高效液相色譜法測(cè)定小麥粉中過氧化苯甲酰的含量

摘要：本文使用島津高效液相色譜儀，建立了測(cè)定過氧化苯甲酰在小麥粉中含量的方法。本方法使用C18色譜柱，乙酸銨/甲醇=90/10 （v/v）為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)。過氧化苯甲酰在5.0～100毫克/公斤的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性，相關(guān)系數(shù)為0.9998，方法檢出限為0.11毫克/公斤，定量限為0.36毫克/公斤。將標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成不同濃度連續(xù)進(jìn)樣6次開展精密度實(shí)驗(yàn)，6次保留時(shí)間實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于0.10%，6次峰面積實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于2.27%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度良好。實(shí)際樣品添加不同濃度，回收率為96.8%～97.0%，結(jié)果表明方法準(zhǔn)確可靠。

關(guān)鍵詞：小麥粉；過氧化苯甲酰；高效液相色譜；二極管陣列檢測(cè)器

過氧化苯甲酰（簡稱BPO）是一種面粉改良劑，具有強(qiáng)氧化性，這種強(qiáng)氧化性不僅對(duì)面粉有顯著的增白作用，還有殺菌防腐作用。因此可以對(duì)面粉的筋力及色澤起到改善作用，并將面粉的質(zhì)量等級(jí)提高，顯著提升經(jīng)濟(jì)效益，許多國家也因?yàn)檫@些原因選擇其作為一種常用食品添加劑。但將過氧化苯甲酰過多的加入到面粉中會(huì)對(duì)面粉的營養(yǎng)進(jìn)行破壞，從而導(dǎo)致面粉中的一些天然成分，如類胡蘿卜素、葉黃素等喪失。長期過量使用這種面粉會(huì)使肝臟的負(fù)擔(dān)加重，引發(fā)多種并發(fā)癥；就算短期過量食用這種面粉也會(huì)讓人中毒，產(chǎn)生神經(jīng)衰弱、惡心、頭暈等現(xiàn)象，因此對(duì)過氧化苯甲酰在小麥粉中的添加量需要嚴(yán)格控制。目前不同國家和地區(qū)針對(duì)BPO的法規(guī)不盡相同。美國對(duì)BPO在小麥粉中使用無最大使用量限制；加拿大規(guī)定BPO在小麥粉中最大使用量為150毫克/公斤；日本批準(zhǔn)的最大使用量為300毫克/公斤；而歐盟禁止使用BPO。我國衛(wèi)生部等多個(gè)部門在2011年3月1日發(fā)出公告，自2011年5月1日起，禁止在面粉中添加BPO。本文將標(biāo)準(zhǔn)《GBT 22325-2008 小麥粉中過氧化苯甲酰的測(cè)定高效液相色譜法》作為參考，采用島津LC-20A高效液相色譜儀，建立了測(cè)定過氧化苯甲酰在小麥粉中含量的方法，本方法具有靈敏度高、操作簡便的特點(diǎn)。

1.1 儀器

本實(shí)驗(yàn)使用島津高效液相色譜儀LC-20A，包括CBM-20A 系統(tǒng)控制器，LC-20AT高精度溶液輸送泵，DGU-20A5在線脫氣機(jī)，SIL-20AC自動(dòng)進(jìn)樣器，SPD-20A二極管陣列檢測(cè)器。

1.2 分析條件

色譜柱：C18柱，4.6毫米×150毫米， 5微米；流動(dòng)相：A-20毫摩爾/升乙酸銨，B-甲醇，A/B=90/10 （v/v） ；流速：0.8毫升/分鐘；洗脫方式：等度洗脫；檢測(cè)波長：190～370納米；進(jìn)樣量：10微升。

1.3 樣品處理

苯甲酸基質(zhì)工作曲線的配制：標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制。用甲醇配制1毫克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用甲醇稀釋成25.0微克/毫升、50.0微克/毫升、100.0微克/毫升、200.0微克/毫升、400微克/毫升、500.0微克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列濃度點(diǎn)，將標(biāo)準(zhǔn)《GBT22325-2008小麥粉中過氧化苯甲酰的測(cè)定高效液相色譜法》作為參照進(jìn)行基質(zhì)加標(biāo)，基質(zhì)加標(biāo)具體濃度見表1。

試樣的制備：稱取5克（準(zhǔn)確至0.1毫克）樣品置于50毫升具塞比色管中，加10.0毫升甲醇，在渦旋混合器上混勻1分鐘，混勻后靜置5分鐘，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的碘化鉀水溶液5.0毫升，在渦旋混合器上混勻1分鐘，混勻后靜置10分鐘。最后加水至50.0毫升，混勻，靜置，離心，然后吸取上層清液并通過0.22微米濾膜，將濾液承接入樣品瓶中備用。

2.1 標(biāo)準(zhǔn)譜圖

2.2 線性關(guān)系

由圖3可以看出在5～100毫克/公斤的濃度范圍內(nèi)，苯甲酸的線性相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9998，以5毫克/公斤進(jìn)行低濃度實(shí)驗(yàn)，計(jì)算方法檢出限為0.11毫克/公斤，定量限為0.36毫克/公斤。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

將標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成不同濃度連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行測(cè)定，考察儀器的精密度，結(jié)果顯示不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間及峰面積實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.05%～0.10%和0.24%～2.27%之間，儀器精密度良好。

2.4 基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)

按照1.3所述試樣的制備步驟處理空白小麥粉，圖4為空白基質(zhì)色譜圖，圖5為基質(zhì)加標(biāo)的樣品色譜圖，由圖可知，小麥粉基質(zhì)并未干擾到目標(biāo)物的定量，且結(jié)果顯示回收率均在95%以上。

本實(shí)驗(yàn)使用島津高效液相色譜儀（LC-20A），建立了測(cè)定過氧化苯甲酰在小麥粉中含量的方法。過氧化苯甲酰在 5～100毫克/公斤的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.9998，方法檢出限為0.11毫克/公斤，定量限為0.36毫克/公斤，靈敏度高于標(biāo)準(zhǔn)《GBT 22325-2008小麥粉中過氧化苯甲酰的測(cè)定高效液相色譜法》。向空白的基質(zhì)中添加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，回收率范圍為96.8%～97.0%，結(jié)果表明方法準(zhǔn)確可靠。

作者簡介：王烽凡（1988-），女，碩士，工程師。研究方向：糧食、農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)。