合器上混勻1分鐘，混勻后靜置5分鐘，然后加入質量分數為50%的碘化鉀水溶液5.0毫升，在渦旋混合器上混勻1分鐘，混勻后靜置10分鐘。最后加水至50.0毫升，混勻，靜置，離心，然后吸取上層清液并通過0.22微米濾膜，將濾液承接入樣品瓶中備用。

2.1 標準譜圖

2.2 線性關系

由圖3可以看出在5～100毫克/公斤的濃度范圍內，苯甲酸的線性相關性良好，相關系數為0.9998，以5毫克/公斤進行低濃度實驗，計算方法檢出限為0.11毫克/公斤，定量限為0.36毫克/公斤。

2.3 精密度實驗

將標準溶液配制成不同濃度連續進樣6次進行測定，考察儀器的精密度，結果顯示不同濃度標準溶液的保留時間及峰面積實驗結果的相對標準偏差分別在0.05%～0.10%和0.24%～2.27%之間，儀器精密度良好。

2.4 基質加標實驗

按照1.3所述試樣的制備步驟處理空白小麥粉，圖4為空白基質色譜圖，圖5為基質加標的樣品色譜圖，由圖可知，小麥粉基質并未干擾到目標物的定量，且結果顯示回收率均在95%以上。

本實驗使用島津高效液相色譜儀（LC-20A），建立了測定過氧化苯甲酰在小麥粉中含量的方法。過氧化苯甲酰在 5～100毫克/公斤的濃度范圍內具有良好的線性相關性，相關系數為0.9998，方法檢出限為0.11毫克/公斤，定量限為0.36毫克/公斤，靈敏度高于標準《GBT 22325-2008小麥粉中過氧化苯甲酰的測定高效液相色譜法》。向空白的基質中添加不同濃度標準溶液，回收率范圍為96.8%～97.0%，結果表明方法準確可靠。

作者簡介：王烽凡（1988-），女，碩士，工程師。研究方向：糧食、農產品檢驗檢測。